脑源性神经营养因子和前体在胶质瘤中的生物学作用

脑源性神经营养因子和前体在胶质瘤中的生物学作用

作者:师大云端图书馆 时间:2015-05-26 分类:论文格式 喜欢:3417
师大云端图书馆

【摘要】目的1.中枢神经系统同时存在着两种形式的BDNF——proBDNF和matureBDNF。BDNF基因先编码proBDNF,经过一系列细胞内和细胞外蛋白酶的作用,裂解形成matureBDNF。ProBDNF和matureBDNF通过两个不同的跨膜受体信号系统——p75NTR和rrkB介导不同的生物学作用。与natureBDNF的作用相反,proBDNF和]p75NTR及其共受体sortilin高亲和力结合,诱导凋亡、长时程抑制、突触回缩、轴突溃变。BDNF信号转导可以被恶性细胞“劫持”,为己所用。2.尽管有大量研究表明,BDNF及其受体TrkB在恶性肿瘤表达显著上调,通过自分泌或旁分泌机制促进肿瘤生长和恶性转化。由于使用的是非特异性的BDNF抗体或ELISA检测,这些研究并没有区分proBDNF和matureBDNF。胶质瘤占颅内肿瘤大约40%,胶质瘤的起源及其生物学特点提示大脑为胶质瘤的生长提供了特殊的微环境。高级别胶质瘤无法治愈,且生存期短、预后差。源自人恶性胶质瘤的24个细胞系中,都存在BDNF的广泛表达,提示BDNF对胶质瘤的生物学行为可能有重要作用。3.已经证明p75NTR在人高级别胶质瘤中表达上调,proBDNF是p75NTR的主要配体,推测proBDNF和matureBDNF共存于胶质瘤细胞,proBDNF-p75NTR通路和matureBDNF-TrkB通路可能同时影响胶质瘤的生物学行为,其作用可能相反。4.本研究使用的高特异性抗proBDNF抗体和抗matureBDNF抗体能够区分proBDNF和matureBDNF,第一次系统地探索了proBDNF及其受体p75NTR和sortilin在不同恶性级别的人胶质瘤中的表达。第一次用特异性的抗体测定proBDNF和matureBDNF的比率在不同级别人胶质瘤中的变化。为了证明proBDNF和matureBDNF对胶质瘤细胞的生物学作用的差异,用C6胶质瘤细胞作为体外实验模型,探索了proBDNF和natureBDNF对C6胶质瘤细胞的生长、分化、侵袭性的生物学作用和可能机制。方法1.本研究收集了不同恶性级别的人胶质瘤样本(n=52)和正常人脑组织样本(n=13),通过免疫组织化学、实时荧光定量PCR、Westernblot和ELISA多种方法,检测proBDNF及其高亲和力受体p75NTR阳sortilin的表达,检测matureBDNF及其主要受体TrkB的表达。用荧光免疫双标的方法,分析proBDNF/p75NTR、proBDNF/sortilin、matureBDNF/TrkBI的不同亚细胞定位。研究分析了proBDNF和matureBDNF及其受体和胶质瘤恶性级别的相关性,并第一次分析了proBDNF/matureBDNF比率与胶质瘤恶性级别的相关性。2.检测大鼠C6胶质瘤细胞系表达proBDNF、matureBDFN及其受体,以此细胞系为模型进行体外实验,探索proBDNF和matureBDNF对C6胶质瘤细胞的分化、生长、凋亡和侵袭的影响。对C6细胞分别采取不同处理:(1)加入不同浓度的抗裂解的重组proBDNF蛋白(1,3,10,30ng/mL);(2)加入不同浓度的重组matureBDNF蛋白(1,3,10,30ng/mL);(3)加入特异性抗proBDNF抗体(1,3,10μg/mL)中和内源性proBDNF;(4)加入特异性抗matureBDNF抗体(1,3,10μg/mL)中和内源性matureBDNF;(5)加入p75NTR-ECD-Fc(5μg/mL)阻断p75NTR作用。观察不同处理后C6细胞形态和胶质细胞标志物GFAP的表达变化;MTT法测定C6细胞增殖;DAPI核染色法检测C6细胞凋亡;划痕实验和细胞侵袭小室法测定C6细胞的侵袭性。结果1.ProBDNF,p75NTR和sortilin表达在高级别胶质瘤中明显上调,proBDNF/p75NTR,proBDNF/sortilin在胶质瘤细胞中共表达,并且存在不同的亚细胞分布,proBDNF在胶质瘤细胞浆和细胞核中都有表达。相关分析显示proBDNF、p75NTR、sortilin都与胶质瘤肿瘤恶性程度正相关。2.ProBDNF和matureBDNF共同表达在人胶质瘤细胞中,proBDNF/matureBDNF比率在高级别胶质瘤中明显降低,与胶质瘤恶性级别呈负相关。3.体外实验结果表明,(1)重组proBDNF蛋白引起了C6细胞的形态变化,并通过p75NTR上调了C6细胞GFAP表达,而proBDNF抗体明显下调了C6细胞GFAP表达。重组proBDNF蛋白通过p75NTR促进了C6细胞凋亡,抑制了C6细胞的增殖、迁移和侵袭;而proBDNF抗体抑制了C6细胞凋亡,促进了C6细胞增殖、迁移和侵袭,其效应呈剂量依赖性。(2)与proBDNF对C6细胞的生物学作用相反,重组matureBDNF蛋白抑制C6细胞凋亡,促进C6细胞增殖、迁移和侵袭;而matureBDNF抗体促进C6细胞凋亡,抑制C6细胞增殖、迁移和侵袭,其效应呈剂量依赖性。结论ProBDNF和matureBDNF同时存在于胶质瘤细胞中。体内和体外实验结果提示,proBDNF作为一个功能性蛋白对胶质瘤的生长可能起到抑制作用,而natureBDNF是促进胶质瘤生长的主要形式的BDNF。ProBDNF/p75/sortilin通路可能起到平衡matureBDNF/TrkB通路的作用,proBDNF和matureBDNF的相对表达水平可能影响这两条通路对胶质瘤生长和恶性转化作用,可能提供对胶质瘤治疗的一个新的靶点。
【作者】熊静;
【导师】肖志成;周新富;
【作者基本信息】昆明医科大学,外科学,2013,博士
【关键词】脑源性神经营养因子;proBDNF;p75NTR;sonilin;神经胶质瘤;人;

【参考文献】
[1]王忠.织构C_(60)薄膜的生长及特性研究[D].武汉理工大学,材料工程,2003,硕士.
[2]张淑敏,陈玉福,于飞海,邢雪荣,李凌浩,董鸣.林下和林窗内绢毛匍匐委陵菜的克隆生长和克隆形态[J].植物生态学报,2003,04:567-571.
[3]周正.紫外诱变克鲁维酵母原生质体选育发酵乳清高产酒精菌株[D].河北农业大学,农产品加工及贮藏工程,2004,硕士.
[4]陈志岭.成纤维细胞生长因子10及其受体在口腔扁平苔藓中表达的实验研究[D].河北医科大学,口腔医学(专业学位),2013,硕士.
[5]周杰.马来酰亚胺聚谷氨酸天冬氨酸靶向肽聚合物药物载体系统的建立与应用[D].华东师范大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[6]刘毅.绍兴市专利制度发展过程中的问题及应对路径[D].吉林大学,公共管理,2014,硕士.
[7]张沙龙.长丝裂腹鱼和短须裂腹鱼的游泳能力和游泳行为研究[D].华中农业大学,渔业资源,2014,硕士.
[8]杜平.中德新年贺词之篇章结构分析[D].西安外国语大学,德语语言文学,2013,硕士.
[9]张云燕.普通本科院校“订单式”人才培养模式研究[D].山东财经大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[10]王雪伟.服装的“寿命”[D].青岛大学,设计艺术学,2013,硕士.
[11]崔宇.利用SERS技术检测淀粉制品中乌洛托品的研究[D].哈尔滨工业大学,物理电子学,2013,硕士.
[12]冯陟博.任务型教学方法在高中英语写作教学中的应用[D].内蒙古师范大学,学科教学(专业学位),2013,硕士.
[13]吕生华,崔亚压,杨文强,周庆芳,孙世彧.氧化石墨烯与甲基丙烯酸和烯丙基磺酸钠共聚物的制备与性能[J].功能材料,2015,06:6148-6152.
[14]石燕.共振瑞利散射法的一些新应用及基于吖啶橙—化学还原石墨烯的荧光传感器的构建[D].西南大学,2012.
[15]沈红雨.绍兴文理学院电子文书档案的安全问题与对策[D].吉林大学,公共管理,2014,硕士.
[16]刘锋光.基于VPN的水电站远程监控系统的研究与应用[D].浙江工业大学,2006.
[17]庄晴.塑造他者:对列尼·史葛电影的后殖民主义研究[D].广东外语外贸大学,英语语言文学,2004,硕士.
[18]田品.论初中历史中的概念教学[D].湖南师范大学,学科教学(专业学位),2014,硕士.
[19]赵雨汀.《口译教学的系统研究方法》(第三章)翻译报告[D].四川外国语大学,翻译(专业学位),2014,硕士.
[20]戴玉英.新课标背景下我省中学体育课田径教学改革的研究[D].福建师范大学,体育教育训练学,2004,硕士.
[21]董笑盈.基于神经网络和小波分析技术的基因表达谱数据分析[D].北京工业大学,电路与系统,2004,硕士.
[22]胡琅琳.不同频率电针“内关”对心肌缺血模型大鼠相关经穴皮肤血流量与相关分子(NOS/NO/CaM)变化的研究[D].北京中医药大学,针灸推拿学,2013,硕士.
[23]丹尼(DineshMittal).港口物流系统:性能和教训,新加坡和鹿特丹奈[D].大连海事大学,物流工程与管理,2013,硕士.
[24]俞立.不确定离散线性系统的鲁棒镇定[J].控制与决策,1999,02:73-76.
[25]白天毅.基于神经网络的手写体数字识别关键技术研究[D].西安工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[26]索南加乐,谢静,刘东,陈勇,孟祥来.克服距离保护暂态超越的新方法[J].电力系统自动化,2006,10:52-57.
[27]陆凌云.脊柱侧凸模型椎体骨超微结构及药物干预可能机制的研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.
[28]尚道东.空调水系统节能控制若干问题试验研究[D].大连理工大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2013,硕士.
[29]李阳.基于DM8168的视频火灾火焰检测系统研究[D].大连海事大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[30]左莉.汪曾祺“文化诗性”小说论[D].江西师范大学,中国现当代文学,2004,硕士.
[31]刘丽芳.红拳历史渊源和发展现状的调查研究及对策分析[D].陕西师范大学,2005.
[32]李宁.论我国土地资源生态补偿制度的构建和完善[D].郑州大学,环境与资源保护法学,2013,硕士.
[33]许帅.有形公共产品低成本服务研究[D].浙江工商大学,行政管理,2013,硕士.
[34]金华良.若干补肾与益气中药对大鼠哮喘模型的作用与机制研究[D].复旦大学,中西医结合临床(专业学位),2013,博士.
[35]王雷.胡锦涛民生思想探析[D].东北师范大学,马克思主义中国化研究,2012,硕士.
[36]牛丽芳.基于时滞惯性流形的几类非线性弹性杆整体动力学行为的研究[D].太原理工大学,固体力学,2014,博士.
[37]刘金霞.乌拉特中旗农区肉羊养殖成本收益分析[D].内蒙古农业大学,农村与区域发展,2013,硕士.
[38]肖皓中.软开关全桥副边双谐振DC-DC变换器研究[D].西南交通大学,电力电子与电力传动,2013,硕士.
[39]薛金梅.语篇的衔接与连贯在高职高专英语写作教学中的应用[D].内蒙古大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[40]周文忠,胡志才.确定地球同步自旋卫星姿态的一种方法[J].自动化学报,1982,03:175-187.
[41]孙楠.充分利用材料培养高中生写作兴趣的教学策略研究[D].河北师范大学,学科教育,2012,硕士.
[42]刘宁.p53基因Arg72Pro多态性与结直肠癌风险关系的分析[D].青海大学,外科学,2013,硕士.
[43]韩冰.论证券投资信托基金受益人权利的法律保护[D].中国政法大学,经济法学,2004,硕士.
[44]王皓.体育院校舞蹈啦啦操艺术表现力训练方法的研究[D].首都体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[45]王雨.地铁隧道施工对地下管线变形的影响研究[D].北京交通大学,2014.
[46]张翠.A+H股交叉上市对权益资本成本的影响[D].浙江工商大学,会计学,2014,硕士.
[47]方飞.锌镍电池锌电极的制备及电化学性能[D].浙江工业大学,应用电化学,2004,硕士.
[48]刘亚斌,王泽颖.明末天主教儒士朱宗元与西学的接受——兼对刘耘华“阳‘天’阴儒”观的回应[J].济南职业学院学报,2014,01:86-89+104.
[49]王新洲,柳宗伟,陈顺清.城市人口地理信息系统建设模式探讨[J].武汉大学学报(信息科学版),2001,03:226-231.
[50]王友平.铬盐生产场地铬污染规律及含水层铬迁移转化研究[D].中国地质大学(北京),环境科学与工程,2013,硕士.

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