核因子-κB及干扰素调节因子3在抗肿瘤免疫中的作用

【摘要】核因子-kB(Nuclearfactor-KB,NF-kB)是几乎表达于所有有核细胞,参与细胞几乎所有的生命活动,并且在自身免疫性疾病、肿瘤等人类疾病的发生、发展中发挥中重要作用。特别是在很多肿瘤中的高表达,提示了其在促进肿瘤发生、发展中的作用,但NF-kB在抗肿瘤免疫中的作用研究较少。本课题组长期从事NF-kB通路的相关研究。本课题组在前期研究的基础上,探索NF-kB通路及干扰素调节因子3(interferonregulatoryfactor3,IRF3)通路活化对抗肿瘤免疫反应的调节作用。本课题研究分为以下三个部分：第一部分,首先构建稳定表达目的基因的细胞系及对照细胞系,包括LLC-Mig、LLC-IKKβ、LLC-OVA-Mig及LLC-OVA-IKKβ。其次体外验证了组成型活化的IKKp可以在细胞内稳定表达,并能促进下游信号分子NF-kB转位进入细胞核内,启动目的基因趋化因子配体1(chemokine(C-X-Cmotif)ligand1,cxcl1)的表达。第二部分,利用所构建的稳定表达细胞株接种C57BL/6小鼠,发现LLC-Mig和LLC-IKKβ细胞都可以在小鼠体内稳定成瘤,并且生长速度无明显差异。但与LLC-OVA-Mig相比,LLC-OVA-IKKβ在肿瘤形成过程中可发生免疫排斥,肿瘤缩小甚至消失。但在Rag2-/-基因缺陷鼠中上述差异消失,提示了淋巴细胞在肿瘤免疫排斥中的作用。Tetramer法显示LLC-OVA-IKKβ小鼠外周血OVA特异性的CD8+T细胞比例未增加,Elispot显示LLC-OVA-IKKβ刺激小鼠T细胞分泌干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的能力也未增加,只有肿瘤局部CD8+T细胞浸润增加。为了探索介导肿瘤局部T细胞浸润增加的机制,基因芯片分析LLC-OVA-Mig及LLC-OVA-IKKβ细胞基因表达差异,发现趋化因子配体2(chemokine(C-Cmotif)ligand2,ccl2)在LLC-OVA-IKKP中表达高于对照细胞,同时realtimePCR及ELISA均验证了CCL2在LLC-OVA-IKKβ中的高表达。干扰LLC-OVA-IKKβ中CCL2的表达后,肿瘤在C57BL/6体内生长而不再出现免疫排斥,提示CCL2在趋化淋巴细胞至肿瘤局部发挥排斥肿瘤生长的过程中有重要作用。第三部分,构建能够激活NF-kB通路的其他重要分子的腺病毒表达载体,包括AdNIK、AdIRF3、AdIKKα、AdIKKβ及对照病毒载体AdGFP,所有目的基因均为组成型活化状态。首先验证了目的基因在细胞内的稳定表达,并且在TUBO乳腺癌细胞系内可以激活下游相关靶基因的转录表达；其次利用所构建的病毒载体皮下免疫Balb/c小鼠,仅细胞免疫反应有短时间的增强；但对于接种TUBO的小鼠,发现与对照相比,肿瘤内注射AdIRF3后肿瘤生长相对缓慢,并且肿瘤局部浸润CD8+T细胞及CD4+T细胞显著增加,而Treg细胞比例在各组间无明显差异。并且Elispot显示AdIRF3组T细胞在接受GFP抗原刺激后可分泌更高水平的IFN-γ。综上所述,可以得出如下结论：IKKβ可以活化NF-kB信号通路并上调CCL2的表达,CCL2可以趋化淋巴细胞至肿瘤局部,启动免疫系统的免疫清除功能,排斥肿瘤的生长；同时IRF3的激活也可以使肿瘤局部的淋巴细胞浸润增加和杀伤功能增强来延缓肿瘤的生长。
【作者】张晶；
【导师】任秀宝；
【作者基本信息】天津医科大学，肿瘤学，2014，博士
【关键词】肿瘤免疫趋化因子细胞趋化因子-2；核因子-κB；干扰素调节因子3；

【参考文献】
[1]丁敬军.价值澄清理论对我国高校德育的启示[D].中国地质大学（北京）,马克思主义理论,2013,硕士.
[2]姚从春.乙基纤维素气体复合膜的制备与改性研究[D].大连理工大学,化学工程,2013,硕士.
[3]张盈利,刘开辉,王文龙,白雪冬,王恩哥.石墨烯的透射电子显微学研究[J].物理,2009,06:401-408.
[4]林侃.GIS技术支持下市级环境信息系统的建设[J].福建地理,2004,03:51-53.
[5]李新运,乔平林,李成名,林宗坚.城市群分布轴线挖掘方法研究[J].测绘科学,2004,01:17-19+4.
[6]王冬雪.在服装工艺课中,运用多媒体进行教学[J].电子制作,2015,16:187.
[7]李广文.面向夹具CAD的知识挖掘技术的研究与应用[D].南京航空航天大学,航空宇航制造工程,2004,硕士.
[8]华莺.磁盘的数据恢复系统研究与设计[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[9]周斌,魏春埝,陈小龙.乳链菌肽的基因工程研究进展[J].发酵科技通讯,2014,02:29-32+41.
[10]袁艺丹.C公司跨文化人力资源管理中的激励模式研究[D].首都经济贸易大学,工商管理,2013,硕士.
[11]宫帅.慢性阻塞性肺疾病与动脉粥样硬化的相关性研究[D].川北医学院,内科学,2013,硕士.
[12]董小康.“导学案”引领下高效历史课堂模式的创新[D].辽宁师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[13]赵江鹏.现中风病登记制度下吸烟与中风病证候相关性初探[D].北京中医药大学,中医内科学,2013,硕士.
[14]王振雷,唐苦,王昕.一种基于D-S和ARIMA的多模型软测量方法[J].控制与决策,2014,07:1160-1166.
[15]杜刚.球形储罐CAD系统的研制与开发[D].大连理工大学,化工过程机械,2004,硕士.
[16]刘晨青.基于三层架构的客车智能安全信息系统研究[D].西安工业大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[17]梁明明.滨海新区文化产业研究[D].天津财经大学,马克思主义中国化研究,2012,硕士.
[18]徐新.企业免疫力的影响因素研究[D].武汉理工大学,企业管理,2012,硕士.
[19]任晓敏.滥用职权罪的客观要件研究[D].西南政法大学,刑法学,2012,硕士.
[20]奚新春.浅析我国公司法中的独立董事与监事会双轨监督机制[D].复旦大学,法律,2012,硕士.
[21]黄绍辉.论电子证据的证据能力和证明力[D].青岛大学,诉讼法学,2013,硕士.
[22]张小梅.温肾咳喘片对CYP450基因表达的影响及其大鼠体内药物代谢、代谢组学分析[D].广东药学院,药物分析,2012,硕士.
[23]张璐.Pitch Contour of Nuclear Word and Its Relation with Prosodic Boundaries: A Study Based on a Large-scale English Corpus[D].浙江大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[24]何君勇.改性纳米二氧化硅—阴离子水性聚氨酯复合研究[D].天津大学,材料学,2004,硕士.
[25]曲艺.高频脉冲电镀Ni-Co-SiC复合镀层制备及性能研究[D].北京交通大学,2014.
[26]张野,娄焕志.北京东城区体育生活化重点工程导向系统配色方案研究[J].装饰,2015,01:110-111.
[27]温益琳.桂林海事局工作人员差异化管理研究[D].大连海事大学,公共管理,2012,硕士.
[28]晁秋娟.浅析某精密铸造车间现状及改造措施[J].中国铸造装备与技术,2015,01:60-62.
[29]宋加丽,张雪,王雪峰,冯金福,刘玉申.铝或磷原子掺杂下锯齿型硅烯纳米带的自旋热电效应[J].常熟理工学院学报,2014,04:11-16.
[30]陈小健.咪唑盐聚离子液体凝胶电解质的合成及其在染料敏化太阳能电池中的应用[D].苏州大学,应用化学,2013,硕士.
[31]肖荣军.CRM的致胜之道[J].企业改革与管理,2005,04:76-77.
[32]范盛荣.基于POCKET PC环境下掌上油液监测系统的设计和实现[D].武汉理工大学,载运工具运用工程,2004,硕士.
[33]嘉红云.单纯性肥胖儿童肾素血管紧张素系统与心血管疾病易患因素的关系探讨[D].山西医科大学,小儿心血管内科,2002,硕士.
[34]吴敏.EHD2对乳腺癌细胞生长和迁移能力影响[D].天津医科大学,生物化学与分子生物学,2009,硕士.
[35]杜瑜.通信企业运营监控指标体系研究[D].北京邮电大学,信息管理与信息系统,2013,硕士.
[36]吴桂荣.子宫内膜癌与代谢综合征关系的研究进展[D].蚌埠医学院,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[37]丁新新.基于互联网的旅游信息传播对旅游目的地演化的影响[D].山东大学,企业管理,2013,硕士.
[38]林琳.晚期非小细胞肺癌的治疗与逆转化疗耐药的探索性研究[D].北京协和医学院,肿瘤内科学,2014,博士.
[39]严晓艳.行政法视角下的食品安全风险警示制度研究[D].扬州大学,宪法学与行政法学,2012,硕士.
[40]邵福泽.基于进入权理论的权力配置与公司绩效的实证研究[D].吉林大学,企业管理,2013,硕士.
[41]刘恺.从情愫天山创作说天山山水画[D].新疆师范大学,艺术,2013,硕士.
[42]杨进伟.基于SSI+OperaMasks-UI的商业银行客户信息管理系统的设计与实现[D].厦门大学,软件工程,2014,硕士.
[43]肖绪武.社会主义市场经济条件下医院文化建设研究[D].大连理工大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.
[44]王国波.最小包含球问题和最小相交球问题的解的存在性和唯一性[D].吉林大学,运筹学与控制论,2014,硕士.
[45]王新军.夏寨水库泥沙淤积分析及合理运用方式研究[D].西安理工大学,水利工程,2003,硕士.
[46]彭淑鸽,樊昕洁.氨基杂化石墨烯催化剂载体的制备、表征与应用[A].河南省化学会.河南省化学会2014年学术年会论文摘要集[C].河南省化学会:,2014:1.
[47]周澍晖.论绘画艺术中的稚拙美[D].河南大学,美术学,2004,硕士.
[48]张倩.论社交网络使用与社会资本获得的关系[D].西南大学,社会学,2013,硕士.
[49]安光辉.基于光电检测原理的棉花质量流量在线测量系统设计及研究[D].石河子大学,农业电气化与自动化,2012,硕士.
[50]曹文博.基于无线传感器网络的危险品运输车辆监控系统设计[D].长安大学,控制工程（专业学位）,2013,硕士.