日光性角化病中TGFβ1/Smad信号通路作用机制的研究

【摘要】第一部分日光性角化病临床病理分析目的：日光性角化病(AK)发病率逐年上升,并可进一步转化为鳞状细胞癌(SCC)。为提高临床诊断、防治水平及最大限度降低患病率及死亡率,完善高原地区AK流行病学资料,本研究就其临床、病理诊断方面的特点进行综合性分析。方法：采用回顾性研究方法对昆明医科大学第一附属医院皮肤科2011年1月～2012年12月共2年间组织病理确诊、临床资料完整的52例AK患者资料进行分析。对HE组织切片进行观察,分析其病理特征,结果用SPSS17.0统计分析。结果：2011至2012年间确诊AK52例,确诊AK占当年年病检量比率分别为0.49%和0.85%,占当年年门诊量比率分别为0.18‰和0.34‰,2012年占年门诊量比率比2011年上升(χ2=5.02,p=0.03)；其中男性18人,女性34人,男性：女性为1：1.89；发病年龄为45～82岁,其中<50岁4例(7.7%),50～59岁11例(21.2%),60～69岁17例(32.7%),70～79岁17例(32.7%),>80岁3例(5.8%),平均发病年龄为64.98±9.78,男性平均年龄(62.44±10.76)与女性(66.32±9.11)间无明显差异(t=-1.372,p=0.176)；患者以农民、建筑工人等室外工作者为主,共34例(65.3%),不同职业间的发病部位、发病年龄及病程无明显差别(p>0.05)；日光反应性皮肤分型Ⅲ型皮肤有27例(57.7%),Ⅳ型皮肤有25例(42.3%),不同皮肤类型间发病年龄及病程无明显差别(p>0.05)；AK皮损以红褐色、黑褐色斑丘疹伴鳞屑为主,共46例(88.5%),其中合并糜烂溃疡1例,仅黑色丘疹5例(9.6%),皮角样1例(1.9%),皮损全部分布于曝光部位,以面颊部(25例,48.1%)及颞部(23例,44.2%)多见,其次为鼻部(13例,25%)和额部(11例,21.2%),位于耳、颈及手背各1例(1.9%)；AK皮损以单发为主(71.2%),多于3处皮损患者有6例(11.5%),最多达到21处；皮损平均直径为17.87±9.92mm,不同发病部位皮损直径无明显差别(p>0.05)；病程平均为44.04±53.09月,其中男性平均病程为50.39±29.82,女性为40.68±62.16,男女发病平均病程比较无明显差异(p>0.05)；病理分型以肥厚型为主(51.9%),其次为萎缩型(21.2%)和色素型(15.4%),而棘层松解型(7.7%)和鲍温样型(3.8%)比较少见,其中2例合并SCC；52例病理确诊AK中,临床与病理诊断符合率仅为51.9%,其中误诊为脂溢性角化病13例,基底细胞癌2例,色素痣4例,寻常疣3例,皮角2例,角化棘皮瘤1例。结论：1、确诊AK占年门诊量比率呈现上升趋势,应引起全社会的重视；2、AK多发于50岁以上女性的头面部曝光部位,以农民等户外工作者为主,与紫外线关系密切；3、AK临床表现多为红褐色、黑褐色斑丘疹伴鳞屑,平均病程为3.6年,以单发皮损为主,平均直径一般大于1cm;4、AK病理分型以肥厚型为主,临床与病理诊断符合率不高,临床上容易误诊,应增加病检的适用范围,以免贻误病情,造成严重后果；5、AK向SCC转化概率高,应该早期诊断治疗。第二部分日光性角化病中TGFβ1/Smad信号通路作用机制的研究目的：AK发病率高,易向SCC转变,但发生发展机制不清。TGFβ1/Smad信号通路在皮肤癌早期抑制肿瘤生长,晚期却促进肿瘤侵袭转移,在AK中的作用机制未见报道。本研究探讨AK中TGFβ1/Smad信号通路的作用机制,阐明AK发生发展的机制。方法：分别培养人AK组织块及原代细胞,分为三组,第一组对照组,第二组TGFβ1添加培养组,第三组SB431542添加培养组。活性调控处理48h后：①流式细胞术、Ki-67和Tunel染色检测AK细胞和组织增殖凋亡情况；②Real-timePCR和蛋白免疫印迹检测AK组织中TGFβ1/Smad信号通路TβRII和Smad2mRNA表达及蛋白磷酸化水平,检测培养组织块用于信号通路活性调控研究的可行性；③Real-timePCR和蛋白免疫印迹检测AK组织中p53、Fas和FasLmRNA及蛋白表达。结果：①AK角质细胞培养12天后形态良好,呈典型的铺路石样改变。AK组织培养5天后,皮肤组织生长良好,未见大量细胞凋亡和死亡情况；②在TGFβ1添加培养后,AK角质形成细胞计数减少(99.80±6.06),Ki-67阳性细胞百分比(0.42±0.04)下降,AK组织中Ki-67阳性细胞百分比(3.90±0.24)减少(p<0.05)；③在AK组织块中,与对照组相比,TGFβ1添加后TβRI磷酸化水平(0.1858±0.0]07)增加；Smad2mRNA(0.01791±0.00080)表达增加,磷酸化水平(0.6112±0.0391)增加(p<0.05)。而SB431542添加后,TβRI磷酸化水平(0.0644±0.0053)减少(p6<0.05)；④在TGFβ1添加培养后,AK组织块中p53mRNA表达(0.00178±0.00010)增加,蛋白表达(0.1620±0.0155)增加,Fas蛋白表达(0.4004±0.0267)增加(p<0.05)。结论：1.皮肤组织块可以作为信号通路活性调控模型。2.TGFβ1/Smad信号通路在AK中发挥抑制细胞增殖作用。3.TGFβ1/Smad信号通路通过促进p53和Fas表达而发挥抑制作用。第三部分紫外线对日光性角化病中TGFβ1/Smad信号通路影响的研究目的：紫外线促进日光性角化病(AK)发生及向鳞状细胞癌(SCC)进展,严重危害人民群众生命健康,TGFβ1/Smad信号通路在AK中发挥抑制作用,研究紫外线对TGFβ1/Smad信号通路的影响,阐明紫外线致癌靶点。方法：分别培养AK和正常皮肤组织,分为四组,第一组为对照组,紫外线照射强度为0J/cm2,第二组为5J/cm2组,第三组为10J/cm2组,第四组为20J/cm2组。组织连续照射4天,继续培养24小时后取材,①Ki-67和Tunel染色检测AK组织增殖凋亡情况；②Real-timePCR和免疫组化检测AK组织中TGFβ1/Smad信号通路TGFβ1,TβRI,TβRII,Smad2,Smad3,Smad4和Smad7mRNA及蛋白表达。结果：①紫外线照射后,与对照组比较(OJ/cm2组),Ki-67阳性细胞百分率(3.74±1.16)在正常皮肤20J/cm2组中表达减少,凋亡细胞在正常皮肤(39.34±8.73)和AK(25.76±5.99)20J/cm2组中明显增加(p<0.05)；②紫外线照射后,与对照组比较(OJ/cm2组),TGFβ1mRNA在正常皮肤10J/cm2(0.00821±0.00181)和20J/cm2(0.01040±0.00145)组表达增加,其蛋白在10J/cm2(0.1041±0.0064)和20J/cm2(0.1257±0.0135)组表达增加,在AK20J/cm2组其mRNA(0.00504±0.00122)和蛋白(0.0871±±0.0038)表达增加(P<0.05);TβRIImRNA(0.00119±0.00019)和蛋白(0.0366±0.0052)在正常皮肤20J/cm2组表达减少,在AK20J/cm2组其mRNA(0.00073±0.00029),在10J/cm2(0.0372±±0.0055)和20J/cm2(0.0343±±0.0043)组其蛋白表达减少(p<0.05)；Smad2mRNA在AKlOJ/cm2(0.01105±0.00238)和20J/cm2(0.00519±0.00119)组,磷酸化水平在20J/cm2组中(0.0160±0.0036)表达减少(p<0.05)；Smad7mRNA和蛋白在正常皮肤(0.00028±±0.00006;0.0093±0.0003)和AK(0.00055±0.00012;0.0096±±0.0009)中表达增加；TβRI,Smad3和Smad4表达未见明显变化(p>0.05)。结论：1.紫外线照射可能通过抑制AK中TGFβ1/Smad信号通路,促进AK向SCC进展。2.紫外线抑制TGFβ1/Smad信号通路可能与诱导Smad7表达有关。
【作者】徐丹；
【导师】何黎；
【作者基本信息】昆明医科大学，外科学，2013，博士
【关键词】日光性角化病；TGFβ1/Smadp53FasFasL；紫外线；

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