microRNA水平及临床病理因素预测中晚期宫颈鳞癌同步放化疗疗效的初步研究

【摘要】第一部分microRNA101和microRNA1285对中晚期宫颈鳞癌同步放化疗敏感性预测作用的初步研究[背景与目的]宫颈癌是世界范围内及发展中国家妇女最常见的恶性肿瘤之一。宫颈癌发病率居我国女性生殖系统三大恶性肿瘤之首,其中,ⅡB期以上的中晚期患者约占60%-70%左右。这类患者往往预后差,疗效不佳。目前,根据几项大型随机对照临床研究,NCCN(NationalComprehensiveCancerNetwork)等指南已将同步放化疗(ConcurrentChemoradiotherapy,CCRT)列为中晚期宫颈癌的标准治疗模式,代替了既往的单纯放疗。但是在临床治疗中可以发现,不同的宫颈癌患者虽然同样接受放疗并行同步化疗,其预后也存在较大差异。这种治疗反应的差异不但与不同患者之间临床病理因素不同有关,也与肿瘤组织对同步放化疗的内在反应和内在敏感性密切相关。microRNA(miRNA)是一类内源性非编码单链小分子RNA,参与了不同肿瘤的发生发展。miRNAs表达谱用于预测肿瘤患者的治疗反应和临床预后,具有良好的稳定性和特异性,目前已经展示出其作为肿瘤标志物以及肿瘤治疗靶点的巨大潜能。本课题组的既往研究通过miRNAs表达谱芯片分析发现放疗抗拒组和放疗敏感组宫颈癌组织中共170个miRNAs呈显著性差异表达。结合靶基因预测网站的预测分析及文献检索,选取其中在肿瘤中研究较为广泛且表达差异在2倍以上的6个miRNAs作为区分抗拒组和敏感组的目标miRNAs。这6个miRNAs分别为miR-101、miR-125a-5p、miR-365、miR-886-3p、miR-1285和miR-492,前4者在放疗抗拒组表达升高,后2者表达下降。聚类分析发现这6个HierarchicalmiRNAs可以很好地区分抗拒组和敏感组。本研究在既往研究的基础上选取最常见的病理类型宫颈鳞状细胞癌患者为研究对象,结合文献查阅,对肿瘤组织miR-101及miR-1285表达水平与中晚期宫颈鳞癌同步放化疗敏感性的关系进行进一步的验证,并初步探讨其作用机制,以期初步阐释中晚期宫颈鳞癌同步放化疗反应的生物学机制,为个体化治疗打下基础。[材料与方法]收集2010年4月至2013年12月来中国医学科学院肿瘤医院行同步放化疗的中晚期宫颈鳞癌患者病例,在治疗前取得宫颈局部肿瘤组织。根据患者对同步放化疗的反应分为放疗抗拒组和放疗敏感组。放疗抗拒组为治疗结束时盆腔放射野内肿瘤没有消退或进一步增大,或出现新发肿瘤病灶,或治疗结束后12个月内发现肿瘤复发证据。放疗敏感组为治疗结束时盆腔放射野内肿瘤完全消退,没有新发肿瘤病灶,且治疗结束后12个月内无肿瘤复发证据。通过PCR方法检测放疗抗拒组和放疗敏感组肿瘤组织中miR-101及miR-1285的表达水TaqManreal-time平,通过WesternBlot方法分别检测其下游基因EZH2和p53的表达水平,并分析miR-101和miR-1285表达与下游基因表达之间的关系。[结果]放疗抗拒组宫颈癌组织miR-101相对表达水平显著高于放疗敏感组(p<0.01)。miR-101相对表达水平与肿瘤分期相关,ⅢB期患者的表达水平显著高于ⅡB期患者(p<0.05),但与年龄、组织学分级、局部肿瘤大小、影像学腹膜后淋巴结状况、治疗前SCC水平无关(p>0.05)；放疗抗拒组宫颈癌组织EZH2蛋白表达水平显著低于放疗敏感组(p=0.002)；miR101的表达水平与EZH2表达水平存在负相关(1=-0.46,p=0.036)。放疗抗拒组和放疗敏感组宫颈癌组织miR-1285相对表达水平没有显著差异(p>0.05),两组的p53相对表达水平亦没有显著差异(p>0.05),两者表达水平不存在相关性(p>0.05)。[结论]治疗前肿瘤组织miR-101相对表达水平与中晚期宫颈癌同步放化疗抗拒相关,其可能通过负性调节EZH2的表达参与了放疗抗拒的形成；miR-1285和p53的表达水平与中晚期宫颈癌同步放化疗敏感性无关。第二部分同步放化疗治疗中晚期宫颈鳞癌患者的疗效及预后N素的分析[背景与目的]宫颈癌是世界范围内及发展中国家妇女最常见的恶性肿瘤之一。在我国,宫颈癌发病率居女性生殖系统三大恶性肿瘤之首,其中,ⅡB期以上的中晚期患者约占60%-70%左右。这类患者往往预后差,疗效不佳。目前,根据几项大型随机对照临床研究,NCCN等指南已将CCRT列为中晚期宫颈癌的标准治疗模式,代替了既往的单纯放疗。然而,临床治疗中可以发现,虽然增加了同步化疗,不同的宫颈癌患者的预后仍然存在较大差异。导致这种治疗反应差异的原因可能与不同患者之间临床病理因素的不同有关,包括临床期别、局部肿瘤大小、治疗前鳞状上皮癌抗原(SquamousCellCarcinomaAntigen,SCC)水平、影像学腹膜后淋巴状况、病理类型、分化程度等。本研究选取宫颈鳞状细胞癌患者为研究对象,旨在探讨中晚期宫颈鳞癌患者同步放化疗的总体疗效,并分析影响预后的相关临床病理因素。[材料与方法]研究回顾性纳入了2007年1月至2008年12月期间在中国医学科学院肿瘤医院接受同步放化疗的172例ⅡB期-Ⅳ期宫颈鳞癌患者,所有的患者均接受了体外放疗、腔内近距离放疗和以顺铂为基础的同步化疗,收集其临床病理资料并进行长期随访。分析这些患者的生存预后,采用单因素分析(log-rank方法)和多因素分析(Cox回归)筛选影响生存预后的临床病理因素。[结果]中位随访时间为54.5个月。失访8例,失访率为4.7%。所有患者的2年总生存率(OverallSurvival,OS)为81.5%,5年OS为68.8%,2年无进展生存率(ProgressFreeSurvival,PFS)为69.2%,5年PFS为63.1%。单因素分析发现影响OS的因素有肿瘤分期(ⅡB期vs.Ⅲ期及以上,p<0.0001)、局部肿瘤最大直径(≤4cmvs.>4cm,p=0.001)、治疗前SCC水平(≤3ng/mlvs.>3ng/ml,p=0.001)、影像学腹膜后淋巴结转移情况(腹主动脉旁淋巴结阳性vs.仅盆腔淋巴结阳性vs.腹膜后淋巴结阴性,p<0.001)和血红蛋白水平(≤90g/lvs.90-100g/lvs.≥100g/l,p=0.040)。单因素分析发现对PFS有显著影响的临床因素包括肿瘤分期(p<0.001)、局部肿瘤最大直径(p=0.003)、治疗前SCC水平(p=0.001)、影像学腹膜后淋巴结转移情况(p<0.001)。Cox回归分析表明Ⅲ期及以上(p=0.021；p=0.020)、局部肿瘤最大直径>4cm(p=0.009；p=0.033)、治疗前SCC水平>3ng/ml(p=0.01；p=0.013)、影像学腹膜后淋巴结阳性(p=0.025；p=0.024)这4个因素是影响患者OS和PFS的独立不良因素,其中影像学腹主动脉旁淋巴结阳性(p=0.009；p=0.010)和仅盆腔淋巴结阳性(p=0.044；p=0.033)均为影响患者OS和PFS的独立不良因素。按以上预后不良因素个数0、1、≥2个将患者分为A组(n=18)、B组(n=43)、C组(n=111)。A、B两组的OS和PFS无显著性差异(p>0.05),C组分别与A、B组有显著性差异(p<0.05)。[结论]Ⅲ期及以上、局部肿瘤最大直径>4cm、治疗前SCC水平>3ng/ml和影像学腹膜后淋巴结阳性是行同步放化疗的中晚期宫颈鳞癌患者的独立预后不良因素,具有≥2个上述不良因素的患者疗效较差。
【作者】涂彬彬；
【导师】吴令英；
【作者基本信息】北京协和医学院，肿瘤学（专业学位），2014，博士
【关键词】宫颈癌；microRNA；同步放化疗；预后因素；

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