GHRP-6温敏型缓释凝胶的制备及其对獭兔生长和皮张品质的作用

【摘要】生长激素释放肽-6(Growthhormonereleasingpeptide6，GHRP-6)是一种由六个氨基酸构成的多肽，具有促进动物生长，提高动物生产性能和免疫力等多种生物学作用，并且对毛皮动物皮张品质的提高有一定的促进作用，但GHRP-6半衰期短，在体内易被酶水解，制约了其在畜牧业生产中的开发与应用，因此有必要开发一种长效的GHRP-6缓释制剂。本实验合成了三嵌段共聚物聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸(Poly(lactic-co-glycolicacid)-Poly(ethyleneglycol)-Poly(lactic-co-glycolicacid)，PLGA-PEG-PLGA)，以这种共聚物为载体制备了可注射的GHRP-6缓释凝胶制剂；进行体外缓释实验，分析了GHRP-6在共聚物中的释放机制，并通过X射线衍射和红外光谱分析研究了GHRP-6与共聚物的相互作用；将獭兔作为实验动物，研究了GHRP-6缓释凝胶对獭兔增重和皮张品质的影响。本实验采用开环聚合法成功合成了PLGA-PEG-PLGA共聚物，通过核磁共振氢谱，红外光谱，凝胶渗透色谱对共聚物的表征进行分析，共聚物的结构与目标产物相符，可用于进一步研究。采用试管倒置法测定了共聚物水溶液的相变温度，结果表明不同质量分数的共聚物水溶液的相变温度均在生理温度范围内，适合体内给药，且随着共聚物质量分数的增加，从溶液态向凝胶态转变的温度逐渐降低，从凝胶态向沉淀态转变的温度逐渐升高。小鼠急毒性实验和最大耐受量实验结果表明，小鼠在注射共聚物溶液后的14d内没有出现异常和死亡，且皮下注射和肌肉注射的最大耐受量分别为人用剂量的1250与250倍，说明共聚物的毒性极低，对动物体内给药是安全的。制备了以PLGA-PEG-PLGA共聚物为载体的GHRP-6凝胶缓释制剂，研究了GHRP-6在凝胶中的体外释放，并考察了不同质量分数共聚物溶液，不同载药量，不同分子量蛋白对释放速率的影响，结果表明该制剂有良好的缓释效果，缓释时间最长可达18d，且随着共聚物质量分数的增加，释放速率降低；随着药物浓度的增加，释放速率增加；随蛋白分子量的增加，释放速率降低。GHRP-6的释放曲线符合Korsmeyer-Peppas方程模型，在凝胶中的释放机制为药物扩散和凝胶降解相结合的作用机制。x射线衍射、红外光谱分析证明共聚物与GHRP-6分子间有氢键作用。分别给獭兔一次性皮下注射空胶、生理盐水、GHRP-6溶液和GHRP-6凝胶溶液，考察了GHRP-6凝胶对獭兔生长的作用，结果表明GHRP-6凝胶可显著提高獭兔血清中IGF-1水平，平均日增重和累积增重。注射GHRP-6凝胶7、14、21和28d后血清IGF-1水平分别比空胶组高15.85%(P<0.001)、15.1%(P<0.001)、16.81%(P<0.001)和7.60%(P<0.05)；注射GHRP-6凝胶7，14和21d后平均日增重分别比空胶组高68.35%(P<0.001)、85.97%(P<0.001)和68.34%(P<0.001)；注射GHRP-6凝胶28d后累积增重比空胶组高62.77%(P<0.001)，比GHRP-6溶液组高25.44%(P<0.01)。皮张品质分析结果表明GHRP-6凝胶组的皮张面积与空胶组相比差异显著(P<0.05)，被毛密度与GHRP-6溶液组相比差异显著(P<0.05)，与空胶组相比差异极显著(P<0.01)，说明GHRP-6凝胶对獭兔皮张品质的提高有促进作用。
【作者】官员；
【导师】刘松财；
【作者基本信息】吉林大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】GHRP-6；PLGA-PEG-PLGA；缓释；促生长；

【参考文献】
[1]王庆博.青州市黑虎山水库除险加固工程研究与设计[D].山东大学,水利工程（专业学位）,2012,硕士.
[2]张金明,李人厚.模糊控制的系统化设计和稳定性分析[J].自动化学报,1999,04:65-69.
[3]王菘如.高容量锂离子电池三元正极材料的合成和性能研究[D].华中科技大学,材料工程,2013,硕士.
[4]陈晓庆.大学生道德自律问题研究[D].华中科技大学,思想政治教育,2012,硕士.
[5]沈苏莉.从碎片化到协同:农村垃圾的治理[J].特区经济,2014,05:156-158.
[6]雷育生,甘仞初,杜顶.基于用户偏好的垂直网站自适应结构研究[J].计算机工程,2005,24:18-20+35.
[7]李晓峰.论农村社会管理创新的法律保障[D].山东大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[8]顾鑫.个性化智能信息检索系统研究[D].哈尔滨工程大学,2004.
[9]赵丽萍.Ce及Ce-Zn共掺杂二氧化钛薄膜的制备及光催化性质的研究[D].燕山大学,材料工程,2013,硕士.
[10]董春娇.多状态下城市快速路网交通流短时预测理论与方法研究[D].北京交通大学,2011.
[11]刘宇同.知识管理在高中物理学习中的应用研究[D].华中师范大学,2005.
[12]胡映东.城市枢纽站域开发的必要性研究[J].华中建筑,2014,05:24-28.
[13]朱光前.中国木材市场现状、存在问题和发展建议[J].林产工业.2003(02)
[14]蒋浩.再生混凝土框架梁抗震性能试验研究[D].北京建筑大学,结构工程,2013,硕士.
[15]姚尧.二化螟及其寄生蜂二化螟盘绒茧蜂鱼尼丁受体的基因克隆与序列分析[D].浙江大学,植物保护,2013,硕士.
[16]闫蔚.面向装配的CAD系统标准件建库工具[D].天津大学,机械制造及自动化,2004,硕士.
[17]代明.基于SVM的新型异步电机DTC研究[D].华中科技大学,控制工程,2013,硕士.
[18]陈颖皓.对一例46，XY完全性腺发育不良患者的遗传学研究[D].南京师范大学,生物技术,2012,硕士.
[19]明立花.人·女人·个人——试论五四女作家的三种女性价值取向[D].吉林大学,中国现当代文学,2004,硕士.
[20]常骏.基于LotusNotes的气象业务管理系统[D].内蒙古大学,2003.
[21]钱赛.普莱克斯八万立方空分控制系统设计与实现[D].华东理工大学,仪器仪表工程,2014,硕士.
[22]胡江平,刘志新,王金环,王琳,胡晓明.多智能体系统的估计、干预及非线性耦合算法(英文)[J].自动化学报,2013,11:1796-1804.
[23]魏长江.声波测井的探测深度及侵蚀作用对声波时差测量的影响[J].石油地球物理勘探,1990,05:529-537+646.
[24]仇艳肖.黄瓜灰霉病高效拮抗菌的筛选鉴定及其作用研究[D].河北师范大学,微生物学,2012,硕士.
[25]肖伟,沈金星.ASP:一种方兴未艾的软件提供模式[J].广东省经济管理干部学院学报.2002(01)
[26]娜仁其其格.《孤儿舌战成吉思汗九员大将》的逻辑思维研究[D].内蒙古师范大学,逻辑学,2013,硕士.
[27]郑伟.P. yoelii 17XL感染DBA/2小鼠保护性免疫机制的研究[D].中国医科大学,免疫学,2004,硕士.
[28]刘红霞.CH_4/CO_2重整制备合成气NiO/γ-Al_2O_3催化剂研究[D].新疆大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[29]郑妮娜.莫尼公司NPI项目经理胜任素质模型构建研究[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[30]欧松.复杂金融产品设计与仿真技术综述与展望[J].系统仿真学报,2005,12:3019-3024.
[31]戚伟岸.多轴联动数控磨齿机主轴转速跟踪误差分析与实时补偿研究[D].南京理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[32]谢丹.沈阳用友软件公司薪酬体系设计与实施[D].哈尔滨理工大学,工商管理,2012,硕士.
[33]郭向莹.超高压处理对低温鸡肉早餐肠脂肪氧化及挥发性醛类风味物质的影响[D].南京农业大学,食品科学,2013,硕士.
[34]刘伟.排球规则演变研究[D].湖南师范大学,体育教育训练学,2004,硕士.
[35]梁利华,王保华,贾鹤鸣.基于干扰观测器的SWATH船运动非线性预测控制[J].控制与决策,2014,03:431-436.
[36]张旭.基于XML的动态联盟工作流管理系统InFlow-设计与实现[D].中国科学院研究生院（软件研究所）,2002.
[37]张婉明,李琦.基于RTP协议的嵌入式网络视频传输系统[J].电子制作,2015,04:64-65.
[38]侯珊珊.长沙近代教会建筑研究[D].湖南大学,建筑设计及其理论,2011,硕士.
[39]张丽娟,纪峰.基于压缩感知的图像去噪的综述[J].电子技术与软件工程,2014,18:125-126+238.
[40]张俊珊.铁水联运适箱货物品类标准研究[D].西南交通大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[41]黄进华.试析1947年的黄金风潮[D].中国社会科学院研究生院,中国近现代史,2003,硕士.
[42]郭筱王.氯离子通道阻断剂DIDS对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响[D].第四军医大学,老年医学（专业学位）,2014,硕士.
[43]潘胜东,叶美君,金米聪.磁性固相萃取在食品安全检测中的应用进展[J].理化检验(化学分册),2015,03:416-424.
[44]王君丽.有加工权限平行机在线问题研究[D].浙江大学,应用数学,2012,硕士.
[45]董全英.海南五指山国家级自然保护区附生兰科植物生态习性研究[D].华东师范大学,植物学,2013,硕士.
[46]陈菲菲,王勇,王以光,赫卫清.海洋微生物来源的天然产物开发研究进展[J].应用与环境生物学报,2011,02:287-294.
[47]贺靓娴.委婉语翻译的语域功能对等[D].湖南科技大学,外国语言文学,2013,硕士.
[48]涂军明.长江流域早稻稻瘟病抗性分子改良育种[D].中国农业科学院,作物（专业学位）,2012,硕士.
[49]曹聿明,李冬梅.优化模型道剩余静校正[J].石油地球物理勘探,1996,S2:60-66+79-151.
[50]李邦跃.进出口结构和价格对通货膨胀的影响研究[D].广东财经大学,金融学,2014,硕士.