肿瘤周围浸润的PD-L1~+CD19~+B淋巴细胞在乳腺浸润性导管癌中的作用及其生物学意义

【摘要】第一部分乳腺肿瘤组织中肿瘤周围浸润的淋巴细胞上PD-1、PD-L1及肿瘤组织中PD-L1的表达情况研究目的：运用免疫组织化学方法研究乳腺良、恶性肿瘤组织中PD-L1、肿瘤周围浸润的淋巴细胞上PD-1、PD-L1的表达及其与乳腺癌临床病理参数的相关性及意义；研究肿瘤周围浸润的PD-L1+CD19+B细胞通过在乳腺癌中的调控作用及其生物学意义，为寻找乳腺癌新的治疗靶点提供理论依据。方法：收集资料完整的乳腺肿瘤标本共196例，其中浸润性乳腺癌134例，导管内原位癌15例，乳管内乳头状瘤16例，乳腺纤维腺瘤31例，应用免疫组织化学技术检测PD-L1在乳腺肿瘤组织中、肿瘤周围浸润的B淋巴细胞上的表达以及PD-1在肿瘤周围浸润的T细胞上的表达情况；并分析它们之间及其与乳腺癌临床病理参数之间的相关性。结果：（1）CD4、CD19分别主要表达于肿瘤周围浸润的T细胞和B细胞上，PD-1主要表达于肿瘤周围浸润的T细胞上，PD-L1主要表达于肿瘤细胞及肿瘤周围浸润的B细胞上。（2）随着肿瘤恶性程度的增加，PD-L1的表达率逐渐升高，差异有明显统计学意义（P=0.0026）。134例浸润性乳腺癌组织中，PD-L1阳性表达率为81.3%（109/134）；随着病理级别的增加，即肿瘤细胞分化越差，PD-L1的表达率越高，其差异有统计学意义（P=0.0102）；（3）随着肿瘤恶性程度的增加，肿瘤周围浸润的B细胞密度逐渐升高，差异有显著统计学意义（P＜0.0001）；随病理级别的增加，即肿瘤细胞分化越差，肿瘤周围浸润的B细胞密度越高，其差异具有统计学意义（P<0.0001）；（4）随着肿瘤恶性程度的增加，肿瘤周围浸润的B细胞上PD-L1的表达逐渐增加，差异有显著统计学意义（P<0.0001）；随病理分级的增加，肿瘤周围浸润的B淋巴细胞浓度逐渐增加，即肿瘤细胞分化越差，肿瘤周围浸润的B细胞浓度越高，差异具有统计学意义（P<0.0001）；（5）随着肿瘤恶性程度的增加，肿瘤周围浸润的淋巴细胞和CD4+T细胞上，PD-1的表达逐渐增加，差异有统计学意义（P＜0.0001）；（6）PD-1+CD4+T淋巴细胞中，PD-L1的阳性率达86.7%（39/45），阴性率为13.3%（6/45），差异有统计学意义（P<0.0001，kappa=0.059）；PD-1+CD4+T淋巴细胞中，PD-L1+CD19+B淋巴细胞的的阳性率达64.4%（29/45），阴性率为33.7%（16/45），差异有统计学意义（P=0.039，kappa=0.285）。结论：（1）随着乳腺肿瘤恶性程度的增加，PD-L1的表达率不断升高；同时，其表达水平的高低与乳腺癌的分化程度密切相关。（2）PD-L1在乳腺癌中的高表达和免疫治疗在肿瘤治疗中地位的提高，其有望成为肿瘤新的诊断、判断预后的重要标志物及治疗靶点，为肿瘤研究提供新的策略和途径。（3）CD19+B淋巴细胞的密度与乳腺肿瘤的恶性程度密切相关，与一些预后不良的因素，包括高度恶性肿瘤分级和ER阴性状态等具有相关性（P<0.0001，P=0.047）。（4）PD-L1+CD19+B细胞和PD-1+CD4+T细胞之间的相互作用后可能抑制CD4+T细胞的活化和促进CD4+T细胞转化为调节性T细胞，B细胞可能通过PD-1/PD-L1通路在乳腺癌发病过程中发挥着重要的调节作用。第二部分调节性B细胞与调节性T细胞相关关系的初步研究目的：运用流式细胞仪检测技术研究调节性B细胞(regulatoryBcell，Breg)与调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)之间的相互作用，进一步验证B细胞通过PD-1/PD-L1通路在乳腺癌发病中的调控作用及其生物学意义，为寻找乳腺癌新的治疗靶点提供理论依据。方法：收集健康人的外周单个核细胞，应用磁珠分选的方法分别收集CD19+B细胞、CD4+T细胞，分别使用LPS、激发型CD3和CD28抗体进行活化，将活化的B细胞与低表达PD-L1的MCF-7和高表达PD-L1的MCF-7ADR进行共培养，收集Bregs与活化的T细胞进行共育后，应用流式细胞仪检测技术检测调节性T细胞的表达情况，研究Bregs与Tregs之间的相关关系。结果：（1）乳腺浸润性导管癌患者外周血中Tregs的百分率（17.1+2.5，%）高于健康人（1.8+0.4，%）和纤维腺瘤患者（6.9+1.6，%），其差别具有统计学意义（P<0.05）。（2）LPS能促进B细胞的活化，激发型CD3、CD28抗体能促进T细胞的活化，并且在第三天左右活化水平最高。（3）PD-L1能通过诱导Bregs的生成促进Tregs的生成。（4）活化的T细胞分别与活化的B细胞、与低表达PD-L1乳腺癌细胞株共育后的B细胞、与高表达PD-L1乳腺癌耐药细胞株共育后的B细胞共育后，调节性T细胞的表达明显升高。结论：高表达PD-L1的肿瘤细胞能调高CD19+CD24+CD38+B细胞百分率，同时能促进活化T细胞转化为调节性T细胞；PD-1/PD-L1通路或许在调节性B细胞调控调节性T细胞中发挥着重要的作用。
【作者】兰杨；
【导师】管洪庚；谢芳；兰晶；
【作者基本信息】苏州大学，普通外科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】乳腺浸润性导管癌；B细胞；T细胞；PD-1；PD-L1；流式细胞仪检测技术；

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