急性肺栓塞大鼠细胞因子的变化及尿激酶的干预作用

【摘要】研究背景肺血栓栓塞症(PTE)是内源性或外源性血栓栓子堵塞肺动脉所引起肺循环障碍的临床和病理生理综合征。PTE发病率、病死率和致残率高,是继恶性肿瘤、心肌梗死之后第三大死亡原因和妇女产后首位死亡原因,已成为国际性医疗保健问题。据文献报道,未治疗的肺栓塞死亡率高达30%,且其PTE漏误诊率极高,欧美国家高达70%,国内则约在90%左右。由于大部分患者得不到及时治疗,急性肺血栓栓塞后大多数患者在解剖、血流动力学方面不能完全恢复正常,另有少数患者发展为预后不良的慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)。上述情况均伴有肺血管重构,即小的肌型肺动脉中膜增厚和／或非肌型动脉肌型化；其机制主要是在细胞因子作用下,血管平滑肌细胞(SMC)迁移至肺动脉内膜并增殖所致。低分子肝素(LMWH)和尿激酶(UK)均具有抗SMC增殖作用,目前关于LMWH和UK对急性PTE后肺动脉内膜增生作用机制的研究极少。目的1.观察急性肺栓塞后内皮素-1、基质金属蛋白酶-9的变化及不同表达,探讨它们对肺动脉内膜增生的影响机制,并研究其与PTE程度和抗凝溶栓治疗的相关性。2.观察LMWH和UK在急性肺血栓栓塞症后肺动脉新生内膜形成中的作用机制,并进行对比性研究。方法1.雄性SD大鼠124只,随机分为假手术组(Sham组)、肺栓塞组(PTE组)、尿激酶组组(UK组)和低分子肝素组(LMWH组)各30只。制作急性肺栓塞模型过程中死亡4只。鼠尾静脉取血,制备自体血栓；颈静脉插管注入自体血栓栓子制成急性PTE模型。Sham组注入等量生理盐水作对照。LMWH组于PTE模型制成后开始皮下注射LMWH(速碧林,0.01ml/Kg),Q12h,连续7天。UK组于模型制成后开始静脉滴注尿激酶(20000IU/Kg),继以LMWH(速碧林,0.01ml/Kg)皮下注射,Q12h,至7天。Sham组及PTE组皮下注射等量生理盐水,时间同LMWH组。每组分别于栓塞后2h、4h、6h、第1、4、7天各处死5只。2.右心导管法测定肺动脉平均压(mPAP),右心室压力(RVP)。3.右颈动脉插管取血分别进行血气分析、ET-1、MMP-9水平的测定。4.肺组织切片HE染色观察PTE后肺组织病理学特点及肺动脉内膜增生情况。5.采用免疫组织化学方法检测ET-1、MMP-9表达。6.Westernblot方法检测肺组织MMP-9的表达。结果1.共94只大鼠注入栓子,术后1小时内死亡3只,术后2小时内死亡1只,2小时后无死亡。所有大鼠注入栓子后均出现呼吸急促、紫绀、心率加快。制成急性PTE模型共90只,成功率95.7%。2.栓塞后PTE、LMWH及UK组mPAP均明显升高。PTE组h2、h4、h6、d1、d4时间点mPAP均升高,与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)。LMWH组h2、h4、h6、d1时间点mPAP与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)；与PTE组比较d4时间点差异有统计学意义(p<0.05)。UK组mPAPh2、h4、h6与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)；与PTE组比较h6、d1、d4有统计学意义(p<0.05)；与LMWH组比较h6、d1差异有统计学意义(p<0.05)。3.栓塞后PTE、LMWH及UK组RVP均明显升高。PTE、LMWH组h2、h4、h6、d1时间点RVP均升高与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)。UK组RVPh2与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)；UK组与PTE组、LMWH组比较,h6、d1时间点RVP差异有统计学意义(p<0.05)。4.PTE组所有时间点Pa02均降低与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)。LMWH组h2、h4、h6、d1、d4PaO2降低与sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)；与PTE组比较d4、d,差异有统计学意义(p<0.05)。UK组PaO2h2、h4、h6、d1与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)；与PTE组比较h6、d1、d4、d,差异有统计学意义(p<0.05)；与LMWH组比较h6、d1、d4差异有统计学意义(p<0.05)。四组各时间点PaC02比较差异均无统计学意义。5.栓塞后PTE、LMWH及UK组ET-1值均明显升高。PTE、LMWH组h2、h4、h6时间点ET-1值升高与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)。LMWH组在d4、d,ET-1值明显降低与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)。UK组h2、h4、h6ET-1值升高与Sham组比较差异有统计学意义(p<0.05)；与PTE组比较h4、h6、d,差异有统计学意义(p<0.05)；与LMWH组比较h4、h。差异有统计学意义(p<0.05)。6.栓塞后PTE、LMWH及UK组MMP-9值均明显升高。PTE组所有时间点MMP-9值与Sham组均有统计学意义(p<0.05)。LMWH、UK组h2、h4、h6、d1MMP-9值与Sham组比较差异均有统计学意义(p<0.05)。LMWH组与PTE组比较d4、d7MMP-9值差异有统计学意义(p<0.05)。UK组与PTE组比较d1、d4、d7MMP-9值差异有统计学意义(p<0.05)。7.免疫组化结果显示：ET-1主要由肺血管内皮细胞、平滑肌细胞、新生内膜中平滑肌细胞、肺泡和支气管上皮细胞等表达。PTE组ET-1呈强阳性表达,LMWH组和UK组均表达弱阳性。MMP-9主要由肺血管内皮细胞、平滑肌细胞、新生内膜中平滑肌细胞及浸润的单核-巨噬细胞表达。栓塞后PTE组MMP-9呈强阳性表达,LMWH组和UK组均呈弱阳性表达。8.Westernblot结果显示：PTE、LMWH及UK组MMP-9蛋白表达较Sham组均增高。PTE组MMP-9蛋白表达量明显增高(p<0.05).LMWH和UK两组MMP-9蛋白表达量较PTE组降低,差异有统计学意义(p<0.05),但较Sham组仍高。结论1.经颈静脉注入自体血栓可制成理想的大鼠急性肺栓塞模型。2.大鼠急性PTE后第4天即出现肺动脉内膜增生；肺动脉壁炎性细胞浸润,中膜平滑肌细胞向内膜迁移、增生是急性PTE后肺动脉内膜增生的主要机制；ET-1、MMP-9在大鼠急性PTE后肺动脉内膜增生、肺血管重构过程中起着重要作用。3.LMWH和UK可以减轻大鼠急性PTE后肺动脉内膜增生；还可以降低ET-1、MMP-9血浆中的水平及其在肺动脉中的蛋白合成；UK与LMWH比较,可以更加迅速地缓解呼吸困难、纠正低氧血症、降低肺动脉压力、使栓塞的血管再通。4.急性PTE后肺动脉内膜增生情况比预想要严重的多,这必将影响患者的预后,因此进一步研究急性PTE将对减少CTEPH的发生有至关重要的意义。
【作者】费建文；
【导师】董亮；
【作者基本信息】山东大学，内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】肺栓塞；内皮素-1；金属基质蛋白酶-9；尿激酶；

【参考文献】
[1]叶晗.内蒙古牧区草原生态补偿机制研究[D].中国农业科学院,农业资源与环境经济学,2014,博士.
[2]陈霖,张小青.变压器型故障限流器限流效果研究[J].中国电力,2014,02:53-57.
[3]巩金龙.基于可靠性强化试验叉车的可靠性分析研究[D].中国农业大学,车辆工程,2004,硕士.
[4]容振乾.三角网格曲面上的曲线操作[D].华侨大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[5]唐秋燕.文学治疗原理分析[D].湖北民族学院,文艺学,2013,硕士.
[6]陈希.山东省成人糖尿病流行现况及其筛检的人体测量指标适宜切点分析[D].山东大学,流行病与卫生统计学,2013,硕士.
[7]丘志刚.针刺调神法源流及其理论方法研究[D].广州中医药大学,针灸推拿学,2013,硕士.
[8]姚建中.农行四川分行综合业务系统网络安全设计与实现策略[D].四川大学,电子与通信工程,2003,硕士.
[9]蔡莹霏.社会工作介入农村少数民族学生人际交往问题研究[D].西北大学,社会工作（专业学位）,2014,硕士.
[10]尹荣昆.加强和改进非现场稽核分析的思考[J].新金融,2004,02:27-29.
[11]李建立.桥梁斜拉索-阻尼型索网减振体系的有限元分析[D].哈尔滨工业大学,防灾减灾工程及防护工程,2013,硕士.
[12]史文杰.国有控股集团高管选拔任用机制创新研究[D].郑州大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[13]郭鹏越.注释呈现方式对中国大学生在英语阅读中的词汇附带习得的影响[D].浙江大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[14]熊应国.高精度GPS实时变形监测软硬件系统开发与研究[D].长安大学,测绘工程（专业学位）,2013,硕士.
[15]任倩倩,俞卫华,王凡,童东绅,周春晖.膨润土提纯技术研究进展[J].中国非金属矿工业导刊,2012,02:60-62+66.
[16]未盆兄.制造企业员工反生产行为归因及控制研究[D].兰州理工大学,企业管理,2014,硕士.
[17]徐鹤.文化缺省与翻译补偿[D].鲁东大学,英语笔译（专业学位）,2013,硕士.
[18]杨博.中国家电行业上市公司品牌竞争力评价研究[D].中国地质大学（北京）,工商管理,2013,硕士.
[19]杨志敏.俄罗斯加入WTO对中俄经贸合作的影响[D].东北财经大学,国际贸易学,2012,硕士.
[20]吴海丰.转移复发胃肠道间质瘤治疗及预后相关因素研究（附142例病例分析）[D].河北医科大学,外科学,2014,硕士.
[21]战雯静.长三角精细下垫面对大气数值模拟的影响及各生态系统氮硫沉降估算[D].复旦大学,环境科学,2012,硕士.
[22]魏峻.排课算法的研究与实现[D].西安电子科技大学,2002.
[23]雷伟军.文理学院多校区校园网改造集成设计与研究[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[24]刘硕.广告设计教学改革初探[J].艺术科技,2013,11:401+388.
[25]张少君.数字虚拟肝脏在肝癌热消融中的应用及复发性肝内胆管癌的手术与消融治疗[D].第二军医大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[26]董超.水泵隔振效果影响因素研究[D].沈阳工业大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[27]汪佳宏.基于自由词的基因功能注释和分子网络构建[D].南方医科大学,遗传学,2012,硕士.
[28]陆文立.高巯基水解玉米醇溶蛋白制备及其应用探索[D].重庆大学,化学工程（专业学位）,2014,硕士.
[29]訾亚楠.计算机辅助审计技术在我国的应用状况研究[D].贵州财经大学,会计学,2013,硕士.
[30]李明迪.商业银行竞争战略与业务效率的关系研究[D].哈尔滨工业大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[31]李霞.雷帕霉素联合紫杉醇对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响[D].山西医科大学,妇产科学,2013,硕士.
[32]赵鸿儒,刘宝诚.空气介质中三维多层模型试验方法的研究[J].石油地球物理勘探,1981,03:25-34.
[33]陈根军,周红阳,李文云,顾全,杨梦楠,赵云峰.基于CIM扩展的通用保护模型及其应用[J].电力系统自动化,2012,24:49-53+78.
[34]乔思默.磷酸化突触素Ⅰ及其相关激酶在微波辐射致氨基酸递质释放异常中的作用研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,病理学与病理生理学,2014,博士.
[35]李细莲,刘刚,杜桃园,赵晶,吴木生,欧阳楚英,徐波.应力对硅烯上锂吸附的影响[J].物理学报,2014,21:326-332.
[36]杜洋.马克思幸福观的逻辑演变及当代价值[D].河北师范大学,马克思主义发展史,2013,硕士.
[37]方卫礼.中小学奥林匹克数学教育现状调查研究[D].西北师范大学,教育,2013,硕士.
[38]张宪龙.气幕发射方式下航行体流体动力和结构动力特性研究[D].哈尔滨工业大学,一般力学与力学基础,2013,硕士.
[39]黄宇舟.园本教研中教学反思的实践研究[D].湖南师范大学,学前教育（专业学位）,2013,硕士.
[40]胡震.HCCS－3线材单捆计重秤通过鉴定[J].冶金自动化,1995,04:31.
[41]殷琳.我省“营改增”政策效应分析[D].苏州大学,税务（专业学位）,2014,硕士.
[42]李春燕.近代云南山地资源开发中的彝汉民族关系研究[D].云南师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[43]岳凌严.新手教师与熟手教师区域活动指导的个案比较研究[D].首都师范大学,学前教育,2014,硕士.
[44]杜杰.中建一局三公司的战略研究[D].对外经济贸易大学,工商管理,2004,硕士.
[45]王晓珺.J集团公司资金管理系统的设计研究[D].华东理工大学,项目管理,2013,硕士.
[46]马芳.纳米TiO_2的溶剂热合成及其光降解VOCs研究[D].华中科技大学,物理化学,2013,硕士.
[47]邓美琛.无线传感器网络在设施农业中的应用研究[D].东华大学,控制工程（专业学位）,2014,硕士.
[48]宋秀华,朴永吉,张利琴,沈宁.声景观在园林中的应用进展[J].农业科技与信息(现代园林),2014,04:71-74.
[49]姜益宏.心痛方治疗冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互结气郁证的临床观察及对PS/PSGL-1等表达的干预[D].湖南中医药大学,中医内科,2013,硕士.
[50]杜燕.基于文化营销视角的企业核心竞争力研究[D].延安大学,企业管理,2014,硕士.