通心络对心脏微血管内皮缺血再灌注损伤的保护机制研究

【摘要】通心络通过激活MEK/ERK信号通路诱导细胞自噬而在缺氧/复氧损伤过程中保护心脏微血管内皮细胞背景与目的：关于缺血再灌注损伤的机制研究中,心肌细胞的自噬发生及调节研究较多,而心脏微血管内皮细胞中自噬的作用尚未被探索。通心络是一种具有血管保护功能的中药复方制剂,目前在中国此药已用于6百万心脑血管疾病患者。因此,本研究的目的即探索缺氧/复氧损伤时自噬在心脏微血管内皮细胞中的作用,以及通心络对其的调节机制。方法：给予不同药物处理心脏微血管内皮细胞30分钟后,缺氧2小时,复氧2小时。不同浓度的通心络溶液,人参皂甙Rgl,芍药苷以及3-甲基腺嘌呤(3-MA),雷帕霉素,PD98059等药物被用以研究自噬与凋亡的关系以及其在心脏微血管内皮细胞中的调节机制。结果：缺氧/复氧明显地升高了心脏微血管内皮细胞的自噬水平,表现为单丹磺酰尸胺(MDC)染色阳性的细胞数目增加,透射电镜下自噬体形成增多,微管蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ/Ⅰ的比值升高；然而Beclin-1的水平并无变化。自噬抑制剂3-MA显著促进了细胞凋亡,而自噬促进剂雷帕霉素则抑制了细胞凋亡。通心络浓度依赖性地增加了细胞自噬水平和降低了细胞凋亡率,在800μg/mL时达到最佳效应,可将凋亡率从21.04±1.11%降至9.92±0.49%。3-MA明显抑制了通心络的促自噬及抗凋亡的作用,而雷帕霉素并没有进一步增加通心络的促自噬及抗凋亡的作用。通心络促进了MEK和ERK蛋白的磷酸化；加入MEK/ERK抑制剂PD98059后,与单用通心络相比,ERK的磷酸化水平降低,细胞自噬被削弱,并且细胞凋亡率增加。结论：上述结果表明,自噬诱导在缺血再灌注过程中对心脏微血管内皮细胞中是一种保护机制。通心络可以通过激活MEK/ERK信号通路诱导细胞自噬。中药通心络可调节缺血再灌注损伤时心脏微血管内皮细胞的分泌功能背景与目的：心脏微血管内皮细胞在缺血再灌注损伤时可通过近分泌及旁分泌功能调节心肌细胞及血液细胞的功能。通心络是一种由人参和其他11种天然药材构成的中药复方制剂,具有保护内皮和防治心肌缺血再灌注损伤的功能。因此,我们设·计此研究以发现在缺氧/复氧环境下心脏微血管内皮分泌功能的改变,以及通心络对其变化的调节作用。方法：以不同浓度的通心络处理心脏微血管内皮细胞30分钟后,缺氧12小时,复氧2小时。流式细胞术分析凋亡率以确定通心络作用的最佳浓度。蛋白芯片双抗体夹心法检测心脏微血管内皮细胞在缺氧/复氧后培养基上清中发生变化的细胞因子。基因本体论分析及文献综述发生变化的细胞因子的功能。结果：通心络在缺氧12小时/复氧2小时的环境下浓度依赖性地抑制了心脏微血管内皮细胞的凋亡,并且仍然在800μg/mL的浓度达到顶峰,可降低凋亡率从35.15±0.78%到14.64±2.23%。缺氧/复氧环境显著改变了细胞分泌的33种细胞因子的水平,其中19个因子下降,14个因子上调。通心络改变了121个细胞因子的变化情况,其中93个下降,28个上调。发生显著变化的细胞因子的功能集中于细胞分化,增殖,信号通路的调节,以及物质转运等方面。在发生显著变化的所有细胞因子中,被缺氧/复氧上调但被通心络下调的有10个,如单核细胞趋化因子-2；被缺氧/复氧下调但被通心络上调的有5个,如滤泡抑素；缺氧/复氧组下降,通心络组进一步下降的有8个,如碱性成纤维细胞生长因子；胰岛素样生长因子结合蛋白在缺氧/复氧组分泌增多且在通心络组进一步上调。结论：通心络抑制了在缺氧/复氧情况下诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡,并且其保护心肌缺血再灌注损伤的作用与调节缺氧/复氧时心脏微血管内皮细胞的旁分泌功能有关。
【作者】崔贺贺；
【导师】杨跃进；
【作者基本信息】北京协和医学院，内科学，2014，博士
【关键词】自噬；通心络；心脏微血管内皮细胞；缺血再灌注损伤；信号通路；细胞因子；旁分泌；

【参考文献】
[1]黄勇长.语文新课程与高考改革研究[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[2]黄洪添.《东西晋演义》人物形象研究[D].华中科技大学,古代文学,2013,硕士.
[3]杨金和,陈文敏.在执行新煤炭分类中需要明确的几个问题[J].煤炭科学技术.1987(05)
[4]张树海.某电动轿车电控系统研究[D].吉林大学,车辆工程,2012,硕士.
[5].第18届亚洲国际动力传动与控制展览会(PTCASIA2013)技术评述[J].液压气动与密封,2014,01:8-14+7.
[6]张洪梅.时间Petri网及其在仿真系统概念建模中的应用[D].哈尔滨工业大学,控制科学与工程,2014,硕士.
[7]王海杰.温敏型有机—无机杂化纳米微胶囊的制备与表征[D].安徽大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[8]王付民.矿区生态资源环境可持续发展评价研究[D].西安建筑科技大学,矿业工程,2004,硕士.
[9]李晓慧.艺术设计中的形态结构研究[D].大连工业大学,设计艺术学,2009,硕士.
[10]段敏芳.市场调查实践课调查方案设计与数据分析[J].统计教育,2005,10:15-18.
[11]张浩南.血管内皮功能损伤与冠心病的关系及阿托伐他汀钙对血管内皮功能的影响[D].吉林大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[12]王双.北京市西城区行政服务中心流程再造研究[D].华中科技大学,行政管理,2013,硕士.
[13]王君杰.基于Bi_2O_3薄膜的ReRAM及其电阻开关特性研究[D].杭州电子科技大学,微电子学与固体电子学,2011,硕士.
[14]郭燚平.基于形状上下文的复杂车牌识别系统[D].杭州电子科技大学,计算机应用技术,2011,硕士.
[15]郭鸣.面向对外汉语教学的汉葡语音对比分析[D].湖北大学,语言学及应用语言学,2011,硕士.
[16]罗冰.跨开发平台中间件PAW的设计与实现[D].华中科技大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[17]杨哲.基于层状双氢氧化物的功能性杂化材料的制备与表征[D].复旦大学,2013.
[18]韩俊号.若干石墨烯体系的弱局域化效应以及其中无序导致的反常量子现象的研究[D].南京大学,材料物理与化学,2013,硕士.
[19]陶张印.《南华雪心编》研究[D].安庆师范学院,中国古代文学,2013,硕士.
[20]周小春.我国商业银行并购与效率获利的实证研究[D].湖南大学,金融学,2003,硕士.
[21]王雪葵.柔性臂的动力学模型与控制的研究[D].东北大学,模式识别与智能系统,2011,硕士.
[22]马冰.论我国夫妻财产制契约规则的适用限度[D].吉林大学,法律,2013,硕士.
[23]赵君官.速射火炮身管冷却研究[D].中北大学,火炮、自动武器与弹药工程,2013,硕士.
[24]张颖.基于广义线性模型的IBNR准备金的评估研究[D].杭州电子科技大学,统计学,2012,硕士.
[25]杨小兵.扶正抗癌方对吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的增效研究[D].广州中医药大学,中医内科学（专业学位）,2014,博士.
[26]张玮.大型水泥企业发展机制砂石骨料的探讨[J].建材发展导向,2014,14:.
[27]张宁.TMV和PVX侵染后烟草和番茄中FdI及IP-L的表达分析[D].西南大学,植物病理学,2014,硕士.
[28]吴海兵,李华.FDI对我国中部地区技术进步影响的实证研究[J].经济地理,2013,06:36-41.
[29]刘洪磊.多维分析在学院级办公自动化系统中的应用研究[D].东北大学,计算机应用技术,2010,硕士.
[30]谭志刚.无线传感器网络密钥管理与安全认证技术研究[D].南京邮电大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[31]樊重俊,韩崇昭,胡保生,王洁.一类约束优化问题的改进遗传算法[J].控制与决策,1996,05:609-612.
[32]李莉.京东易学思想要义[D].西北大学,中国哲学,2013,硕士.
[33]黎娜.吉林省居民不安全驾驶行为现状及其影响因素分析[D].吉林大学,流行病与卫生统计学,2014,硕士.
[34]陈志金.广州市工商局企业信用监管研究[D].兰州大学,公共管理,2012,硕士.
[35]孙影.电流模式Boost变换器中分叉与混沌现象的研究[D].东北农业大学,农业电气化与自动化,2013,硕士.
[36]许莹.陕西发展新能源产业的路径选择[D].西安外国语大学,区域经济学,2013,硕士.
[37]杨兴亮.城市停车换乘系统规划方法研究[D].长安大学,交通运输规划与管理,2014,硕士.
[38]张慧.太阳能高温真空集热管表面增透膜的制备工艺控制及性能[D].兰州交通大学,交通信息工程及控制,2013,博士.
[39]牛禄青.石墨烯:开启碳时代?[J].新经济导刊,2013,08:50-53.
[40]刘颖慧,高琼,贾海坤.半干旱地区3种植物叶片水平的抗旱耐旱特性分析——两个气孔导度模型的应用和比较(英文)[J].植物生态学报,2006,01:64-70.
[41]杨立东.城市交通的人性化研究[D].武汉理工大学,交通运输规划与管理,2004,硕士.
[42]周猛飞.草甘膦合成过程控制系统研究[D].浙江工业大学,2004.
[43]郭晶晶.SOA环境中的身份认证技术研究[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[44]张涤平,陈贤光,郑华淦,吴园园,曲和之,盛光阳.那曲肝素钙的紫外光谱法检测与应用[J].药物生物技术,2013,05:439-442.
[45]岳小静.血清IGF-1与2型糖尿病肾病的相关性分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[46]张小明.基于DDA的金属纳米颗粒光学特性及微操控研究[D].哈尔滨工业大学,物理电子学,2013,硕士.
[47]安雅丽.框架与记忆中的红卫兵运动：南京市案例[D].南京大学,国际关系,2013,硕士.
[48]毛笑文.黄河上游沿岸带旅游空间结构优化研究[D].西北师范大学,2005.
[49]袁文静.关怀理论在高校师生关系构建中的应用研究[D].河北师范大学,思想政治教育,2014,硕士.
[50]蔡彬.《我的朋友》教学设计[D].吉林大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.