重构大鼠脊髓星形胶质细胞骨架对AQP4和Kir4.1基因表达影响的实验研究

【摘要】目的：探讨大鼠脊髓星形胶质细胞体外分离、纯化及培养条件,并对其进行鉴定；探讨不同浓度微丝聚合齐Jasplakinolide(JSK)和不同浓度的微丝解聚剂细胞松弛素D(CytochalasinD,CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞的细胞骨架的影响；探讨JSK及CytD对大鼠脊髓星形胶质细胞AQP4和Kir4.1基因表达的影响。方法：取新生SD大鼠10只,在无菌条件下分离出脊髓组织,体外培养原代大鼠脊髓星形胶质细胞,并采用免疫荧光法检测GFAP蛋白的表达对星形胶质细胞进行鉴定；将星形胶质细胞分为JSK实验组和CytD实验组并设立空白对照组。JSK实验组采用浓度为0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml的JSK分别干预细胞2h、12h和24h；对于CytD组采用浓度为0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml和1.00μg/ml的CytD分别干预细胞2h、12h和24h,MTT法检测不同浓度的JSK及CytD对大鼠星形胶质细胞的增殖的影响；采用鬼笔环肽和Hoechst33342染色,激光共聚焦显微镜观察不同浓度的JSK及CytD对星形胶质细胞细胞骨架的影响；Real-timePCR法检测不同浓度的JSK及CytD对星形胶质细胞中AQP4和Kir4.1mRNA的表达水平的影响。结果：大鼠星形胶质细胞体外培养14天后,细胞铺满培养皿,GFAP蛋白表达阳性率为90,符合进一步实验要求；MTT检测结果显示,与空白对照组相比,应用浓度为JSK0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml干预细胞2h后,细胞的抑制率无明显差异(P>0.05),干预细胞12h和24h后具有统计学意义(P<0.05);CytD组MTT结果显示,0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度的CytD干预2h后,细胞的抑制率无明显差异(P>0.05),干预细胞12h和24h后具有统计学意义(P<0.05)；激光共聚焦显微镜观察结果显示,各浓度的JSK作用于星形胶质细胞2h后,均能使细胞微丝发生团聚,各CytD作用大鼠脊髓星形胶质细胞2h后,微丝发生解聚、弯曲,但极性未失；Real-timePCR检测显示,在0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml、0.40μg/ml浓度的JSK作用2h后,可以显著降低细胞中AQP4和Kir4.1基因的表达,与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05);而0.05μg/ml、0.10μg/ml、0.20μg/ml和0.40μg/ml浓度的CytD能够上调AQP1、AQP4和Kit4.1基因的表达与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论：大鼠脊髓星形胶质细胞可以进行体外培养；JSK和CytD可使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生重构；JSK和CytD分别可以下调AQP4和Kir4.1基因的表达及上调AQP4和Kir4.1基因的表达。
【作者】杜文佳；
【导师】汪玉良；
【作者基本信息】兰州大学，外科学，2014，硕士
【关键词】星形胶质细胞；细胞骨架；水通道蛋白；

【参考文献】
[1]徐春玲.刺五加叶活性成分研究及其产品开发[D].吉林农业大学,中药学,2012,硕士.
[2]徐晓.淡水螺类对湿地微生物介导的甲烷排放的影响[D].上海师范大学,微生物学,2013,硕士.
[3]吕文清.沉默权及其本土化问题探讨[D].中国政法大学,诉讼法学,2004,硕士.
[4]武志婷.脱水废泥在垃圾填埋场中作为防渗层材料干燥收缩特性的研究[D].东华大学,环境工程（专业学位）,2014,硕士.
[5]桑学苓.高位阻手性钌卟啉的合成及其催化C-H羟基化及胺化反应的研究[D].华中师范大学,有机化学,2014,硕士.
[6]贾荣涛.企业软件开发管理系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[7]杨璐璐.投资者关系管理与权益资本成本相关性分析[D].山东财经大学,会计学,2014,硕士.
[8]陈砚.从“痕迹”出发[D].重庆大学,艺术（专业学位）,2014,硕士.
[9]WilliemenaPinkyAppleton.The Role of Truth and Reconciliation Commission in Promoting Justice and Sustainable Peace for Post Conflict Liberia[D].外交学院,InternationalRelations,2014,硕士.
[10]周佳盼,米红宇,王吉德,徐友龙,崔青霞.导电聚合物的电化学制备及其应用研究进展[J].化学研究与应用,2014,07:961-966.
[11]潘伊玫.杭州旅游“夜经济”营销探析[D].北京第二外国语学院,旅游管理,2013,硕士.
[12]董事壁.高浓度润滑剂废水处理的试验研究与工程实践[D].浙江大学,环境工程,2013,硕士.
[13]魏士东.氯化铵甲醇法合成氯甲烷过程实验研究[D].河北科技大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[14]胡波.超声（磁化）TiO_2光催化降解酸性红染料废水的研究[D].武汉理工大学,环境工程,2004,硕士.
[15]姚森.长春市高职院校篮球教学现状及对策研究[D].吉林大学,体育教育,2014,硕士.
[16]李媛.存在主义视角下的《第二十二条军规》[D].河北师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[17]周俊.热源厂房不同通风方式的比较研究[D].东华大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2013,硕士.
[18]郝生宾,于渤,吴伟伟.企业网络能力与技术能力的耦合度评价研究[J].科学学研究,2009,02:250-254.
[19]岑健,胥布工,张清华,邵龙秋.免疫检测器证据理论集成的机组复合故障诊断[J].控制与决策,2011,08:1248-1252+1258.
[20]王勇猛.硫化氢参与异源性慢性应激诱发内脏痛的分子机制研究[D].苏州大学,神经生物学,2013,硕士.
[21]牟洪臣.干旱区棉花膜下滴灌条件下土壤水、盐、温度变化规律研究[D].新疆农业大学,农业水土工程,2012,硕士.
[22]齐梅,郑小武,王根久,贾芬淑,李星民,殷茵.秘鲁1AB老油田强天然水驱油藏剩余油分布规律研究[J].石油地球物理勘探,2008,S1:158-162+196+13.
[23]冯喆.欧洲体育发展方式改革研究[D].华东师范大学,体育人文社会学,2013,硕士.
[24]张水平.胡椒叶抗氧化能力分析及其活性成分分离鉴定[D].华中农业大学,食品科学,2014,硕士.
[25]陈婷.中国上市公司财务重述动因研究[D].兰州大学,会计学,2013,硕士.
[26]朱润.多媒体文件数据雕刻关键技术研究[D].上海交通大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[27]覃溧.文化导入在对外汉语听说课中的应用模式及教案设计[D].华中师范大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[28]张宇.斯特拉文斯基《意大利组曲》与肖斯塔科维奇《大提琴奏鸣曲》演奏技巧比较之研究[D].天津音乐学院,音乐表演,2013,硕士.
[29]路坤娜.先天性甲状腺功能减低伴甲状腺肿大患者DUOX2基因突变筛查及其分子致病机理的初步研究[D].青岛大学,内分泌与代谢病,2013,硕士.
[30]张莉.我国铁路货物运输业发展研究[D].北京交通大学,2007.
[31]古迎冬.基于视频的实时测量技术研究[D].北方工业大学,应用数学,2014,硕士.
[32]王雷,李道飞,叶锦,徐焕祥,俞小莉.车用发动机压缩空气制动循环特性[J].浙江大学学报(工学版),2014,01:56-62.
[33]张摘月,王峰.数据仓库技术在基层人民银行的应用研究[J].中国金融电脑,2001,08:72-74.
[34]杨丹.大庆市大同区土地利用转型研究[D].东北农业大学,农业遥感与土地利用,2013,硕士.
[35]胡奕明,沈光明,岑江华.见解的独到性与预示性——关于我国证券分析师分析能力的实证研究[J].中国会计评论,2005,02:287-308.
[36]李录明,罗省贤.复杂三维表层模型层析反演与静校正[J].石油地球物理勘探,2003,06:636-641+708-579.
[37]李艳.网络拓扑发现与节点状态监测系统研究[D].长安大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[38]汪洁.碳纳米管的超声喷雾法制备及改性壳聚糖膜的研究[D].湖南大学,2014.
[39]许迈进,章瑚纬.研究型大学教师应具备怎样的教学能力?——基于扎根理论的质性研究探索[J].浙江大学学报(人文社会科学版),2014,02:5-15.
[40]毛柞康,俞忠明,林家生.福建省纺织工业发展现状与展望[J].海峡科学.2007(01)
[41]陈继红.GIS与遥感结合实现虚拟现实方法初探[J].石油地球物理勘探,2003,S1:113-118+138.
[42]李楠.轴流通风机叶片切割性能的研究[D].东北大学,热能工程,2010,硕士.
[43]丘伟强.MEMS压力传感器晶片贴片强度研究[D].清华大学,材料工程（专业学位）,2013,硕士.
[44]于灏.路由器中CAM控制器的设计与验证[D].哈尔滨工业大学,集成电路工程,2014,硕士.
[45]杨晓峰.幼儿园中华文化启蒙教育环境创设探究[D].山东师范大学,学前教育（专业学位）,2013,硕士.
[46]张安珍.论网络环境下的智能信息服务[J].情报理论与实践,2004,06:659-662.
[47]姜俊,张春雨,赵秀海.吉林蛟河42hm~2针阔混交林样地植物种-面积关系[J].植物生态学报,2012,01:30-38.
[48]杨智永.环境梯度上植物群落组成的时间周转模式及正相互作用的影响[D].兰州大学,生态学,2013,硕士.
[49]刘远洋.企事业单位后勤管理系统人机界面（HMI）及数据库设计[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[50]熊四皓,牛中允,张有兰.接入网远端设备Z接口技术要求[J].电信网技术.2000(05)