Nedd化与皮肤黑素瘤发病机制的相关性研究

【摘要】黑素瘤是皮肤科致死率最高的恶性肿瘤,细胞增殖能力强,且不易受化疗药物的干扰,易发生转移,预后不良。目前黑素瘤的发生机制仍不清楚。连接态NEDD8与多种恶性肿瘤的发生有相关性,与黑素瘤的关系尚未见研究报道。本研究旨在探讨连接态NEDD8在黑素瘤发生发展中的作用。(1)连接态NEDD8在黑素瘤组织和细胞中的表达经westernblot检测发现,与瘤旁组织和痣组织相比,连接态NEDD8在皮肤黑素瘤瘤组织中的表达明显上调。与正常人黑素细胞相比,连接态NEDD8在黑素瘤细胞株中的表达明显上调。(2)催化连接态NEDD8形成的相关酶蛋白在黑素瘤细胞株中的表达通过real-timePCR技术检测NEDD8、APP-BP1、UBA3、UBC12以及UCH-L3在黑素瘤细胞株中的表达。结果显示与正常人黑素细胞相比,这些与连接态NEDD8的形成密切相关的蛋白在黑素瘤细胞株中的表达几乎均明显升高。(3)shRNA-UBA3重组质粒的构建及细胞转染构建shRNA-UBA3与pRNAT-U6.2/Lenti的重组质粒载体,转染M14细胞株,单克隆筛选稳定表达shRNA-UBA3的细胞株,经免疫细胞化学法和蛋白印迹法证实转染后的干扰效果,连接态NEDD8表达下调明显。(4)连接态NEDD8对M14细胞生物学行为的影响经细胞增殖、细胞周期及细胞侵袭实验的观察发现,干扰连接态NEDD8的形成,使M14细胞的在体外的增殖能力明显受到抑制,发生了G1期阻滞,且细胞的侵袭能力也发生了明显的下降。体内成瘤实验结果也证实,接种转染后的细胞,瘤体在裸鼠中的增长速度和程度明显受到抑制。结论NEDD8与cullin蛋白的连接可能是黑素瘤细胞无序增殖和远处转移的原因之一。在黑素瘤细胞及组织中,连接态的NEDD8明显上调,阻断NEDD8与cullin蛋白的连接会明显降低M14细胞的增殖及侵袭能力,并且会对其细胞周期的进程产生影响。
【作者】程芳；
【导师】孙建方；
【作者基本信息】北京协和医学院，皮肤病与性病学，2011，博士
【关键词】黑素瘤细胞；Nedd；转染细胞；melanoma；中国医学科学院；质粒载体；ubiquitin；肿瘤学；南京化学试剂厂；细胞转染；

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