Treg/Th17在HBV感染的肝癌发生发展中的作用

【摘要】持续的HBV(hepatitisBviruses)感染所引起的慢性炎症损伤使肝细胞反复坏死和再生,从而启动肝细胞再生结节至不典型增生以至肝癌的发生过程。因此,HBV的感染所引起的炎症免疫反应是导致肝癌发生的关键所在。而淋巴细胞是机体免疫反应的主体,新近发现的具免疫抑制作用的调节性T细胞(regulatoryTcells,Treg)和具促炎作用的T辅助细胞17(Thelpercell17,Th17)起着控制机体免疫平衡的作用。多个研究表明,Treg和Th17细胞平衡的打破参与多种人类肿瘤的发生和发展。对于肝癌,有分别独立对Treg和Thl7的研究显示,两者均与肝癌的进展和患者预后相关。但是,到目前为止,Treg和Th17两者失衡在肝炎肝癌转化以及肝癌发生和发展中的作用尚未见文献报道。因此,本文旨在深入探讨抗炎的Treg和促炎的Th17在具有HBV感染背景的肝癌发生和发展过程中的作用,并阐述其可能的机制。目的1.明确慢乙肝进展为肝癌队列肝组织及外周血中Treg和Th17细胞以及血浆中相关因子IL-10和IL-17的表达情况,探讨两者平衡在有HBV感染背景的肝癌发生和发展中的作用。2.体外模拟具有HBV感染背景的肝癌微环境,进一步探讨Treg和Th17细胞的功能,以揭示两者在肝癌发展中可能的机制。3.采用循证医学的研究方法探讨和验证肿瘤浸润的FoxP3+Treg与肝癌患者预后的关系。方法1.以慢性肝炎进展为肝癌队列为研究模型,病理连续切片免疫组化检测46例慢乙肝、37例不典型增生、53例肝癌肝穿标本以及56例成对肝癌与癌旁手术标本中FoxP3+Treg及IL-17+T的表达情况以及对肝癌患者预后的影响。2.通过ELISA检测上述队列同时期血浆中IL-10及IL-17的表达情况以及与肝癌患者预后的影响。3.通过流式细胞术检测20例慢乙肝、19例肝硬化和52例肝癌肝及20健康对照者外周血中Treg和Th17表达情况。4.磁珠分选Treg、Th17及CD8+T细胞,体外与HepG2及整合HBV全基因组的HepG2.2.15细胞共培养,通过MTT和ELISpot检测Treg及Th17对肝癌特异性CTL杀伤作用的影响。5.采用BrdU/DAPI荧光双染、MTT定性定量检测Th17细胞对肝癌细胞增殖的影响,并用ELISA检测培养体系中VEGF、IL-6和TGF-β表达。6.检索PubMed,Embase,Cochrane,OvidMedline及万方中文数据库中研究肿瘤浸润FoxP3+Treg与肝癌预后关系的文献,并根据纳入和排除标准进行筛选,收集纳入文献的生存率与复发率,应用RevMan5软件对文献进行Meta分析。结果1.免疫组化结果显示：肝穿标本队列中,从慢乙肝到不典型增生再至肝癌发展过程中患者肝组织中的FoxP3+Treg密度逐步增加(CHBvsAH,P<0.001；AHvsHCC,P=0.045),而IL-17+T细胞密度呈降低的趋势(CHBvsHCC,P=0.041；AHvsHCC,P=0.045)；在手术标本中,低分化组肝癌患者肿瘤浸润的FoxP3+Treg细胞数量明显减少(PDvsWD,P=0.006；PDvsMD,P=0.003),但癌组织中FoxP3+Treg高于相应癌旁组织(P<0.001)。与之相反,高分化组肝癌患者肿瘤浸润的IL-17+T细胞密度明显降低(WDvsMD,P=0.031；WDvsPD,P=0.043),癌组织中IL-17+T与相应癌旁组织无统计学差异(P=0.065)。肿瘤浸润FoxP3+Treg和IL-17+T密度均高组患者的预后比其它患者差(OS,P=0.033；DFS,P=0.004).2.ELISA结果显示：血浆中IL-17、IL-10与肝癌患者临床特征及预后均无相关性(P>0.05)。3.流式细胞结果显示：从慢乙肝到肝癌外周血Th17/Treg比率呈降低的趋势。HCC组患者外周血中Thl7/Treg与肝癌分期相关(P=0.026)。4.肝癌患者外周血中免疫磁珠分选的Treg能通过降低最佳效靶比共培养体系中肝癌特异性CTL分泌的IFN-γ的水平(P<0.05)来促进肝癌细胞增殖(P<0.05)。但Th17对最佳效靶比共培养体系中肝癌特异性CTL分泌的IFN-γ的水平无明显影响(P>0.05)。而Th17与肝癌细胞共培养时,随着Thl7浓度增加,体系中VEGF和IL-6浓度也随之增加(P<0：05),肝癌细胞增殖也越明显(P<0.05).5.Meta分析结果显示：高肿瘤浸润FoxP3+Treg患者的1、3、5年术后生存率低于低FoxP3+Treg浸润患者(P<0.001),而高肿瘤浸润FoxP3+Treg患者的1、3、5年术后复发率高于低FoxP3+Treg浸润患者(P<0.001)。结论1.Th17和Treg细胞相互配合促进肝癌的发生和发展。肿瘤浸润FoxP3+Treg和Th17密度均高患者术后预后越差。2.Treg通过抑制肝癌特异性CTL的杀伤能力表现出促癌作用。但Th17并不能通过促进CTL的杀伤能力起抗肝癌作用,而是过促血管生成、IL-6等通路促进肝癌细胞的增殖。3.Meta分析显示FoxP3+Treg在肝癌组织中高表达是术后预后不良的标志。
【作者】黄勇；
【导师】杜智；
【作者基本信息】天津医科大学，肝胆外科，2014，博士
【关键词】肝细胞肝癌；慢性肝炎,乙型；不典型增生；调节性T细胞；Th17细胞；

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