乌司他丁改善重症急性胰腺炎大鼠T淋巴细胞凋亡的线粒体机制

【摘要】目的：观察乌司他丁对重症急性胰腺炎大鼠T淋巴细胞凋亡的影响,证实乌司他丁的直接免疫调节效应；通过分析乌司他丁对重症急性胰腺炎大鼠脾淋巴细胞氧化应激水平及线粒体凋亡信号通路等的影响,阐释其改善T淋巴细胞凋亡的分子机制。方法：清洁级Wistar大鼠36只,随机分为(n=12)：(1)假手术对照(Sham)组；(2)重症急性胰腺炎(SAP)模型组；(3)乌司他丁治疗组。采用胆胰管逆行注入5%牛磺胆酸钠的方法制备大鼠SAP模型,乌司他丁治疗组在制作SAP模型后经尾静脉缓慢注射乌司他丁1万U/Kg体重。术后24小时首先采用直接免疫荧光法对CD4+和CD8+T淋巴细胞进行标记,再应用Annexin-V/PI双染法标记凋亡细胞,流式细胞仪检测各组大鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞比例及各亚群凋亡细胞比例；以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测各组大鼠淋巴细胞内活性氧水平,羟胺法检测血清超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛含量；以罗丹明123为探针,流式细胞仪检测各组大鼠淋巴细胞线粒体膜电位,采用酯化钙黄绿素和氯化钴共孵育的方法检测线粒体通透性转换孔开放水平。结果：1、与假手术对照组相比,SAP模型组CD4+T淋巴细胞比例、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值均显著下降(P<0.01),同时CD4+T、CD8+T淋巴细胞亚群凋亡细胞比例均显著升高(P<0.01),尤以CD4+T淋巴细胞为著,乌司他丁治疗组CD4+T淋巴细胞的凋亡比例显著降低(P<0.01),CD4+T淋巴细胞比例和CD4+/CD8+T淋巴细胞比值则显著回升(P<0.01);2、SAP模型组淋巴细胞内ROS荧光强度及血清MDA含量显著高于假手术对照组(P<0.01),血清SOD活力则显著低于假手术对照组(P<0.01),乌司他丁治疗组淋巴细胞内ROS水平和血清MDA含量显著下降(P<0.01),血清SOD活力则显著回升(P<0.01);3、SAP模型组线粒体通透性转换孔异常开放的淋巴细胞比例较假手术对照组显著升高(P<0.01),线粒体膜电位降低的淋巴细胞比例增多(P<0.01),乌司他丁治疗组线粒体通透性转换孔的异常开放和线粒体膜电位下降的淋巴细胞比例显著下降(P<0.01)。结论：1、乌司他丁通过减少SAP大鼠CD4+T淋巴细胞的异常凋亡,改善机体免疫抑制状态,起到直接的免疫增强效应；2、乌司他丁可显著降低SAP大鼠脾淋巴细胞内ROS水平,提高血清SOD活力及降低血清MDA含量,从而通过有效提高机体对氧自由基的清除能力,降低淋巴细胞凋亡程度,减轻氧化应激对SAP大鼠免疫功能的影响；3、乌司他丁通过打断ROS与线粒体损害间的恶性循环,阻断线粒体凋亡信号通路,从而实现其减少淋巴细胞凋亡,改善机体免疫功能的作用。
【作者】王春立；
【导师】尤胜义；
【作者基本信息】天津医科大学，中西医结合临床，2012，博士
【关键词】乌司他丁；重症急性胰腺炎；免疫抑制；细胞凋亡；氧化应激；线粒体；

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