MODS患者血清对内皮细胞氧化损伤的影响及GSH的保护作用

【摘要】目的探讨多器官功能障碍综合征(：multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS)患者血清对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC)氧化损伤的影响及还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)的保护作用。方法选择MODS患者20例,用其血清与RPMI-1640培养基配制成细胞培养液后培养HUVEC,建立体外细胞损伤模型,同时以健康志愿者血清组和胎牛血清组做对照组,将细胞分为正常对照组(A组)、健康血清组(B组)、MODS血清损伤组(MODS患者血清浓度分别为C1组：5%、C2组：10%、C3组：20%)和GSH干预组(GSH终浓度为D1组：0.064mmol/L、D2组：0.32mmol/L、D3组：16mmol/L、D4组：8.0mmol/L、D5组:40mmol/L)。采用MTT法检测各组细胞生存率；荧光倒置显微镜下观察B组和C2组HUVEC形态学变化；分别检测B组、C2组和D3组药物干预24h、48h、72h后细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及总抗氧化能力(T-AOC)水平,同时用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平。结果1.B组与A组比较,细胞生存率无差异(P>0.05)；与B组比较,C1、C2、C3组细胞生存率显著下降(P<0.05),D2、D3、D4组细胞生存率与C2组比较明显升高(P<0.05)2.C2组HUVEC荧光倒置显微镜下可见损伤性改变,细胞变大变圆、界限模糊、胞体碎裂、部分细胞脱落；3.与B组比较,C2组细胞培养上清液SOD、CAT、GSH-Px活力及T-AOC水平C2组明显下降,而D3组各时间点较C2组均显著升高,其中以药物干预72h后升高最显著；4.细胞内ROS水平C2组较B组显著升高,D3组加药后各时间点ROS水平较C2组明显降低,其中以药物干预72h后下降最显著。结论MODS患者血清可造成内皮细胞损伤,外源性GSH可通过提高SOD、CAT、GSH-Px活力及T-AOC水平,降低细胞内ROS水平,从而发挥内皮细胞保护作用,减轻血管内皮细胞的氧化损伤。
【作者】张哲英；
【导师】马莉；
【作者基本信息】兰州大学，急诊医学，2014，硕士
【关键词】多器官功能障碍综合征；氧化应激；还原型谷胱甘肽；人脐静脉内皮细胞；

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