宽叶缬草抗H5N1病毒活性成分研究

【摘要】高致病性禽流感（HPAI），如H5N1、H7N9目前已突破种间障碍直接威胁人类的健康。从天然药物中寻找高效低毒的先导化合物是研制和开发抗HPAI药物的一条有效途径。本研究活性筛选以A/Tiger/Harbin/01/2002（HAB/01）H5N1病毒感染的犬肾细胞为模型，通过细胞病变法进行初步活性评价筛选，首次发现宽叶缬草提取物具有显著的抗H5N1病毒的活性。本论文对宽叶缬草有效活性部位的化学成分进行深入研究，并对分离得到的单体进行细胞水平的抗H5N1活性评价，为抗禽流感药物的研制与开发奠定基础。本论文运用硅胶柱色谱、SephadexLH20凝胶柱色谱、PHPLC和PTLC等方法进行分离纯化，从宽叶缬草根茎提取物中分离得到65个化合物，通过理化常数的测定，及MS、UV、IR、1DNMR1（HNMR13、CNMR）和2DNMR1（H1HCOSY、HSQC、HMBC、NOESY）等波谱数据分析，确定了其中60个化合物的结构，包括21个倍半萜类化合物VolvalerenalF（1）、VolvalerenalG（2）、VolvalerenicAcidF（3）、VolvalerenalH（4）、VolvalerenicAcidG（5）、VolvalerenalI（6）、VolvalerenalJ（7）、VolvalerenalK（8）、MadolinA（12）、VolvalerenlA（14）、VolvalerenlC（30）、VolvalerenlB（42）、MadolinB（46）、VolvalerenalD（50）、VolvalerenicA（54）、Aromadendrane4α,10βdiol（31）、15hydroxyspathulenol（32）、1hydroxy1,11,11decahydrocyclopropaneazulene10one（33）、4α,10αtrimethylepoxyaromadendrane（49）、Alloromadendrane4α,10βdiol（51）和VolvalerenicacidD（52），3个单萜类化合物DensispicninsC（9）、pmenth8ene1,2diol（36）和9hydroxyborneol（45），4个甾体类化合物βsitosterol（11）、豆甾烷3,7二酮（17）、3βHydroxy5α,8αepidioxyergosta6,22diene（41）和豆甾醇（55），2个三萜类化合物熊果酸（34）和齐墩果酸（56），6个黄酮类化合物3,5二羟基7,4’二甲氧基黄酮（16）、山奈酚（39）、刺槐素（47）、1,7二羟基3,8二甲氧基呫吨酮（57）、槲皮素（58）和棉花皮素（59），4个蒽醌类化合物1,3二羟基蒽醌（19）、1,2二羟基蒽醌（20）、1,3,8三羟基6羟甲基蒽醌（37）和大黄素（48），5个木脂素类化合物NeojusticinA（13）、JusticidinA（18）、Pinoresino（l26）、Pinorespio（l40）和8hydroxypinoresinol（43），以及11个芳环衍生物，其中化合物19为新化合物，化合物13、16–20、32、36、37、41、45、47、51、57共13个为首次从缬草属植物中分离得到，化合物21、22、29、34、38、39、55、56、58–60共11个首次从该植物中分离得到。本研究所发现的新化合物均为萜类化合物，其中VolvalerenalFH（12、4）、VolvalerenalAcidF（3、5）为双环吉玛烷类倍半萜化合物，VolvalerenalIK（68）为香木兰烷类倍半萜化合物，DensispicninsC（9）为缩醛骨架的单萜类化合物，这些化合物进一步丰富了宽叶缬草及缬草属植物的天然产物的结构类型。倍半萜的极性较小，多为油状化合物，使用硅胶柱色谱，三氯甲烷甲醇系统进行洗脱，具有较好的分离效果。对双环吉玛烷类和香木兰烷类倍半萜化合物的波谱学特征进行了总结。这两种类型倍半萜分子结构中都含有一个三元环，因此存在着一对特征的环丙烷质子（H6，H7）。在香木兰烷类倍半萜中，这一对质子一般出现在δH00.6，双环吉玛烷类型倍半萜的环丙烷质子化学位移一般在δH0.91.9，H6一般为dd或t峰，H7一般裂分为ddd峰，但由于和其他碳上质子化学位移较近，一般不容易区分，尤其是H7质子。δH1.61.9（H6）化学位移一般大于δH0.81.0（H7）双环吉玛烷类一般在C1和C5位双键碳上含有烯氢质子信号。13在CNMR中，双环吉玛烷类型化合物一般的会有2个或4个双键碳信号，2个环丙烷甲基质子信号，或者在C1和C10位形成一个环氧三元环，化学位移会增加到，C1和C10化学位移会增加到60～70之间。香木兰烷类型化合物，有两个环丙烷甲基质子信号，一般不含碳碳双键，如没有取代，C1化学位移在δC55左右，C5化学位移在δC48左右。通过CPE法对分离得到的部分化合物进行体外抗H5N1病毒活性评价筛选，结果发现化合物X在药物浓度为9.4g/mL时，CPE结果为“++”，有较好的抗H5N1病毒活性，且有较好的剂量依赖关系，可能为宽叶缬草抗H5N1病毒的活性成分之一，该类型化合物具有进一步研究开发的潜力；另外山奈酚（39）在浓度为37.5g/mL时，CPE评价结果为“+++”，也具有一定的抗H5N1病毒活性。
【作者】陈恒文；
【导师】董俊兴；
【作者基本信息】中国人民解放军军事医学科学院，药物化学，2014，博士
【关键词】宽叶缬草；禽流感；化学成分；倍半萜；新化合物；

【参考文献】
[1]林强.网络群体性事件现状分析与对策研究[D].河北师范大学,政治学理论,2012,硕士.
[2]刘玲利.世界三大奢侈品集团社会责任研究[D].华中科技大学,行政管理,2013,硕士.
[3]吴群慧.青藏铁路多年冻土地区环境保护措施[J].中国铁路.2002(01)
[4]王彦妮.基于智能优化算法的体绘制研究[D].浙江大学,2008.
[5]张丹.甘肃省农村本土文化自组织发展路径研究[D].兰州大学,行政管理,2013,硕士.
[6]陶红歌.组合式金属吸收体玻璃真空管及其系统研究[D].河南农业大学,农业生物环境与能源工程,2004,硕士.
[7]何婧宜.多传感器信息融合系统中目标跟踪技术的研究[D].西安工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[8]蔡丽莉.天机·看电影，走实景[D].浙江大学,新闻与传播（专业学位）,2013,硕士.
[9]矫明阳.游人对带状公园植物景观感知和评价的研究[D].北京林业大学,园林植物与观赏园艺,2013,硕士.
[10]朱国强.沧州电网保护定值在线校验分析系统的设计与测试[D].华北电力大学（河北）,电气工程,2004,硕士.
[11]王勇.斜臂泡沫分离塔回收乳清废水中大豆蛋白行为及中试工艺[D].河北工业大学,生物化工,2013,硕士.
[12]秦简.Al-4.5Cu-1.5Mg铝合金的时效成形[D].东北大学,材料学,2010,硕士.
[13]笨狸.武器的批判[J].知识经济,2001,09:75.
[14]洪芸.电信积分商城的设计与实现[D].厦门大学,软件工程,2014,硕士.
[15]董利飞.骨肉瘤患者生存期的影响因素分析[D].河北医科大学,外科学（专业学位）,2014,硕士.
[16]麻娜娜.含碳硼烷/金属碳硼烷化合物的电子结构和非线性光学性质的理论研究[D].东北师范大学,物理化学,2014,博士.
[17]王凌云.高中生物理问题表征能力的调查研究[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[18]许斐.基于时间因子的动态推荐算法研究[D].中南民族大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[19]张晓超.下肢康复训练机器人关键技术研究[D].哈尔滨工程大学,2009.
[20]王文平.豆粕发酵制备活性大豆肽工艺研究[D].华侨大学,微生物学,2013,硕士.
[21]宋娜.新型绿色阻垢剂ESA-HAPS共聚物合成工艺及性能[D].内蒙古工业大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[22]于凤雨.连续激光切割C70S6裂解槽数值模拟[D].吉林大学,材料工程,2013,硕士.
[23]秦瑞廷.终轧钢轨热预弯空冷后矫前弯曲度控制机理研究[D].燕山大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[24]丁毅.超声波料位计在槽位控制中的应用[J].冶金自动化,1995,02:56-57.
[25]刘剑清.基于信息融合的变压器健康状态综合评估系统研究[D].上海电力学院,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[26]陈晓丽.胡适读写教学观研究[D].吉林大学,课程与教学论,2014,硕士.
[27]刘栋.基于扩展P/S技术的社会协同软件生产模式的研究[D].合肥工业大学,计算机软件与理论,2003,硕士.
[28]黄涵英.移动互联网信源信任度评估[D].北京邮电大学,电子与通信工程（专业学位）,2013,硕士.
[29]程伟.TLBO算法的改进及其在桁架及钢框架结构优化设计中的应用研究[D].广东工业大学,工程力学,2014,硕士.
[30]张彦钊,李霞.关联规则在教学评价数据分析中的应用[J].微计算机应用,2005,05:616-619.
[31]吴春龙.基于Linux的透明加密文件系统[D].大连理工大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[32]董耀武.关于DFS-Ⅴ型数字地震仪脉冲响应问题的讨论[J].石油地球物理勘探,1995,S2:177-178+182.
[33]陆建江,宋自林,钱祖平.模糊关联规则在环境系统仿真中的应用[J].系统仿真学报,2001,01:96-97+117.
[34]李琴.高效液相色谱—串联质谱法检测干血滤纸片上他克莫司血药浓度的研究[D].复旦大学,药理学,2012,硕士.
[35]钱扬.企业网网络准入控制及终端安全防护研究[D].华南理工大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[36]宋为.盾构掘进泥水劈裂现象试验研究[D].北京交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[37]李和沛.能量采集传感网中数据收集协议研究[D].中南林业科技大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[38]韩崇昭,李晨,朱洪艳.红外搜索跟踪系统的数据关联算法研究[J].控制与决策,2008,02:171-176.
[39]张玉梅.改善抗盐聚合物油藏适应性方法及其效果研究[D].东北石油大学,油气田开发工程,2013,硕士.
[40]刘粉林,宋明武,吴灏,李静波.具有不确定未知界的相似组合系统的鲁棒自适应跟踪控制[J].控制与决策,2003,03:290-294.
[41]刘继学.武汉市楚河汉街建设中的问题研究[D].华中师范大学,人文地理学,2013,硕士.
[42]陈飞.HPM视角下的数学学困生转化研究[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[43]成泽枫.中国基础养老金全国统筹问题研究[D].苏州大学,社会保障,2014,硕士.
[44]薛超.鄂尔多斯盆地华庆地区长6储层流动单元微观渗流特征研究[D].西北大学,石油与天然气工程（专业学位）,2014,硕士.
[45]张晓龙.具有抑制WLAN干扰特性的超宽带滤波器设计[D].大连海事大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[46]郭峰.晚清杭州玉皇山福星观传戒研究[D].华中师范大学,专门史,2013,硕士.
[47]沈罕.奥林匹克文化下的首饰设计及首饰艺术[D].中国地质大学（北京）,设计艺术,2014,硕士.
[48]姚群燕.miR-146a在胃癌中的作用及相关机制研究[D].复旦大学,消化内科学,2013,博士.
[49]闫然.怀宁县县城建设对县域经济的拉动作用[D].安徽大学,区域经济学,2013,硕士.
[50]杨瑞凤.活性维生素D_3对糖尿病大鼠肾组织BMP-7、TGF-β1表达的影响[D].郑州大学,内科学,2013,硕士.