远隔肢体缺血后适应对大鼠脑缺血TLR4介导的保护作用机制的研究

【摘要】目的：通过制备大鼠大脑中动脉阻塞(Middlecerebralarteryocclusion,MCAO)线栓模型,探讨无创性肢体远隔缺血后适应(Remoteischemicpostconditioning,RPC)对大鼠急性期脑缺血损伤是否具有保护作用。并进一步探讨RPC对大鼠脑缺血再灌注损伤后近期及远期神经功能恢复影响及TLR4-MyD88信号转导通路在RPC中的作用机制。为脑梗死的特异性治疗提供新的思路。方法：本实验分三步进行,第一部分,建立稳定的大鼠MCAO线栓模型,证明无创性远隔缺血后适应对缺血脑组织的保护作用。90只健康雄性SpragueDawley(SD)大鼠(250g-300g),随机分为5组,每组18只：(1)假手术组(sham组);(2)缺血2h再灌注组(ischemicreperfusion,I/R组)；(3)缺血原位后适应组(ischemicpostconditioning,IP组)；(4)缺血即刻后适应组(remoteischemicpostconditioningatbeginningofischemic,I-RPC组)；(5)再灌注即刻后适应组(remoteischemicpostconditioningatbeginningofreperfusion,R-RPC组)。各组大鼠分别于再灌注后24h进行神经功能缺损评分,采用TUNEL法测凋亡细胞、干湿称重法测脑含水量、TTC染色拍照、Image-ProPlus软件分析,计算脑梗死体积,IHE染色光镜观察形态学。第二部分,通过建立稳定的大鼠MCA02h线栓模型,探讨反复远隔缺血后适应对大鼠脑缺血15天内神经功能恢复情况的影响。将成年健康雄性SD大鼠90只,随机分为3组,每组30只,各组大鼠根据时间不同(1d、3d、6d、10d、15d)各分为5个亚组,每亚组6只：(1)假手术组(sham组)；(2)缺血2h再灌注组(I／R组)；(3)远隔缺血后适应组(RPC组)。于相应天数时间点(1d、3d、6d、10d、15d)行无创性RPC完毕后6h进行神经功能评分,神经功能评分完毕后处死大鼠,采用TUNEL法对海马细胞进行凋亡检测,免疫组化法检测hs-CRP。第三部分,在证实远隔缺血后适应脑保护作用的基础上,探讨其可能机制。72只健康雄性SD大鼠(体重250g-300g)随机分为缺血再灌注组(I/R组,n=24)；远隔缺血后适应组(RPC组,n=24)；假手术组(sham组,n=24)。各组分为12h、24h、48h、72h4个时间点组(n=6)。HE染色观察海马病理学变化；使用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测海马区TLR4蛋白的表达,原位杂交法测定海马区TLR4mRNA的表达。免疫组织化学染色测定海马区MyD88、NF-κB、hs-CRP、IL-6的表达。结果：(1)与对照组相比,IP组、I-IPC组、R-RPC组大鼠凋亡细胞水平、脑水肿程度、脑梗死体积、再灌注24h神经系统评分、病理改变程度均明显降低,具有统计学差异(p<0.05)；但IP组、I-IPC组、R-RPC组3组之间两两对比无显著性差异(P>0.05)。(2)I/R组与RPC组评分高于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05);RPC组各时间点NSS评分较工/R组低,差异有统计学意义(P<0.05)；(3)HE染色Sham组大鼠海马结构清晰,神经元形态正常,排列整齐、层次分明；I／R组大鼠海马结构松散,神经元缺失明显,可见较多神经元胞体缩小、核固缩深染,也有胞体肿胀、胞浆内形成空泡的神经元以及小片状坏死区域；RPC组神经元缺失、细胞肿胀较I/R组明显减轻,细胞形态趋于改善。(4)Sham组海马区各时间点TLR4蛋白、TLR4mRNA、MyD88和NF-κB表达水平均较低。I/R组与RPC组水平较Sham组明显增高(P<0.05)。RPC组TLR4蛋白、TLR4mRNA和MyD88、NF-κB阳性表达在各时间点均低于I/R组(P<0.05)。(5)Sham组海马区各时间点hs-CRP和IL-6仅有少量表达,I/R组与RPC组hs-CRP和IL-6表达较Sham组明显增高(P<0.05),RPC组hs-CRP和IL-6阳性表达在各时间点均低于I/R组(P<0.05)。结论：无创性肢体远隔缺血后适应同大脑原位缺血后适应一样可以减少大鼠急性缺血脑梗死体积,减轻脑水肿,能够改善大鼠脑缺血15天内神经功能缺损程度,对大鼠急性脑缺血具有神经保护作用,其机制可能与下调TLR4-MyD88信号转导通路、抑制炎症细胞因子释放有关。
【作者】常莉莎；
【导师】程焱；
【作者基本信息】天津医科大学，神经病学（专业学位），2014，博士
【关键词】大鼠；远隔缺血后适应；脑保护；TLR4-MyD88；信号转导通路；

【参考文献】
[1]毕微微.蛋氨酸、赖氨酸二肽对奶牛乳腺上皮细胞泌乳机能的影响[D].东北农业大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[2]廖春燕.含壳聚糖微球的壳聚糖—聚己内酯支架用于TGF-β1因子的控制释放研究[D].华中科技大学,生物材料与组织工程,2013,硕士.
[3]王昕.CD36调控在精氨酸抗大鼠动脉粥样硬化中的作用[D].复旦大学,内科学,2012,硕士.
[4]风春.复合性状转基因棉花对土壤生物多样性的影响[D].内蒙古师范大学,植物学,2013,硕士.
[5]赵涯楠.家族企业招聘有效性的实证研究[D].兰州商学院,企业管理,2014,硕士.
[6]俞磊.故事化叙事模式在电视综艺节目中的应用研究[D].浙江大学,新闻学,2013,硕士.
[7]李鹏.面向医疗器械行业的客户关系管理应用研究[D].天津工业大学,企业管理,2004,硕士.
[8]郭春林.吉林省长春市离退休干部代谢综合征及相关因素的回顾分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[9]丁昭洋.基于能力素质模型的直招通信士官培训体系研究[D].电子科技大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[10]黄晓斌.论网络文献信息的挖掘[J].图书情报知识,2002,06:6-10.
[11]张世成.抗虫基因cry3Bb*对早粳稻空育131的转化[D].黑龙江大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[12]崔飞.循环技术的应用和环境规制对循环型企业竞争力影响研究[D].杭州电子科技大学,企业管理,2013,硕士.
[13]吴文昊.中学地理问题教学方法的应用研究[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[14]甄丹彤.基于神经网络集成Ada-S算法的文本分类[D].北京化工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[15]潘杰.智能交通系统中最优路径选择的设计与实现[D].大连理工大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[16]黄广.高超声速飞行器残差自调节高精度控制算法研究[D].哈尔滨工业大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[17]赵莹莹.默想语音识别：算法研究[D].苏州大学,微电子学与固体电子学,2014,硕士.
[18]刘艳云.氧化锌/氧化石墨烯的合成与性能研究[D].山西大学,2011.
[19]杜义飞.创新者最优许可数量决策与信心指数调节作用[J].控制与决策,2013,05:753-757+762.
[20]王蕊.壳聚糖—坡缕石—聚乙烯醇三元复合膜的制备及其对伊维菌素的缓释行为[D].西北师范大学,化学工程,2013,硕士.
[21]孙涵奇.蒙古族民歌改编的多声部合唱中复调因素[D].内蒙古师范大学,音乐学,2012,硕士.
[22]苏宜根.变异刚拱架结构设计理论及实践研究[D].西安建筑科技大学,结构工程,2004,硕士.
[23]徐作涛.核糖生产废水和奥利斯他生产废水处理的工程技术研究[D].南昌大学,环境工程（专业学位）,2012,硕士.
[24]邵丹丹.天然抗氧化剂对节球藻毒素诱导的鱼体免疫细胞毒效应的保护作用及机理研究[D].杭州师范大学,生态学,2013,硕士.
[25]应国清,杨岳微,梅建凤,易喻,金志华.马克斯克鲁维酵母羰基还原酶基因的克隆与表达[J].微生物学通报,2013,08:1393-1402.
[26]束珏婷.沪市上市公司资产重组财务绩效研究[D].清华大学,会计学,2003,硕士.
[27]沈国全.异氟醚吸入麻醉下耗氧量及产热量的变化[D].中国医科大学,麻醉学,2004,硕士.
[28]王贝贝1,2,3,施明雨1,2,3,王冬1,2,3,许骄阳2,3,刘怡2,3,杨洪江1,戴住波2,3,张学礼2,3.代谢工程改造酿酒酵母生产β-胡萝卜素[J].生物工程学报.
[29]付艳艳.苄嘧磺隆和烟嘧磺隆对土壤中微生物活性的影响[D].西南大学,农药学,2013,硕士.
[30]孔朋.基于WDF的光纤传输卡PCIe接口驱动的研究和实现[D].西北大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[31]郭泽镔.超高压处理对莲子淀粉结构及理化特性影响的研究[D].福建农林大学,农产品加工及贮藏工程,2014,博士.
[32]夏玥.我国商业银行理财产品质押法律制度研究[D].长春工业大学,民商法学,2013,硕士.
[33]陈玉明.新型液芯光纤性能与实验研究[D].南京航空航天大学,光学工程,2004,硕士.
[34]张蕊.从“胡同”到“酒吧”[D].安徽大学,新闻学,2014,硕士.
[35]宋适宇,何光宇,徐彭亮,张王俊,梅生伟.输电网单线图的自动生成算法[J].电力系统自动化,2007,24:12-15.
[36]汪炜.涿州市网格化无线电监测系统的设计与研究[D].河北大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[37]吴轶凡.毕节特色烟叶单元建设现状及配套技术研究[D].湖南农业大学,作物,2012,硕士.
[38]李司月.非物质文化遗产国际条约保护的冲突与协调[D].北京外国语大学,国际商事交易法与国际公法,2014,硕士.
[39]张运秋.液化天然气船进出坞过程货舱处理仿真研究[D].大连海事大学,船舶与海洋工程,2013,硕士.
[40]赵钢炜.褐煤热解定向转化的实验研究[D].中国科学院研究生院（工程热物理研究所）,工程热物理,2014,博士.
[41]牟广山.东18井区沉积微相及剩余油研究[D].东北石油大学,地质工程（专业学位）,2013,硕士.
[42]石蓬莱.针刺左侧阴陵泉穴对青年大脑前动脉血流速度及PI、RI的影响的研究[D].黑龙江中医药大学,针灸推拿学（专业学位）,2014,硕士.
[43]于淑静.论中国二十世纪三十年代小说的幽默品格[D].河北师范大学,中国现当代文学,2004,硕士.
[44]李琳.纳西族服饰之图腾遗存审美[D].中国社会科学院研究生院,中国少数民族语言文学,2003,硕士.
[45]王铮铮.美国情景喜剧幽默名词的汉译研究[D].吉林大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[46]刘锴.基于光伏组件特性与温度建模的光伏阵列特性预测[D].华中科技大学,电气工程,2013,硕士.
[47]卫水水.山西临汾方言词汇研究[D].东北师范大学,汉语言文字学,2012,硕士.
[48]李静.上市公司选择性信息披露监管研究[D].华中师范大学,民商法学,2013,硕士.
[49]钟茂法.DE型氧化沟处理乌鲁木齐城市污水效果及其影响因素研究[D].新疆大学,环境科学,2013,硕士.
[50]廖福香.中国90后大学生的生命观研究[D].西南交通大学,伦理学,2013,硕士.