内质网应激在特发性肺纤维化中的作用

【摘要】第一部分内质网应激对C57BL/6小鼠肺纤维化模型的影响研究目的建立博莱霉素小鼠肺纤维化模型,观察衣霉素诱导的内质网应激及Salubrinal阻断内质网应激通路对肺纤维化的干预作用,并探讨可能机制。研究方法1.应用单次气管内给药方法建立小鼠肺纤维化模型。2.观测小鼠呼吸、活动、进食、毛发及体重情况,肺组织病理切片Ashcroft评分及羟脯氨酸测定评估小鼠肺纤维化的严重程度。3.采集小鼠支气管肺泡灌洗液,进行炎症细胞计数；应用ELISA法测定BALF中TGF-p和MMP2蛋白含量；应用TUNEL法检测肺泡上皮细胞细胞凋亡。4.应用免疫组化法及Westernblot法检测小鼠肺组织中CHOP、GRP78、α-SMA及E-cadherin蛋白的表达。5.应用Real-TimePCR法检测小鼠肺组织XBP1、Caspase3、α-SMA及TGF-pRNA的表达。研究结果1.与博莱霉素组及对照组小鼠相比,衣霉素干预组小鼠纤维化评分分值明显升高,salubrinal干预组小鼠纤维化评分分值明显减低。2.与博莱霉素组小鼠相比,衣霉素干预组小鼠BALF中TGF-p和MMP2蛋白含量较高、肺泡上皮细胞细胞凋亡较明显,salubrinal干预组小鼠上述指标明显减低。3.与博莱霉素组小鼠相比,衣霉素干预组小鼠肺组织中CHOP、GRP78、α-SMA表达水平较高,E-cadherin蛋白的表达水平较低：Salubrinal干预组CHOP、GRP78、α-SMA表达水平较低。4.与博莱霉素组小鼠相比,衣霉素干预组小鼠肺组织中Caspase3、α-SMA及TGF-β1蛋白的表达水平较高,Salubrinal干预组小鼠上述指标明显减低。实验结论衣霉素诱导的ERS可加重博莱霉素诱导的C57BL/6小鼠的肺纤维化,机制可能与促进AECs凋亡及诱导EMT相关。Salubrinal阻断内质网应激的PERK通路可减轻博莱霉素及衣霉素联合博莱霉素诱导的C57BL/6小鼠的肺纤维化,在肺纤维化疾病治疗中具有应用前景。第二部分内质网应激在特发性肺纤维化患者中的作用研究目的观察IPF患者肺组织及血浆内质网相关蛋白的表达,探讨内质网应激在IPF患者中的作用及其可能机制,评估相关生物标记物在临床中的应用前景。研究方法1.应用TUNEL免疫荧光染色观察肺泡上皮细胞凋亡情况；2.应用免疫组化方法检测a-SMA、GRP78、CHOP及E-cadherin在肺组织切片中的表达；3.应用ELISA方法检测IPF及正常对照组血浆CK18(M65)及cCK18(M30)的表达。实验结果1.TUNEL免疫荧光染色观察,在100倍荧光显微镜下观察显示IPF患者肺泡上皮区域有散在的凋亡荧光表达。2.IPF患者肺内a-SMA、GRP78、CHOP明显表达,上皮细胞标记物E-cadherin似有表达,但不显著。3.M30/M65比值在吡非尼酮治疗IPF患者治疗12个月有明显下降；M30在IPF的支气管肺泡灌洗液浓度低于其他DPLD。实验结论IPF患者血浆CK18(M65)及cCK18(M30)的检测有一定鉴别意义。IPF患者肺泡上皮细胞存在明显凋亡,可能机制包括内质网应激及凋亡蛋白酶诱导上皮细胞凋亡。第三部分连花清瘟制剂临床用药安全性的系统评价研究目的系统评价连花清瘟制剂临床用药的安全性。研究方法检索中国生物医学文献数据库(CBM)、中国学术期刊全文数据库(CNKI)、索Cochrane图书馆、MEDLINE、EMbase;收集连花清瘟胶囊和颗粒随机对照临床文献,检索时限均从2003年1月至2013年5月。实验结果纳入随机对照临床文献40篇,试验组2592例,对照组2314例。试验组有63例发生不良反应,发生率为2.4%,对照组有100例发生不良反应,不良反应发生率为4.3%。试验组与对照组相比不良反应发生率明显偏低[RR=0.562,95%CI(0.412-0.767)]。纳入的文献中有24篇有不同类别的不良反应报道,统计分析结果提示连花清温制剂不良反应发生率低于其它对照组[RR=0.62,95%CI(0.46,0.82)]。不良反应系统评价亚组分析提示消化系统不良反应发生率低于其它对照组[RR=0.70,95%CI(0.50,0.97)]。实验结论连花清瘟临床常见的不良反应为胃肠道反应和皮疹,在不同疾病用药过程中,不良反应发生率明显低于对照组。
【作者】王艳勋；
【导师】徐作军；
【作者基本信息】北京协和医学院，呼吸内科，2014，博士
【关键词】衣霉素；Salubrinal；内质网应激；特发性肺纤维化；CK18；cCK18；连花清瘟胶囊；随机对照试验；系统评价；Meta；分析；

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