猪链球菌荚膜多糖基因簇的分析及血清型分子检测方法的建立

【摘要】猪链球菌(Streptococcussuis)是可导致人与猪严重疾病的人兽共患病病原体。目前,根据猪链球菌荚膜多糖(capsularpolysaccharide,CPS)的抗原性不同分为33个血清型。而荚膜多糖的产生及不同血清型之间的差异又由基因组中的荚膜多糖基因簇(cpscluster)所决定。之前,已经有针对15种血清型cpscluster中的血清型特异基因建立的单重或者多重PCR(mPCR)方法。在本研究的第一部分,我们建立了一套鉴定目前公认的33种血清型的mPCR方法。为了识别每个血清型的型特异基因,我们把33种血清型参考菌株做了高通量基因组测序,从中截取了每个血清型的cpscluster,并通过序列比对确定了每个血清型的型特异基因。我们选取了血清型特异基因中的wzy作为靶基因建立了4个mPCR反应体系(set1～4)。因为血清1型和14型的cpscluster,2型和1/2型的cpscluster高度同源,所以除了血清1型和14型,2型和1/2型,所有的血清型均可以由这套mPCR体系鉴定。mPCR体系的setl用来检测12种病人与病猪中最常见的血清分离型别(血清型1～10,1/2和14)；set2检测10种血清型(除血清14型外的血清11～21型)；set3检测剩下的11种血清型(血清22～31和33型)；set4用来检测表型为21和29型抗血清交叉凝集的新型cpscluster。在第一部分的研究中,仍然有大量菌株不可用血清凝集实验和已建立的mPCR方法(set1～4)鉴定。第二部分的研究中,我们选取了32株这样的菌株进行了全基因组高通量测序,并分析了它们的cpscluster,发现了10种新cpscluster型别。新cpscluster型别我们将它们分别命名为cpsⅠ～cpsX,然后针对这10种新cpscluster型别我们又建立了另外2个mPCR体系(set5和set6),mPCR体系set5用来鉴定7种新cpscluster型别cpsⅠ～cpsⅦ;set6用来鉴定3种新cpscluster型别cpsⅧ～cpsⅩ。我们在本研究中所建立的一系列多重PCR体系为鉴定猪链球菌血清型或cps型别提供了一种经济、快速并特异的方法。
【作者】刘志杰；
【导师】郑翰；徐建国；
【作者基本信息】中国疾病预防控制中心，病原生物学，2014，博士
【关键词】猪链球菌；荚膜多糖；血清型；多重PCR；wzy；

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