tBHQ对大鼠蛛网膜下腔出血后的脑保护和认知功能的改善作用及其机制的研究

【摘要】目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAHsubarachnoidhemorrhage）后早期脑损伤模型，并研究tBHQ对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤是否具有保护作用。方法：48只正常的健康、雄性SD大鼠，随机分成对照组，SAH组，安慰剂组以及tBHQ处理组，抽取大鼠股动脉自体血，并注入视交叉池，以建立蛛网膜下腔出血模型。tBHQ通过胃内灌注给药，剂量为12.5mg/kg，分别在SAH后2小时、12小时、24小时、36小时给药，并在蛛网膜下腔出血后48处死，取大鼠血凝块周围的皮层脑组织（额颞底）做标本，测定水肿指数和血脑屏障的变化。探讨tBHQ对大鼠蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤是否具有保护作用。结果：48小时后测定的SAH组的水肿百分数达82.50%，测定的脑组织EB含量为21.9ng/mg；而tBHQ治疗后，tBHQ组的脑水肿百分数为80.60%，脑组织的EB含量为13.6ng/mg；SAH与安慰剂组则无明显差异。结论：1.通过建立SD大鼠蛛网膜下腔出血模型，可以监测到SD大鼠蛛网膜下腔出血后48小时后脑组织水肿指数明显增加，血脑屏障明显破坏，说明SD大鼠在蛛网膜下腔出血后48小时存在早期脑损伤。2.tBHQ治疗后，能显著降低蛛网膜下腔出血后的脑水肿指数，改善血脑屏障。提示tBHQ对SD大鼠蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤具有神经保护作用。目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAHsubarachnoidhemorrhage）模型，研究tBHQ对大鼠认知功能的影响。方法：40只成年健康雄性SD大鼠，随机分为四组：正常组、SAH组、安慰剂组和tBHQ治疗组，方法同前。观察SD大鼠行为功能变化，进行神经功能评分，在SAH后48小时开始进行Morris水迷宫试验测试大鼠的认知功能。结果：1.与对照组相比，SAH组大鼠的神经认知功能、食欲及活动能力明显下降（P<0.01）；tBHQ组与安慰剂组相比，神经认知功能、食欲及活动能力明显增强（P<0.01）；SAH组和安慰剂组之间无统计学意义（P>0.05）。2.在Morris水迷宫试验中，SAH组及安慰剂组比对照组大鼠的学习记忆功能明显下降（P<0.01），而SAH组及安慰剂组无统计学差异（P>0.05）；tBHQ治疗后，大鼠的学习认知能力显著增强（P<0.01）。结论：SAH后大鼠的认知功能明显下降，tBHQ能改善SAH后大鼠的认知功能。目的：研究SD大鼠蛛网膜下腔出血后颞底皮层中Keap1/Nrf2/ARE通路及其下游的表达产物的变化以及tBHQ对此传导通路的影响，进一步探讨tBHQ对SD大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的神经保护作用的机制。方法：参照第二部分。SAH后48小时后再次麻醉大鼠，取颞底皮层组织做标本，采用TUNEL和FJB技术测定神经细胞凋亡、坏死指数；采用Westernblot法测定Keap1、Nrf2、HO-1的表达情况；EMSA法测定Nrf2的结合活性；采用免疫组化法检测Keap1、Nrf2、HO-1的表达；RT-PCR测定HO-1,NQO1和GST-α1的mRNA表达；酶活性检测NQO1、GST-α1、MDA、SOD和GSH-Px的水平。结果：TUNEL和FJB测定的神经细胞凋亡、坏死指数显示：对照组中神经细胞存在凋亡、坏死，与对照组相比，SAH组中神经细胞的凋亡、坏死指数明显升高（P<0.01）；SAH组与安慰剂组相比较，无明显差异（P>0.05）；tBHQ治疗组中神经细胞的凋亡、坏死指数明显低于SAH与安慰剂组（P<0.01）。Westernblot法测定结果显示对照组中的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表达较弱；与对照组相比，SAH组中的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的水平明显增高（P<0.05）；SAH组与安慰剂组相比，则无明显差异（P>0.05）；而tBHQ组中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表达水平比SAH和安慰剂组进一步增高（P<0.05）。EMSA结果显示：Nrf2的结合活性在对照组中较低；与对照组相比，Nrf2的结合活性在SAH组中明显增高（P<0.05）；安慰剂组与SAH组相比无明显差别（P>0.05）；tBHQ治疗后，Nrf2的结合活性比SAH组进一步增高（P<0.05）。免疫组化结果显示对照组的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的阳性率（细胞浆棕黄色染色表示阳性）较低；与对照组相比，SAH组中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的阳性率显著增高（P<0.05）；SAH组与安慰剂组相比，无明显差异（P>0.05）；而tBHQ治疗组中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的阳性率相比SAH组和安慰剂组进一步增高（P<0.05）。RT-PCR结果显示对照组中HO-1,NQO1和GST-α1的mRNA表达水平较弱；SAH组与对照组相比，HO-1,NQO1和GST-α1的mRNA表达水平明显升高（P<0.05）；SAH组与安慰剂组相比较，无明显差异（P>0.05）；而tBHQ治疗组中的HO-1,NQO1和GST-α1的mRNA表达水平明显高于SAH组（P<0.05）。酶活性检测结果显示对照组中NQO1和GST-α1的酶活性较低；SAH组和安慰剂组中NQO1和GST-α1的酶活性则显著高于对照组（P<0.05）；SAH组与安慰剂组无明显差异（P>0.05）；tBHQ组中NQO1和GST-α1的酶活性明显高于SAH组（P<0.05）。与对照组相比，SAH组中MDA的水平明显增高（P<0.05），而SOD和GSH-Px的水平则显著下降（P<0.05）；SAH组与安慰剂组无明显差异（P>0.05）；在tBHQ治疗组中，MDA水平比SAH组显著降低（P<0.05），而SOD和GSH-Px的水平比SAH组明显增高(SOD,P<0.01;GSH-Px,P<0.05)。结论：1.SAH后早期能激活Keap1/Nrf2/ARE传导通路，并激活此通路下游的表达产物从而起到神经保护作用；2.tBHQ能进一步激活Keap1/Nrf2/ARE传导通路，从而对蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤起到神经保护作用。
【作者】季骋远；
【导师】王中；
【作者基本信息】苏州大学，神经外科，2014，硕士
【关键词】蛛网膜下腔出血；早期脑损伤；tBHQ；神经功能评分；Morris水迷宫；认知功能；Keap1/Nrf2/ARE；传导通路；

【参考文献】
[1]周光斌.2005,全球电信业再奏凯歌[J].中国电信业.2005(03)
[2]盛志宏.网络传播中受众的自我伦理[D].广西大学,传播学,2004,硕士.
[3]韩方芳.人教版七年级地理教材（上册）活动系统研究[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[4]CharlesBenjaminLuhana.Electrocatalytic Properties of Metal Nanoparticles Supported on Carbon Nanostructure Materials[D].东北师范大学,AnalyticalChemistry,2012,硕士.
[5]孙晓男.高校思想政治教育客体的主体性缺失研究[D].沈阳航空航天大学,思想政治教育,2013,硕士.
[6]丁柏秀.火炮身管在线检测技术[D].长春理工大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[7]刘倩.张学良政治思想研究[D].鲁东大学,中国近现代史,2013,硕士.
[8]曾鼎乾.南海石油勘探的回顾[J].石油与天然气地质.1982(04)
[9]郭坤.迁安市可持续发展的脆弱性及其对策研究[D].天津大学,公共管理,2004,硕士.
[10]陈玉华.新型城镇化进程中城郊村”协同共治”模式研究——以浙江省东阳市为例[J].湖北社会科学,2014,10:45-49.
[11]马彦婷.胀管式缓冲器吸能特性及优化设计研究[D].燕山大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[12]王宁.浅析中国山水画的“S”构图[D].曲阜师范大学,美术学,2013,硕士.
[13]周晶晶.分式微分方程的等价性研究[D].扬州大学,应用数学,2011,硕士.
[14]聂秀锋.蔡和森报刊活动和新闻思想研究[D].湖南师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[15]吴榕.SS7电力机车再生制动的运用分析[J].铁道运营技术.2008(01)
[16]孙家奇.无线多跳网络协作路由研究[D].湖南大学,计算机科学与技术,2011,硕士.
[17]王晶.白皮松自然居群的空间遗传格局及其形成机制[D].西北大学,生态学,2013,硕士.
[18]刘洋.蒙古国留学生汉字书写偏误分析及教学建议[D].内蒙古师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[19]张泽平.WTO《政府采购协议》的采购范围研究[D].华东政法学院,国际法,2003,硕士.
[20]邓永芳.现代化境遇中的文化自觉[D].中共中央党校,马克思主义哲学,2004,硕士.
[21]史振武,赵三强.中医药工程领域研究的新进展[J].世界科学技术,2005,01:127-132+89+144.
[22]何桂芳.基于非合作博弈模型的港口竞争策略研究[D].大连海事大学,交通运输工程,2013,硕士.
[23]闫斌.三叶委陵菜乙酸乙酯部位化学成分及其质量分析研究[D].湖北中医药大学,中药学,2013,硕士.
[24]刘雄.致密油储层体积改造产能评价方法研究[D].中国地质大学（北京）,油气田开发工程,2013,硕士.
[25]丁林祥.混凝涡旋水动力学的数值模拟及试验研究[D].杭州电子科技大学,机械电子工程,2013,硕士.
[26]邱小妹.邵阳中小服装企业走品牌化之路探索[D].湖南师范大学,设计艺术学,2014,硕士.
[27]王树良,王新洲,曾旭平,史文中.滑坡监测数据挖掘视角[J].武汉大学学报(信息科学版),2004,07:608-610+627.
[28]扎西央珍.从《松花笺》的翻译看艾米·洛威尔的意象主义文学观[D].四川外国语大学,英语语言文学,2013,硕士.
[29]陈志强.建设工程招投标评标方法改进研究[D].浙江工业大学,项目管理,2012,硕士.
[30]王芙蓉.重评鸦片战争中的琦善[D].湖南师范大学,中国近现代史,2004,硕士.
[31]耿小亮.金属材料循环塑性与疲劳的初步研究[D].西北工业大学,固体力学,2004,硕士.
[32]万红敏.昆明市花卉产业发展现状和策略研究[D].南京农业大学,公共管理,2013,硕士.
[33]杨松山.高职院校财经专业应用文写作教学策略研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[34]李迎莉.两类16P~2阶群3度Cayley图的正规性[D].郑州大学,基础数学,2013,硕士.
[35]秦松.我国制造企业实施大规模定制的对策研究[D].天津财经学院,企业管理,2004,硕士.
[36]王海龙.血清TK1、TSGF、CEA、CA125及CA19-9联合检测在胃癌诊断中的临床意义[D].福建医科大学,外科学,2014,硕士.
[37]杨春丽.陕西省优势产业的选择研究[D].内蒙古大学,区域经济学,2014,硕士.
[38]颜雪松,蔡之华.一种快速聚类高维数据的算法研究[J].计算机工程,2003,01:131-132.
[39]罗启贤.牙周膜牵张与牙槽骨牵张牙移动动物实验及牙周膜牵张牙移动临床效果Meta分析[D].广州医科大学,外科学,2014,硕士.
[40]谢俊文.电池模拟器及其应用[D].华中科技大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[41]王珂.不同物种细胞色素C的抗氧化能力分析[D].天津体育学院,运动人体科学,2014,硕士.
[42]徐骏.《肖邦b小调第一钢琴谐谑曲教学初探》[D].西安音乐学院,钢琴教学与演奏,2014,硕士.
[43]林泳.基于GPU的并行协同过滤算法及其应用[D].华南理工大学,软件工程,2012,硕士.
[44]夏海玲.壬基酚对雌性SD大鼠免疫系统功能影响的研究[D].苏州大学,劳动卫生与环境卫生学,2012,硕士.
[45]杨献吉.中国财政支出结构问题研究[D].中共中央党校,政治经济学,2013,硕士.
[46]何胜男.论性犯罪中的生物性治疗[D].苏州大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[47]姜珊珊,刘艳,邢尔军.低差分模式时延少模光纤的有限元分析及设计[J].物理学报,2015,06:213-220.
[48]邓拓宇.燃烧过程状态重构及在协调控制系统优化中的应用[D].华北电力大学,控制理论与控制工程,2012,硕士.
[49]张光辉,黄卫东,魏成,倪联斌,康积伦.火焰山逆掩带成图方法探讨[J].吐哈油气.2001(01)
[50]刘明月.不同浓度β-glycerophosphate对牙髓干细胞分化的影响[D].哈尔滨医科大学,口腔临床医学,2012,硕士.