负性共刺激分子B7-H4与PI3K/AKT信号通路相关性及机制的研究

负性共刺激分子B7-H4与PI3K/AKT信号通路相关性及机制的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2022-05-17 分类:参考文献 喜欢:2774
师大云端图书馆

【摘要】B7-H4分子是B7家族共刺激分子家族的一员,能负性调控T细胞免疫反应。早期的研究证明,B7-H4是跨膜蛋白,参与调节免疫反应。本实验室的前期研究发现,B7-H4分子含有核定位序列(NLS),能够穿梭于细胞质与细胞核之间。细胞膜上表达的B7-H4分子已被证实可通过抑制T细胞的增殖来促进肿瘤的生长,而对细胞核B7-H4分子的研究并不多见,个别研究发现,细胞内B7-H4分子与细胞的增殖和凋亡相关。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路与细胞的生长、增殖和肿瘤的发生、发展密切相关,并且会参与细胞内一些蛋白分子的转位。研究发现,B7-H4可以通过抑制活化T细胞中的AKT信号通路,影响T细胞的增殖,但是,对于PI3K/AKT信号通路对B7-H4亚细胞定位的调节作用尚不清楚。本研究旨在构建B7-H4野生型与核定位序列突变型稳定转染的细胞株,初步研究各稳转细胞株的生物活性,并以野生型B7-H4稳转细胞株为研究对象,通过控制PI3K/AKT信号通路的活性,探讨其与B7-H4亚细胞定位的关系。本论文主要包括以下两部分内容:一、人B7-H4基因转染细胞株的构建及其生物学功能的初步研究
【作者】宋慧;
【导师】章良;
【作者基本信息】苏州大学,微生物与生化药学,2014,硕士
【目的】构建B7-H4WT/293、B7-H4H250Q/293和Mock/293稳定转染细胞株,并对其生物学功能进行初步研究。
【方法】将野生型B7-H4基因(B7-H4-WT)、突变体B7-H4基因(B7-H4-MT)和真核质粒pIRES2-EGFP基因用脂质体共转染法分别转染进入HEK/293细胞,经G418加压筛选,分别用流式细胞术鉴定稳定转染细胞株,通过免疫荧光观测经LMB处理后的B7-H4WT/293和B7-H4H250QMT/293中B7-H4定位情况,并通过体外增殖率分析实验和SCID鼠异种移植成瘤实验检测各转基因细胞的体内和体外增殖率。
【结果】构建了三株稳定转染的细胞株:B7-H4WT/293、B7-H4H250Q/293和Mock/293,免疫荧光结果验证了人B7-H4核定位序列的存在,对体内和体外生物学功能的研究显示,细胞核B7-H4对细胞增殖有促进作用。
【结论】成功构建了三株稳定转染的细胞,为进一步研究细胞核B7-H4的作用机制提供了有效地研究工具。二、PI3K/AKT信号通路对B7-H4亚细胞定位调节作用的研究
【目的】探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对负性共刺激分子B7-H4亚细胞定位的调控作用。
【方法】体外培养稳定转染B7-H4WT/293细胞株,采用PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002处理细胞后,免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜检测B7-H4蛋白在B7-H4WT/293细胞中亚细胞定位的变化;Westernblot法检测分别用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002、PI3K/AKT信号通路活化剂IGF-1、PI3K/AKT信号通路下游mTORC1抑制剂Rapamycin和PI3K/AKT信号通路下游MDM2抑制剂Nutlin-3处理后,B7-H4蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核中量的变化。
【结果】激光共聚焦显微镜观察结果显示,PI3K抑制剂LY294002作用于B7-H4稳定转染的B7-H4WT/293细胞株后,与空白对照组相比,B7-H4发生核转移,加入出核转运抑制剂LMB后,核转移的程度显著增加;Westernblot结果显示,LY294002抑制PI3K/AKT信号通路活性24h后,B7-H4在细胞膜和细胞质中的定位均显著性降低(P<0.05),而细胞核中B7-H4的定位显著升高(P<0.05);IGF-1活化PI3K/AKT信号通路后,B7-H4在细胞膜的定位显著增加,与LY294002作用结果相反,说明PI3K/AKT信号通路参与调节B7-H4的亚细胞定位。Rapamycin作用后B7-H4定位变化与LY294002作用类似,但Nutlin-3作用后,B7-H4的定位并没有发生显著变化,提示PI3K/AKT信号通路对B7-H4亚细胞定位的调节可能通过PI3K-AKT-mTORC1途径参与介导。
【结论】PI3K/AKT信号通路参与调控B7-H4分子在亚细胞水平的定位,并且这一调节作用可能由PI3K-AKT-mTORC1途径参与介导。
【关键词】B7-H4;细胞增殖;PI3K/AKT信号通路;亚细胞定位;核转移;

【参考文献】
[1]蒋家平.论大学之道德[J].学校党建与思想教育.2002(09)
[2]朱其新,胡寿松.网络控制系统的能控性和能观性[J].控制与决策,2004,02:157-161.
[3]朱建平,范霄文,张志强.数据挖掘的技术与商业定义及其研究对象[J].统计教育,2004,01:7-10.
[4]张勇.黄酮类活性成分晶体特性研究——葛根素的理化性质及多晶型[D].合肥工业大学,农产品加工与贮藏,2003,硕士.
[5]付玲.毕赤酵母表达载体pPIC9k的优化[D].湖北大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[6]吴佳,张群莉,吴国龙,姚建华.激光熔覆复合涂层中金刚石的形态转变对涂层性能的影响[J].应用激光,2015,01:14-19.
[7]赵民正.面向监控的组态软件——技术分析和设计[D].浙江大学,2002.
[8]袁玲敏.UGTs同源及异源寡聚体的形成对酶活性的影响及机理研究[D].浙江大学,药物分析学,2012,博士.
[9]柳樨,郑燕芬,祝怀新.高校教育培训品牌项目认证机制的构建[J].继续教育,2014,01:21-23.
[10]焦菲.我国地方政府融资平台债务风险问题研究[D].山东财经大学,财政学,2013,硕士.
[11]孙林玉.基于船桥碰撞的单元填充式防护结构研究[D].江苏科技大学,船舶与海洋结构物设计制造,2014,硕士.
[12]陈金龙.网络服务提供商侵权责任限制研究[D].上海师范大学,法律(专业学位),2013,硕士.
[13]储成.转基因抗虫棉对土壤微生物多样性的影响[D].南京师范大学,环境科学,2012,硕士.
[14]王宗其.中国古代证人制度及其现代借鉴意义[D].西南政法大学,诉讼法学(专业学位),2012,硕士.
[15]李大维.高中生物探究实验整合点分析及支撑平台研究[D].东北师范大学,教育技术学,2012,硕士.
[16]刘强.石油钻机自动化猫道的研究与设计[D].东北石油大学,机械工程(专业学位),2013,硕士.
[17]刘璐璐.加拿大毛豆的抗糖尿病活性研究[D].吉林农业大学,中药学,2014,硕士.
[18]何俊.基于第三方的物流运作模式研究[D].西北工业大学,2003.
[19]李少觐.危害分析和关键控制点在我国奶源建设中的应用[D].河南科技大学,食品加工与安全(专业学位),2013,硕士.
[20]武腾腾.SAR影像海面油膜识别关键技术研究[D].中国石油大学(华东),地图制图学与地理信息工程,2012,硕士.
[21]廖莎.湖南涉外经济学院协同办公平台办公资源管理系统的设计与实现[D].山东大学,软件工程(专业学位),2012,硕士.
[22]陆强.汽车线束弯曲疲劳试验中断丝损伤的检测与疲劳性能的研究[D].华东理工大学,化工过程机械,2014,硕士.
[23]王琳.高职院校学生顶岗实习的过程管理研究[D].南京师范大学,职业技术教育学,2012,硕士.
[24]霍丽群.分布式新能源储能系统工作原理展示系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[25]韩桂华.台湾文化传承与宋代福州——以临水夫人信仰及相关传统工艺为中心[J].闽江学院学报,2015,01:18-25.
[26]任冠鹏.磁场环境下45钢/TC4配副关系对摩擦磨损性能影响[D].河南科技大学,材料工程(专业学位),2014,硕士.
[27]刘全胜.基于GSM系统的移动台定位方法研究[D].大连海事大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[28]吴瑞芳.江苏省苏南地区高校体育课程建设现状研究[D].苏州大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[29]于探来.基于弱相互作用的高维数银碘酸盐骨架的合成与表征[D].山西师范大学,化学,2013,硕士.
[30]秦丽.基于SOI刻蚀衍射光栅的光谱仪的研究[D].浙江大学,光学工程,2012,硕士.
[31]陈伟.我国国有控股上市公司企业社会责任研究[D].湖北大学,伦理学,2012,硕士.
[32]刘莎.γ-癸内酯高产酵母基因工程菌的构建[D].大连理工大学,生物化工,2013,硕士.
[33]乔振国.沙利度胺联合吉西他滨对裸鼠胰腺癌细胞株(SW-1990)皮下移植瘤生长的影响[D].苏州大学,内科学,2013,硕士.
[34]杨锦伟1,2,肖新平1,郭金海1,3.正态分布区间灰数灰色预测模型[J].控制与决策.
[35]陈菊.基于ARM的医疗激光器控制系统软件设计[D].华中师范大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[36]范晓昆.K集团企业年金管理及资产配置绩效研究[D].哈尔滨工业大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[37]曾月红.新型农村合作医疗实施现状及影响因素分析[D].首都经济贸易大学,社会保障,2013,硕士.
[38]杨希.大学生批判性思维养成:课堂文化的视角[D].山东师范大学,高等教育学,2013,硕士.
[39]张倩.调肾宁神汤治疗绝经综合征(肾阴阳两虚证)的临床观察[D].湖南中医药大学,中医妇科学,2013,硕士.
[40]高华.1949年来中国工笔花鸟画艺术风格的转变研究[D].贵州师范大学,艺术学,2014,硕士.
[41]张聪颖.氮肥减量与替代对温室气体减排效果及农户意愿的研究[D].南京农业大学,农业经济管理,2011,硕士.
[42]李大义,王金凤.分级分布微型机实时控制系统在袜机提花中的应用[J].自动化学报,1986,01:62-67.
[43]王爱红.论歌唱思维在声乐教学中的运用[D].河南大学,音乐学,2004,硕士.
[44]杨志飞.设计过程质量经济分析[J].电子质量.2000(05)
[45]许华荣,王晓栋,方遒.基于B样条曲线模型的结构化道路检测算法[J].自动化学报,2011,03:270-275.
[46]甘露.广州市林政管理系统研建[D].中南林学院,森林经理学,2004,硕士.
[47]刘劲松,许云,乌达巴拉.声格固体模型地震波场模拟[J].石油地球物理勘探,1997,03:370-375+462.
[48]吴鹏.混合动力汽车自动离合器电机控制系统研究[D].燕山大学,载运工具运用工程,2014,硕士.
[49]刘海龙.新型数据包络分析模型构建及其实证研究[D].燕山大学,运筹学与控制论,2014,硕士.
[50]付曙光.合作伙伴的Web挖掘系统研究[D].辽宁工程技术大学,2005.

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