补肾活血中药治疗激素性股骨头缺血性坏死的蛋白质组学和临床研究

【摘要】背景：股骨头缺血性坏死(ONFH)是因各种原因导致股骨头血供受损或中断,继而引起骨细胞及骨髓成分变性、坏死,进而致使股骨头结构发生改变,晚期伴有股骨头塌陷,引起患者髋关节疼痛、功能活动受限的疾病,是骨科领域常见的、多发的、难治的疾病之一,一般预后比较差,致残率高。近些年来,激素在临床上得到越来越广泛的使用,而其引起的激素性股骨头缺血性坏死(SANFH)已经占非创伤性股骨头缺血性坏死的首位。探讨SANFH具体的发病机制,对疾病的早期诊断和治疗均有极大的帮助,但SANFH明确的发病机制目前仍不是十分清除,流行的引起该病的发病机制主要有以下几种：脂质代谢紊乱学说,血管内凝血学说,骨质疏松学说,骨内高压学说,血粘度增高学说,血管炎性变学说以及其他多种学说。蛋白质组学技术是相对比较新的研究领域,近年来对其技术的研究在相关领域得到了一定程度上的普及。该技术从机体的整体着手,研究生命活动规律,揭示生理及病理现象,已经在医药相关领域得到极其广泛的研究和应用,其能发现与疾病诊断、治疗及判断预后有关的小分子量、低丰度蛋白质及多肽的信息,进而在基础医学研究和临床医学研究中发挥重要的作用。蛋白质组学在骨科疾病的研究中已经取得多项重大进展,包括在激素性股骨头缺血性坏死研究领域,均显示了广阔的发展前景。中医药在SANFH的早期预防和治疗中均发挥着不可替代的作用,已有大量研究证明多种中药单体和复方对早期的SANFH具有明确的治疗效果。袁氏生脉成骨片(以下简称生脉成骨片)是我院经验用药,对其已经进行了大量的基础和临床研究,证实其具有补肾活血、消肿止痛、改善循环及提高机体免疫力的作用,但用其治疗早期股骨头缺血性坏死患者前后血清蛋白标志物究竟有何变化,以及其治疗股骨头缺血性坏死更具体的作用机制仍有待进一步的深入研究,以为进一步开发新药或提高药物疗效奠定基础。目的：1.比较生脉成骨片治疗SANFH患者前后血清中蛋白的表达,通过双向电泳及质谱分析技术明确及鉴定治疗前后表达水平上调或下调的蛋白质,并通过蛋白质组生物信息学查询差异蛋白的功能,以揭示该药物具体的作用机制,并做出对其疗效的初步判定。2.比较生脉成骨片治疗SANFH患者前后血脂六项(总胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白AI、载脂蛋白B、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白)的变化,髋关节Harris评分(包括疼痛、功能、活动范围及畸形四项)的变化以及VAS评分水平的变化,观察生脉成骨片对患者的临床治疗作用,除此之外,验证基础研究中相关差异蛋白治疗前后表达水平的变化是否符合实验室检查指标的变化。方法：1.基础研究收集2012年3月至2013年9月在广州中医药大学第一附属医骨科门诊就诊并确诊为激素性股骨头缺血性坏死的患者,共20例,全部为ARCO分期Ⅰ～Ⅱ期的患者。采用自身前后对照,服药前为对照组,提取患者血清,置于-80。冰箱备用；服药后为实验组,所有患者均给予生脉成骨片,口服,每日3次,每次8粒,治疗期间停止服用激素,2个月后患者复查时再次抽取患者血液,提取血清。将治疗前后的样本分别混匀,应用双向电泳技及质谱分析技术建立两样本的血清蛋白图谱,找出两样本间有统计学差异的蛋白质,并鉴定及查询差异蛋白的具体功能,筛选出药物治疗前后的变化与SANFH有重要关联的蛋白。2.临床研究研究对象同基础研究部分,检测生脉成骨片治疗SANFH患者前后血脂六项的变化,以及髋关节Harris评分、VAS评分治疗前后的变化,进行统计学分析,明确生化指标及评分变化是否具有统计学上的差异。结果：1.在本论文基础研究中,生脉成骨片治疗SANFH患者后,血清中共21个有显著统计学差异(大于2倍)的蛋白点被筛选,其中实验组患者蛋白质点表达上调的共6个,并标记为A组分别编号,实验组患者表达下调的点14个,标记为B组分别编号,成功鉴定21个蛋白点,在NCBI数据库TooLs及Bio软件搜索,得到的有重要差异蛋白点共有5个。2.所有患者经生脉成骨片治疗干预后,总胆固醇治疗前后的水平分别为6.04±1.86及4.36±0.94,p<0.05,有统计学差异；甘油三酯治疗前后的水平分别为1.99±0.84及1.56±0.72,p<0.05,有统计学差异；高密度脂蛋白治疗前后的水平分别为1.29±0.59及1.88±0.36,p<0.01,有显著的统计学差异；低密度脂蛋白治疗前后的水平分别为3.18±0.90及2.94±0.53,p>0.05,无统计学差异；载脂蛋白AI治疗前后的水平分别为1.09±0.46及1.44±0.33,p<0.05,有统计学差异；载脂蛋白B治疗前后的水平分别为0.85±0.22及0.64±0.31,,p<0.01,有显著的统计学差异；治疗前后Harris疼痛评分分别为34.40±4.56及41.2±1.80,p<0.01,有显著的统计学差异；功能评分别为34.75±3.67及43.40±2.46,p<0.01,有显著的统计学差异；活动范围评分分别为4.33±0.02及4.73±0.02,p<0.01,有显著的统计学差异；Harris总评分分别为34.40±4.56及41.2±1.80,p<0.01,有显著的统计学差异；VAS评分治疗前后分别为7.39±0.57及4.00±0.51,p<0.01,有显著的统计学差异。结论：1.生脉成骨片治疗SANFH患者后,血清中四连接素、血清谷胱甘肽过氧化物酶、载脂蛋白E表达下调；载脂蛋白AI、锌α2糖蛋白表达上调,从蛋白组学方面说明补肾活血中药生脉成骨片能纠正脂肪代谢紊乱,增强血管的自我保护能力,延缓SANFH的进展,为坏死区域的重塑和修复提供良好的环境。2.生脉成骨片能部分纠正患者高脂血症的状态,并显著减轻SANFH患者的疼痛,改善其功能,提高患者生活质量。
【作者】韩旭东；
【导师】樊粤光；
【作者基本信息】广州中医药大学，中医骨伤科学（专业学位），2014，博士
【关键词】生脉成骨片；激素性股骨头缺血性坏死；蛋白质组学；双向电泳；差异蛋白；

【参考文献】
[1]张娜.2,2’:6’,2″-三联吡啶羧酸衍生物金属配合物的合成及性质研究[D].湖南师范大学,有机化学,2013,硕士.
[2]曾兆伟.中石化第十建设公司发展战略研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[3]陈端.三辊联合穿轧机工艺分析及液压同步压下系统设计分析[D].太原科技大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[4]肖传富.响应性高分子/Au杂化微凝胶的合成及催化性能研究[D].厦门大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[5]杨东鹏.南京市旅游公共服务体系政策支持研究[D].南京农业大学,公共管理,2013,硕士.
[6]石蕾.呼和浩特市初中生英语学业情绪与英语学习自我效能感的关系研究[D].内蒙古师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[7]周圻山.国际融资租赁合同法律问题研究[D].华东政法学院,法律,2003,硕士.
[8]乔梅,韩文秀.基于VPRS的决策树算法中处理噪音数据的新方法[J].计算机应用,2005,05:989-991.
[9]范秀英.富硒及高谷胱甘肽酵母菌选育的研究[D].天津科技大学,发酵工程,2004,硕士.
[10]李井良.阳极氧化法制备钛酸钡纳米管阵列工艺研究[D].哈尔滨工业大学,材料学,2013,硕士.
[11]张恩源.电力市场环境下安全电价及需求弹性理论与实证研究[D].华北电力大学（北京）,技术经济及管理,2004,硕士.
[12]郑志雄.公众参与城市治理研究[D].宁波大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[13]何庆宇.陈慈黉故居建筑形式研究[D].广东工业大学,设计学,2013,硕士.
[14]黄杰勋,陈星,李非里,盛光遥.厌氧条件下ShewanellaoneidensisMR-1对2,4-二硝基甲苯的还原转化[J].微生物学通报,2013,09:1734-1741.
[15]黎洁.《新青年》与马克思主义在中国的传播[D].南方医科大学,马克思主义中国化研究,2012,硕士.
[16]李坤.论地理教学中可持续发展观念的培养[D].湖南师范大学,学科教学论,2004,硕士.
[17]朱斯豹.云南田冲白钨矿床萤石包裹体及地球化学研究[D].成都理工大学,矿物学、岩石学、矿床学,2013,硕士.
[18]冯飞.具有复杂结构的硅基MEMS压力敏感膜片的制作及其应用研究[D].安徽大学,光学,2014,硕士.
[19]孙艾琦.银屑病患者CD45外显子4和6基因突变的检测[D].大连医科大学,皮肤病与性病学,2012,硕士.
[20]张宝聪.美日宽带接入新进展[J].邮电商情.2002(19)
[21]周志永.基于USB技术的电话录音系统应用研究[D].杭州电子科技大学,电路与系统,2011,硕士.
[22]陈文龙,刘海超.甲醇脱氢和选择氧化制备甲酸甲酯的催化剂与反应路径[J].科学通报,2015,16:1502-1512.
[23]王治民,陈炯聪,任雁铭,王斌,孙凤娇.网络通信记录分析系统在数字化变电站中的应用[J].电力系统自动化,2010,14:92-95.
[24]于博维.中美水污染防治法比较研究[D].中国地质大学（北京）,环境与资源保护法学,2014,硕士.
[25]楊寧.近五年（2008-2012）新見汉魏六朝石刻搜集與整理[D].西南大学,中國古典文獻學,2014,硕士.
[26]马鑫.基于ObjectARX技术的铸件凝固进程数值模拟和凝固条件对凝固组织的影响[D].大连理工大学,材料加工工程,2004,硕士.
[27]鲍进.论保证人抗辩权[D].安徽大学,法律,2003,硕士.
[28]张明.UV-B依赖硝酸还原酶（NR）介导的NO信号途径诱发桦树叶中黄酮合成积累[D].杭州师范大学,遗传学,2013,硕士.
[29]吕梦菲.我国商业银行操作风险管理研究[D].吉林大学,金融学,2014,硕士.
[30]金若楠.『水滸伝』の日本語訳について吉川幸次郎·清水茂訳と駒田信二訳を中心に[D].西安外国语大学,日语语言文学,2014,硕士.
[31]肖玲玲.巯基功能化活性炭的制备及其对Hg~(2+)的吸附性能研究[D].天津大学,化学工程,2013,硕士.
[32]邸向乾.南极磷虾保鲜及虾糜特性研究[D].上海海洋大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[33]石坚.OsSHN1和OsMYB48参与水稻木质素合成调控的研究[D].华中农业大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[34]李伟,崔丽娟,庞丙亮,马牧源,康晓明.湿地生态系统服务价值评价去重复性研究的思考[J].生态环境学报,2014,10:1716-1724.
[35]何丽梅,侯涛.环境绩效信息披露及其影响因素实证研究——来自我国上市公司社会责任报告的经验证据[J].中国人口.资源与环境,2010,08:99-104.
[36]景元元.中铝SD国际贸易公司国际市场拓展营销策略研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[37]王涛.西宁市产业集群发展研究[D].青海师范大学,人文地理学,2012,硕士.
[38]吕海宁.壳聚糖季铵盐的合成及其在棉织物上的应用[D].青岛大学,纺织化学与染整工程,2004,硕士.
[39]宋芳.西部地区中小企业清洁生产实施影响因素研究[D].中南民族大学,企业管理,2013,硕士.
[40]李星星.学术虚拟社区成员关系社会网络研究[D].华中师范大学,情报学,2013,硕士.
[41]孙斐.多元化企业集团资金集中管理方案研究——HT企业集团资金集中管理案例研究[D].四川大学,工商管理,2003,硕士.
[42]杨韵韵.基于社会视角的中亚留学生汉语学习动机研究[D].新疆大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[43]马晓赟.展会业务辅助系统设计研究[D].广东工业大学,设计学,2014,硕士.
[44]曹邦卿.安全运行的新农村供水设施建设与管理对策[J].中国集体经济(下半月).2007(12)
[45]汲科一.论优势证据说在环境侵权因果关系推定中的运用[D].重庆大学,环境与资源保护法学,2014,硕士.
[46]王世明.北京某地铁盾构近距离下穿既有地铁风险控制措施研究[D].北京交通大学,2014.
[47]施鹏.基于认知无线电的协作感知技术研究[D].扬州大学,信号与信息处理,2012,硕士.
[48]李平.香椿芽加工及水培技术研究[D].中南林业科技大学,经济林,2013,硕士.
[49]程永峰.马克思人学视域中“现实的个人”思想研究[D].兰州大学,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[50]郜平泉.网球运动员专项体能训练手段方法移植研究[D].苏州大学,体育教育训练学（专业学位）,2013,硕士.