四君子汤对慢性心衰大鼠心肌组织蛋白质组学影响的研究

【摘要】目的：1.通过观察四君子汤对心衰模型大鼠心功能和心肌组织蛋白组学表达的影响,探讨四君子汤治疗慢性心衰的机理；2.通过研究益气健脾中药四君子汤对心衰大鼠模型心肌组织蛋白质组学的影响,以期为中医“心脾相关”理论提供一定的分子生物学证据。方法：1.动物模型制备选取SD雄性大鼠42只,随机留取6只作为空白对照组,其余36只采用腹主动脉缩窄法构建心衰模型,常规喂养8周,通过多导生理记录仪检测大鼠左室舒张压(LVEDP),若LVEDP≥15mmHg,则说明慢性左心衰大鼠模型建立成功。空白组大鼠以同样方法打开腹腔,但不进行腹主动脉缩窄。术后大鼠予肌肉注射青霉素1周(50000U/只),预防感染。2.分组及给药方法腹主动脉缩窄术后大鼠死亡13只,存活23只,随机抽取一只检测血流动力学,将剩余22只造模大鼠随机分为模型组5只、卡托普利组5只、四君子汤高剂量组6只、四君子汤低剂量组6只。按实验方案灌胃给药1月,四君子汤高剂量组按11.88g生药/(kg·d)给药、四君子汤低剂量组按2.97g生药/(kg·d)给药,卡托普利组按100mg/(kg·d)给药,空白组和模型组分别予相同体积生理盐水灌胃。3.检测项目及方法游离右颈总动脉,把充满肝素的塑料导管逆行插至左心室,另一端接多媒体生物信号记录仪,测定如下血流动力学指标：左心室收缩压(LVSP),左心室舒张压(LVEDP),左心室内压上升最大速率(+dp/dt)、下降最大速率(-dp/dt),心率(HR)。称重后腹腔注射麻醉,迅速处死大鼠并取出心脏,用低温生理盐水数次冲洗,用滤纸吸干多余水分,剪去左右心房和血管组织,从室间隔分离左右心室并分别用电子天平称取重量,左右心室质量分别除以体重得左心室质量指数(LVMI)、右心室质量指数(RVMI)。在测得相关数据后,取一部分左心室心肌组织用10%福尔马林固定,制作病理组织切片,用光镜观察心肌细胞和心肌间质的变化,并摄片对比。4.蛋白质组学分析分别提取慢性心衰大鼠模型四君子汤高剂量组和模型组等量左心室组织,经研磨、提取、纯化后采用双向凝胶电泳分离心肌蛋白,分别进行银染和考染,扫描凝胶,利用图像软件分析差异蛋白,并选择有显著差异的蛋白点进行胶内酶切和质谱鉴定。利用BioTools软件搜索NCBI数据库,寻找并确定差异蛋白质。结果：1.模型组心功能较其他各组降低,左心室质量指数增加(与空白组比较P<0.05),血流动力学指标与空白组比较(P<0.05)有显著差异,四君子汤高剂量组可明显改善心衰大鼠心功能,心室质量指数与模型组比较(P<0.05),血流动力学指标与模型组比较有显著差异(P<0.05)。2.光镜下可见模型组病理片心肌细胞排列十分不规则、细胞增生肥大,细胞核移向细胞内部,间质水肿,充血明显；四君子汤高剂量组心肌细胞排列整齐、细胞肥大减轻、间质水肿和充血状况明显消退,接近于空白组。3.心肌蛋白经双向凝胶电泳、考染、扫描后,计算机图像分析,模型组可分辨蛋白点为(1615±7)个,匹配率为82.26%,四君子汤组可分辨蛋白点为(1583±60)个,匹配率为82.27%个。分别以每组中的一张胶作为参考胶,其余胶与之匹配,平均匹配率为(80.4±1.9)%。四君子汤组与模型组相比较,表达明显差异的点共59个,其中四君子汤高剂量组表达明显增强的点有31个,模型组表达明显增强的有28个。各选取9个差异显著(Volume值相差≥1.5倍)的蛋白点进行质谱鉴定,通过整合去重,鉴定出5种蛋白。与模型组比较,四君子汤高剂量组表达下调的蛋白有2个：丝氨酸蛋白酶抑制剂A3N(SerineproteaseinhibitorA3N)、丙酮酸脱氢酶复合体(Pdhxprotein)。与模型组比较,四君子汤高剂量组表达上调的蛋白有3个：Suclg2蛋白(Suclg2protein)、线粒体肌酸激酶(CreatinekinaseS-type,mitochondrial)、肌球蛋白轻链2(myosinregulatorylightchain2);这5种蛋白中与心肌能量代谢相关的有3个,与心肌重构和收缩功能相关的有2个。结论：1.四君子汤能改善慢性心衰模型大鼠的心功能,改善心肌细胞结构和功能。2.四君子汤可调控慢性心衰大鼠心肌组织的多种蛋白表达,可能是通过调节能量代谢、减少心肌重构、增强收缩功能而改善心功能。
【作者】邱俊；
【导师】刘友章；
【作者基本信息】广州中医药大学，中医学，2014，博士
【关键词】四君子汤；慢性心衰；心功能；心肌蛋白质组学；

【参考文献】
[1]郭樱.苏州市生态补偿机制研究[D].苏州大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[2]杨冬梅.初中外来务工人员子女思想品德现状与教育对策研究[D].山东师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[3]李春华.益心康汤剂治疗高血压左心室肥厚的临床研究[D].黑龙江中医药大学,中医内科学,2004,硕士.
[4]李璐,宣慧玉,高宝俊.数据通讯业务的决策模型研究[J].纺织高校基础科学学报,2003,04:335-339.
[5]赵鸿雁.工程师知识结构模型建构研究[D].东北大学,科学技术哲学,2009,硕士.
[6]苏士凯.陕南居住建筑墙体材料热工性能及其应用研究[D].西安建筑科技大学,建筑技术科学,2013,硕士.
[7]周政.基于ERP的E集团内部公司业务流程模型研究[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[8]胡挺,沈文华.整体上市、多元化战略转型与经济后果——以广州日报报业集团为例[J].财会通讯,2015,09:68-71.
[9]文湘.商业银行危机预警体系构建研究[D].兰州理工大学,会计学,2012,硕士.
[10]李春.海上打桩过程动态监测与分析[D].天津大学,船舶与海洋结构物设计制造,2013,硕士.
[11]吉尚凯.创业板上市公司治理结构与公司绩效关系研究[D].天津商业大学,企业管理,2013,硕士.
[12]王樱洁.母子公司交叉持股问题研究[D].湖南师范大学,民商法学,2013,硕士.
[13]孟晓苏.北京内销物业发展走向[J].中外房地产导报.1997(16)
[14]吴林玲.我国金融犯罪立法完善研究[D].安徽大学,法律,2014,硕士.
[15]张玉.协作通信中关于中继选择和功率分配的研究[D].杭州电子科技大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[16]刘庆国.壮骨镇痛胶囊治疗腰椎间盘突出症（肝肾亏虚偏阳虚型）的临床疗效观察[D].湖南中医药大学,中医骨伤科学,2013,硕士.
[17]韩世杰.高层建筑室内WCDMA信号的覆盖[D].山东大学,电子与通信工程（专业学位）,2012,硕士.
[18]李中伟,佟为明,刘勇.PCIDeviceNet板卡和短窗Morlet复小波在继电保护测控系统中的应用[J].电力系统自动化,2006,07:93-97+107.
[19]杜金莲,郭文君,迟忠先.用神经网络选择多维数据挖掘空间的研究[J].小型微型计算机系统,2002,09:1100-1103.
[20]张茹.太湖县农村3-7岁学前儿童成长教育环境状况的调研报告[D].安徽大学,社会工作,2014,硕士.
[21]张建刚,毛剑琴,夏天,魏可惠.模糊树模型及其在复杂系统辨识中的应用[J].自动化学报,2000,03:378-381.
[22]张立军.黑龙江省密山市地质灾害研究[D].吉林大学,地质工程,2014,硕士.
[23]余晓.负性共刺激分子Tim3在急性髓系白血病的表达及作用研究[D].苏州大学,内科学,2014,硕士.
[24]钟琳佳.基于知识管理的人力资源管理系统的研究与开发[D].重庆大学,2004.
[25]王烨.超声心动图对非心源性缺血性卒中患者左心功能的评价[D].大连医科大学,神经病学,2012,硕士.
[26]罗洋.Rolling-Wolf轮腿式机器人设计及优化[D].重庆大学,机械工程（专业学位）,2014,硕士.
[27]陈勇.人羊膜间充质干细胞和人羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病模型大鼠的效应比较[D].遵义医学院,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[28]皮钧,王建军.拖拉机框架驾驶室管材空间弯形的新方法[J].农业机械学报.2005(02)
[29]张文魁.如何提高爆破效率[J].煤炭科学技术.1986(03)
[30]陈晓.河北省县域特色农业产业化融资创新研究[D].河北经贸大学,金融,2014,硕士.
[31]朱晓宁,隆冰.多路公交优先交叉口配时优化的双层规划模型[J].交通运输工程学报,2014,01:103-111.
[32]向军.不同土地处置方式下的农民工进城落户意愿的影响因素分析[D].大连理工大学,行政管理,2013,硕士.
[33]田松江.高速铁路跨线列车开行方案优化研究[D].西南交通大学,交通运输规划与管理,2014,硕士.
[34]菅元春.基于股权结构的上市公司负债融资治理效应研究[D].山东财经大学,会计学,2014,硕士.
[35]宋炬.简单复制模式的职业发展困境[D].中国社会科学院研究生院,社会政策（专业学位）,2014,硕士.
[36]叶秀玲.用歌声塑造形象[D].上海师范大学,音乐学,2004,硕士.
[37]薛娟娟.基于供应链金融的中小企业融资模式及其信用风险研究[D].武汉理工大学,会计学,2012,硕士.
[38]刘彦昆.天津天士力公司品牌竞争力研究[D].沈阳理工大学,企业管理,2012,硕士.
[39]霍丽花.中职生双亲教养态度与心理健康相关研究[D].河北师范大学,心理健康教育,2014,硕士.
[40]马泽宇,姜久春,张维戈,王占国,郑林锋,时玮.锂离子动力电池热老化的路径依赖性研究[J].电工技术学报,2014,05:221-227.
[41]沈佳.论股东大会决议的约束力[D].华东政法大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[42]窦明理.奶粉中耐热芽孢菌的分离及快速检测方法的建立[D].东北农业大学,食品科学,2013,硕士.
[43]张娟文.非酒精性脂肪性肝病患者血清黄嘌呤氧化还原酶活性变化及作用机制[D].浙江大学,临床检验诊断学,2013,硕士.
[44]徐常练,许云,乌达巴拉.浅层速度横向变化对深层速度分析的影响[J].石油地球物理勘探,1999,04:457-464+490.
[45]郭翼飞.“为人生而艺术”[D].华东师范大学,中国哲学,2013,硕士.
[46]蔡波.我国房地产上市公司竞争力分析[D].天津大学,2004.
[47]李劲松.大学生公寓园区德育整体模式构建与实施研究[D].湖南大学,2003.
[48]杨振萍.农村小学教师走教问题的研究[D].山东师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[49]谷旸.基于创意设计服务平台信息交互设计研究[D].东华大学,工业设计工程（专业学位）,2014,硕士.
[50]RafaelOrtegon.中国文化对在华外国商人的影响与启示[D].宁波大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.