MicroRNA-122和MicroRNA-146a的SNPs与肝癌易感性和切除术后近期复发的关系

【摘要】第一部分MicroRNA-122和MicroRNA-146a的单核苷酸多态性与肝细胞性肝癌易感性关系研究背景MicroRNA(miRNA)是一类短序列的非编码RNA,可通过序列特异性翻译抑制或造成mRNA的裂解来调控基因表达,从生物学效率来评判,miRNA在转录后的调控更加精密和高效。已有多项研究发现：它积极地参与了肿瘤的某些生物学行为。但就miRNA与肝癌的相关研究来讲,与肝癌相关的miRNA的表达质谱更需进一步明确。单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphismSNP)是染色体基因组水平上,单个核苷酸变异而引起的基因序列多态性。一般而言,SNP是指变异频率大于1%的单核苷酸变异,这种变异表现是某个位点碱基的改变。它不仅是遗传标记,而且可能调控或影响基因的表达,某个SNP不但对不同的地区人群影响存在差异,而且导致不同的个体对类似的生理及病理因素反应不同,从而影响对某种疾病的易感性。虽然,国外近年开展了一部分肿瘤的遗传易感性与miRNA的SNP的相关探索,肝癌易感性与某些miRNA的SNP的研究结果,尽管为数不多,却存在着大量的争议。乙肝病人是我国肝细胞性肝癌相对好发人群,为了进一步确定乙肝患者中的肝癌易感人群,考虑到存在地区人种及较多乙肝病毒感染因素的差异,本研究选取具有乙肝背景的肝癌患者进行研究,也更易在相对小的样本的回顾性分析中,使SNP的易感性作用显现出来,所以本研究通过文献筛查,选取了较新研究的,与肝癌相关性较高,或与肝癌易感性研究尚未定论的8种miRNA,筛查约400bp范围内SNP位点,并通过基因库比对试验所发现的SNP位点；针对乙肝背景的肝癌患者进行肝癌遗传易感性和miRNA的SNP相关性研究。方法设计己选取的8种MicroRNA的双向引物,通过在173例肝细胞性肝癌和41例良性肝脏疾病的手术标本石蜡切片,提取DNA;PCR扩增8种MicroRNA约400bp的基因序列,产物测序,并通过基因库比对,寻找SNP位点,病例对照研究相关临床资料。结果1、在扩增的序列内,miR-122SNP位点只发现一个,即位于miR-122编码基因下游102位；基因库里登记的其他8个位点,本次研究并未发现。hsa-mir-122SNP位点(rs17669)C/C基因型、T/T基因型、及T/C基因型分布频率：4%(7/173)、63.6%(110/173)、及32.4%(56/173)。hsa-mir-122SNP位点(rs17669)C/C基因型相对T/T基因型为肝细胞性肝癌的保护因素(OR=0.213,95%CI:0.062-0.732)。2、本研究发现的,miR-146aSNP位点(rs2910164)位于miR-146a编码基因区域内；基因库显示还有其他9个位点,并未发现。hsa-mir-146aSNP位点(rs2910164)C/C基因型、G/G基因型、及G/C基因型分布频率为：35.3%(61/173)、15..0%(26/173)、及49.7%(56/173)。hsa-mir-146aSNP位点(rs2910164)C/C基因型+C/G基因型相对G/G基因型为肝癌的危险因素(OR=3.086,95%CI:1.289-7.390).3、其余4个miRNA的DNA扩增(除miR-210,miR205扩增失败外),但未发现SNP位点。结论1、有乙肝背景汉族人,miR-146a的SNP位点(rs2910164)、miR-122的SNP位点(rs17669)可能与肝细胞型肝癌易感性相关。2、miRNA-21、miRNA-183、miRNA-200c、miRNA-375未发现SNP;miRNA-205、miRNA-210未扩增出PCR产物。第二部分MicroRNA-122和MicroRNA-146a的单核苷酸多态性与肝细胞性肝癌术后早期复发的关系研究背景肝细胞性肝癌(HCC)5年术后复发率高达40%-60%以上,特别是近期复发患者疗效差。进行术后复发危险因素的研究,很有意义。随着基因组学的进展,不少学者尝试着,在分子生物学层面上,寻找新的术后复发的危险因素,对现有的临床标准,进行必要地补充和完善。因此,寻找术后早期复发的基因相关指标,在如何更加精确地选择合适的手术病例方面,具有重大临床意义。目前,尚无miRNA的SNP位点与肝癌手术预后的相关报道。肝癌遗传易感性相关的基因多态性改变,使某些个体在分子水平先天性易患肝癌,易感肝癌的人群所患的肝癌,在分子生物学层面上,与非易感人群所患的肝癌已有所差别；由于SNP可能会影响某些基因的表达,所以,我们进一步探讨：位于miRNA-122和miRNA-146a基因序列上,具有肝癌易感性的2个SNP位点,与肝癌术后近期复发和早期复发的关系。方法本研究定义术后6个月内的复发为近期复发；术后2年内复发定义为早期复发。在剔除非根治性切除的残癌病例后,我们分析了173例肝癌切除术后的近期和早期复发情况,对照研究上述2个miRNA的SNP不同的基因分型,采用Logistic回归分析和多因素逐步回归分析术后近期和早期复发的相关因素,分析上述复发与不同基因型关系。结果本组病例复发时间段显示：6个月内的复发率是38.7%(67/173)；1年内的复发率是53.1%(92/173)；2年内的复发率是57.2%(99/173)。通过累积复发率分析,术后1年内为复发高峰期,其中72%的1年内复发病例在6个月内；肿瘤大小、miRNA146a(rs2910164)C/G基因型为肝癌近期复发的危险因素；肿瘤大小、AFP阳性、miRNA146a(rs2910164)C/G基因型为肝癌早期复发的危险因素；miRNA122(rs17669)与术后复发无关。miRNA(rs2910164)的C/G基因型为肝癌近期和早期复发的危险因素(OR=9.040,95%CI:2.393-34.155;OR=4.165,95%CI:1.898-9.141)。结论1、miRNA146a的rs2910164的C/G型可能与肝癌近期复发和早期复发相关。2、miRNA122的rs17669与术后复发无关。
【作者】周峥；
【导师】杨定华；
【作者基本信息】南方医科大学，临床医学，2014，博士
【关键词】肝细胞性肝癌；MicroRNA；SNP；易感性；术后复发；rs2910164；

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