疏肝健脾方对肝郁脾虚型FD大鼠胃黏膜及平滑肌功能的影响

【摘要】目的研究中药疏肝健脾方对肝郁脾虚型FD模型大鼠一般情况、胃排空率、血浆中VIP和SP含量,胃体黏膜中VIP2R、SP2R、MLCK的表达,以及胃体平滑肌细胞中IP3、cAMP、Ca2+含量等指标的影响；基于胃黏膜分泌功能和平滑肌运动功能探讨FD发病机制,以及该方治疗FD的疗效机制。方法1.造模及治疗采用SPF级SD健康大鼠64只,雌性,体重200-220g。适应性喂养一周后开始造模。随机分为正常对照组,模型对照组,中药组,西药组,每组16只。模型组给予慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节的方法进行造模,造模时间共14天；造模后中药组给予对应体积疏肝健脾方药液(1g/m1),按8.54g/kg·d浓度给药(与人体体重等效剂量),西药组给予对应体积的多潘立酮溶液(0.35mg/ml),按2.7mg/kg·d浓度给药(与人体体重等效剂量)。模型对照组给予等量生理盐水,正常对照组给予等量蒸馏水灌胃,连续14天。2.检测观察大鼠造模前、后及治疗后的一般状况；采用胃排空实验,进行胃动力评测；采用放射免疫法检测大鼠血浆中VIP、SP的含量；采用免疫组织化学染色法检测大鼠胃体黏膜层VIP2R、SP2R、MLCK的表达,以及大鼠胃体肌层MLCK的表达；分离大鼠胃体肌层平滑肌细胞,制成平滑肌细胞悬液,采用Elisa法检测平滑肌细胞中IP3、cAMP含量,流式细胞仪检测Ca2+的含量。结果1.实验期间大鼠体重变化①造模前,四组之间体重差异无统计学意义(P=0.092)；②造模两周后,与正常对照组相比,模型对照组、中药组、西药组大鼠体重增加缓慢,差异均有统计学意义(P<0.001)；③治疗后,与模型对照组相比,中药组、西药组大鼠体重增长变快,差异有统计学意义(P<0.001)；而中药组、西药组之间差异无统计学意义(P=0.07)。2.胃排空率测定四组大鼠胃排空率存在统计学差异(F=60.643,P<0.001)；与正常对照组比较,模型对照组大鼠胃排空率降低,差异有统计学意义(P<0.001)；与模型对照组比较,中药组、西药组大鼠胃排空率升高,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001)；中药组、西药组之间差异无统计学意义。3.血浆中VIP、SP含量测定四组大鼠血浆VIP、SP含量存在统计学差异(VIP:F=4.650,P=0.008;SP:F=3.304,P=0.031);与正常对照比较,模型对照组大鼠血浆中VIP含量升高、SP含量降低,差异有统计学意义(VIP:P=0.019;SP:P=0.031);与模型对照组比较,中药组、西药组大鼠血浆中VIP含量降低、SP含量升高,差异有统计学意义(VIP:P=0.002,P=0.004;SP:P=0.008,P=0.015);中药组、西药组两组之间大鼠血浆中VIP、SP含量差异无统计学意义(VIP:P=0.844;SP:P=0.708);中药组、西药组大鼠血浆中VIP、SP含量与正常对照组比较,差异无统计学意义(VIP:P=0.392,P=0.509;SP:P=0.546,P=0.803)4.胃体黏膜中VIP2R、SP2R、MLCK表达4.1胃体黏膜层组织中VIP-2R表达镜下观察胃体组织中VIP-2R阳性表达主要分布在黏膜层,黏膜组织中VIP-2R阳性表达呈棕黄色,以胞浆膜染色为主,着色深。阳性细胞主要分布在黏膜固有层腺体细胞中。四组之间表达强度存在差异(F=5.756,P=0.003),与正常组相比,模型组平均光密度降低,两者差异有统计学意义(P=0.001),与模型组比较,中药组、西药组平均光密度升高,差异有统计学意义(P=0.018,P=0.003),中药组、西药组之间平均光密度无统计学差异(P=0.3465)。4.2胃体黏膜层组织中SP-2R表达镜下观察胃体组织中SP-2R阳性表达主要分布在黏膜层,黏膜组织中SP-2R阳性表达呈棕黄色,以胞浆染色为主,着色较浅。阳性细胞主要分布在黏膜固有层腺体细胞中。四组之间存在差异(F=3.294,P=0.035),与正常组相比,模型组平均光密度降低,两者差异有统计学意义(P=0.008),与模型组比较,中药组、西药组平均光密度升高,差异有统计学意义(P=0.032,P=0.022),中药组、西药组之间平均光密度无统计学差异(P=0.872)。4.3胃体黏膜中MLCK表达MLCK免疫阳性细胞分布极广,在黏膜下肌层、肌层平滑肌细胞中普遍均匀分布,平滑肌纤维呈浅棕色染色,核呈淡蓝色；胃体黏膜固有层腺体也有较强表达,腺体细胞中MLCK阳性表达呈棕黄色,以胞浆染色为主,着色深。四组之间存在差异(F=5.396,P=0.005),与正常组相比,模型组平均光密度降低,两者差异有统计学意义(P=0.001),与模型组比较,中药组、西药组平均光密度升高,差异有统计学意义(P=0.005,P=0.021),中药组、西药组之间平均光密度无统计学差异(P=0.546)。4.4胃体肌层组织MLCK表达镜下观察胃体肌层细胞中MLCK阳性表达呈棕黄色,以胞浆染色为主,着色深。平滑肌细胞普遍染色,胞浆内着色均匀分布。四组之间不存在统计学差异差异(F=0.711,P=0.554)。5.胃体平滑肌细胞中IP3、cAMP、Ca2+含量的测定5.1平滑肌细胞内IP3的浓度测定四组之间IP3的浓度存在差异(F–5.027,P=0.007)；与正常组比较模型组大鼠胃体平滑肌细胞中IP3的浓度降低,差异有统计学意义(P=0.008)；与模型组比较,中药组、西药组IP3的浓度升高,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.003)；中药组、西药组之间差异无统计学意义。5.2平滑肌细胞内cAMP的浓度测定四组之间cAMP的浓度存在差异(F=4.901,P=0.007)；与正常组比较模型组大鼠胃体平滑肌细胞中cAMP的浓度降低,差异有统计学意义(P=0.016)；与模型组比较,中药组、西药组cAMP的浓度升高,差异有统计学意义(P=0.005,P=0.002)；中药组、西药组之间差异无统计学意义(P=0.652)5.3平滑肌细胞内游离Ca2+含量测定四组之间的Ca2+浓度存在差异(F–9.413,P<0.001)；与正常组比较模型组大鼠胃体平滑肌细胞中Ca2+的浓度升高,差异有统计学意义(P<0.001)；与模型组比较,中药组、西药组Ca2+的浓度降低,差异有统计学意义(P=0.003,P<0.001)；中药组、西药组之间差异无统计学意义(P=0.159)。结论1.肝郁脾虚型FD模型大鼠存在,外周血中胃肠激素水平的异常,黏膜层腺体中VIP2R、SP2R、MLCK表达强度的下降,以及静息状态下胃体平滑肌细胞胞内Ca2+浓度异常增高、IP3、cAMP等第二信使水平下降等异常情况。因此,在胃肠神经内分泌系统紊乱基础上,大鼠胃黏膜分泌功能异常和平滑肌运动功能障碍可能是FD发病机制之一。2.中药疏肝健脾方可对肝郁脾虚型FD模型大鼠产生有效的治疗作用,可改善其精神饮食等一般状态,并促使其胃排空功能的改善,其治疗机制可能与改善大鼠胃黏膜分泌功能和平滑肌运动功能有关。
【作者】郝尧坤；
【导师】周福生；
【作者基本信息】广州中医药大学，中西医结合临床，2014，博士
【关键词】疏肝健脾方；功能性消化不良；血管活性肠肽受体；P物质受体；第二信使；

【参考文献】
[1]陈宏飞.二氧化钛结合405nm LED光催化杀灭金色葡萄球菌的研究[D].华中科技大学,光学工程,2013,硕士.
[2]戴娟.英汉同声传译实践报告[D].河北师范大学,MTI（专业学位）,2013,硕士.
[3]俞国印.基于Arm-Linux嵌入式转动角度采集系统的研制及其应用[D].内蒙古科技大学,机械电子工程,2014,硕士.
[4]杨海龙.氧化脱羧偶联反应及环化反应的研究[D].苏州大学,有机化学,2013,硕士.
[5]王鹤晓.基于高管变更视角的上市公司盈余管理研究[D].山东大学,会计学,2013,硕士.
[6]邱静.仿人智能机械手孔轴装配无标定视觉伺服研究[D].重庆大学,控制工程（专业学位）,2014,硕士.
[7]冯艳.基于J2EE的遂宁市职校新闻发布系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[8]曹阳,郭雪峰.碳基纳米电极在分子器件中的应用[J].化学教育,2012,09:13-18.
[9]孙荣富,张涛,梁吉.电网接纳风电能力的评估及应用[J].电力系统自动化,2011,04:70-76.
[10]任玉艳,刘桐宇,李英民.稀土元素钇对Al-30wt%Mg_2Si复合材料组织和性能的影响[J].复合材料学报.
[11]李俊.二次预应力外包钢组合梁叠合楼盖承载性能研究[D].江苏科技大学,结构工程,2014,硕士.
[12]王金刚.NbN薄膜的制备及等离子体诊断[D].大连理工大学,等离子体物理,2004,硕士.
[13]蒋平川.非自反空间中的极大单调算子与自对偶凸泛函[D].广东工业大学,应用数学,2013,硕士.
[14]陈璐.广西居民日常食品消费影响因素实证研究[D].西南大学,企业管理,2013,硕士.
[15]陈筱莹.城镇化背景下我国地铁报的生存空间与发展策略研究[D].重庆大学,传播学,2014,硕士.
[16]王慧珊,邱兆斌.不同含量氧化石墨烯对左旋聚乳酸结晶性能和结晶形态的影响[A].中国化学会高分子学科委员会.2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C].中国化学会高分子学科委员会:,2011:1.
[17]孙晨.中国传统唱论的历史观照及其现实价值[D].陕西师范大学,音乐学,2004,硕士.
[18]邓海姣.栉江珧解剖配子的体外促熟研究[D].广东海洋大学,海洋生物学,2013,硕士.
[19]奚希.户外自助旅游法律问题研究[D].首都经济贸易大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[20]王芳.审美判断与文化批判：刘再复文学批评研究[D].牡丹江师范学院,文艺学,2012,硕士.
[21]吕佳.现代医疗技术引发的伦理道德思考[D].渤海大学,科学技术哲学,2014,硕士.
[22]宋勇.旋风分离器内气固两相流流场数值模拟[D].东北大学,机械设计及理论,2011,硕士.
[23]张守彬.PZ会展中心客户服务质量测评体系建设及应用研究[D].华南理工大学,项目管理,2012,硕士.
[24]彭波.大连辖区水上交通事故研究[D].大连海事大学,交通运输工程,2013,硕士.
[25]陶莹,杨全红.氧化石墨烯的界面组装——碳功能材料的液相制备方法[A].中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集——第30分会：低维碳材料[C].中国化学会:,2014:1.
[26]胡冬梅.辽宁省农民工就业保障政策执行效果研究[D].东北大学,社会保障,2011,硕士.
[27]仝菲.媒介生态视域下的网络水军价值研究[D].安徽大学,新闻学,2013,硕士.
[28]冯韵.电子商务环境下的供应链管理研究[D].河海大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[29]李纯.基于生态足迹模型的河北省可持续发展研究[D].河北师范大学,自然地理学,2013,硕士.
[30]王菲飞.基于Android平台的手机恶意代码检测与防护技术研究[D].北京交通大学,2012.
[31]刘智益.不确定性CFD模拟方法及其应用研究[D].华北电力大学,热能工程,2014,博士.
[32]郭继伟,沈大东,隋志华,金宝士.奥-贝球铁耙片的研制与应用[J].农业机械学报.2003(02)
[33]朱洪.基于Internet的木材行业信息网络服务系统研究和实现[D].中南林学院,木材科学与技术,2004,硕士.
[34]于颖.新时期香港电影探析[D].曲阜师范大学,艺术学,2013,硕士.
[35]黄欣.商标权与在先著作权的冲突研究[D].西南交通大学,法学理论,2014,硕士.
[36]席杰,杨军,朱学平.带落角和导引头视角约束的制导律设计[J].电光与控制,2014,09:26-28+89.
[37]张顺.X80石油管道多丝直缝埋弧焊的模拟研究与实验验证[D].华南理工大学,机械工程,2012,硕士.
[38]王锦梅.洋槐蜜、油菜蜜和荆条蜜花源标识物的确定及应用[D].西北大学,分析化学,2014,硕士.
[39]朱兵.基于风险最小原则的战略性供应商选择[D].河海大学,2005.
[40]宋亚峰.经营者股票期权激励机制研究[D].辽宁工程技术大学,企业管理,2004,硕士.
[41]渠扬,丛群书.高校体育课群体凝聚力的现状与策略研究[J].现代物业(中旬刊),2012,09:82-84.
[42]程亚平.大学生村官工作适应、组织支持感与工作绩效的关系研究[D].苏州大学,应用心理学,2013,硕士.
[43]鹿丽丽.小学教师课堂情绪现状及改进策略研究[D].东北师范大学,教育,2012,硕士.
[44]胡海荣.基于分数阶Fourier变换的合成孔径雷达动目标检测方法[D].浙江工业大学,2009.
[45]陈胜军.县域金融萎缩问题及对策研究[D].西南农业大学,金融学,2004,硕士.
[46]崔涛.锂离子电池硅基负极材料的制备及其性能研究[D].燕山大学,应用化学,2014,硕士.
[47]杨子潮.大后方纪实性故事片发生机制研究[D].西南大学,电影学,2013,硕士.
[48]郑绍娟.从后现代主义解读哈罗德·品特的《虚无乡》[D].西北大学,英语语言文学,2014,硕士.
[49]闫涛.纳米钛酸钡粉体的制备与性能研究[D].北京化工大学,化学工艺,2006,博士.
[50]夏长河.丙烯酰胺对大鼠生精细胞XRCC1蛋白表达与凋亡的影响[D].河北医科大学,外科学,2013,硕士.