山茱萸的化学成分及其生物活性研究

【摘要】山茱萸是山茱萸科落叶小乔木或者灌木CornusOfficinalisSieb.etZucc的成熟果肉,别名枣皮,山芋肉。主产于陕西、河南、浙江海拔400-2000米处山地。山茱萸作为中药始载于《神农本草经》。性微温,味酸。归肝、肾经。可补益肝肾,涩精固脱。临床用于治疗肝肾亏虚之眩晕耳鸣、腰膝酸软、崩漏带下、遗精遗尿、体虚大汗等症。山茱萸中含有萜类、鞣质、黄酮、有机酸等多种成分,具有抗氧化、抗炎、保护神经和心血管以及防治糖尿病的生物活性。本课题在化学成分、分析方法和生物活性方面对山茱萸进行了研究。主要内容如下：一山茱萸化学成分的提取分离本课题建立了一套以逆流色谱技术为主体,其他方法辅助的系统分离方案,对山茱萸的化学成分进行分离。采用逆流色谱在不同洗脱模式下(常规反相模式、双向洗脱模式、常规正相模式以及洗脱—推出模式)对山茱萸提取物进行了4步分离,剩余的提取物再以其他方法包括反相ODS硅胶、制备型高效液相色谱和制备型薄层色谱法进行分离,共得到并鉴定了32个化合物,采用波谱方法鉴定化学结构。分别是：马钱苷(Loganin,1)、獐牙菜苷(Sweroside,2)、莫诺苷(Morroniside,3)、没食子酸(Gallicacid,4)、金吉苷(Kingiside,5)、马钱酸(Loganicacid,6)10-羟基山茱萸苷(10-hydroxycornin,7)、7-脱氢马钱苷(7-ketologanin,8)、7-氧-乙基莫诺苷(7-O-methylmorroniside,9)、山茱萸新苷Ⅰ(CornusideI,10)、表金吉苷(8-epikingiside,11)、裂环氧化马钱酸(secologanoside,12)、10-羟基戟叶马鞭草苷(10-hydroxyhastatoside,13)、戟叶马鞭草苷(Hastatoside,14)、二氢山茱萸苷(Dihydrocornin,15)、獐牙菜苦苷(Swertimarin,16)、裂环马钱苷(Secologanin,17)、山茱萸苷(Cornin,18)、7-氧-甲基莫诺苷(7-O-methylmorroniside,19)、山茱萸新苷Ⅱ(CornusideⅡ,20)、阿江榄仁葡萄糖苷Ⅱ(ArjunglucosideⅡ,21)、脱水莫诺苷元(Dehydromorronisideaglycone,22)、齐墩果酸(Oleanolicacid,23)、乌索酸(Ursolicacid,24)、7-O-没食子酰-D-景天庚酮糖(7-O-galloyl-D-sedoheptulose,25)、株木鞣质B(CornusiinB,26)、Mevaloside(27)、1,2,3-三-O-没食子酰-D-葡萄糖(1,2,3-tri-O-galloyl-β-D-glucose,28)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Quercetin3-O-β-D-Glucuronide,29)、逆没食子酸(Ellagicacid,30)(3beta)-pregna-5,16,20-triene-3,20-diyldiacetate(31)、Eudesma-5,11(13)-dien-8,12-olide(32)。这些化合物分别属于环烯醚萜(1-3,5-20,22)、五环三萜(21,23,24)、单萜(27)和倍半萜(32)、鞣质(25,26,28)、酚酸(4,30)、黄酮(29)、甾体(31)。其中9个化合物：5、7、11、12、14、16、17、31和32为首次从该种植物中分离得到。二山茱萸成分分析方法的建立环烯醚萜类化合物在山茱萸中含量较高并具有很多生物活性,是山茱萸的特征性成分。本实验建立了两种同时测定山茱萸中8种坏烯醚萜苷含量的方法：(1)高效毛细管电泳-紫外联用法(HPCE-UV),(2)超高效液相色谱—串联质谱联用法(UPLC-MS/MS),对山茱萸中莫诺苷、7-脱氢马钱苷、獐牙菜苷、马钱苷、7-氧-甲基莫诺苷、山茱萸新苷Ⅱ、7-氧-乙基莫诺苷和山茱萸新苷Ⅰ进行了定量分析。同时,基于17批不同产地和采收期的山茱萸药材,建立了山茱萸的超高效液相色谱-光电二极管阵列(UPLC-PDA)标准指纹图谱。从这些图谱中提取数据,对不同来源的样品进行了相似度分析和分级聚类分析,结合特征性成分含量测定结果,考察采收期和产地对山茱萸内在质量的影响。结果表明,多成分含量测定结合指纹图谱分析是一种可靠的药材鉴别和质量评估方法。三山茱萸萜类成分的生物活性研究萜类化合物是山茱萸中最主要的成分。本实验首先考察了从山茱萸中分离得到的19个萜类成分对两种神经胶质瘤细胞(LN229和U87细胞系)增殖情况的影响。发现其中的两个五环三萜类成分——齐墩果酸和乌索酸具有显著抑制神经胶质瘤细胞存活率的作用。齐墩果酸的IC50是12μM(LN229细胞)和25μM(U87细胞),乌索酸的IC50是25μM(LN229细胞)和35μM(U87细胞),并且均呈现明显的量效关系。考察了山茱萸总环烯醚萜苷和单一环烯醚萜苷成分莫诺苷的抗血栓作用。采用尾静脉注射去甲肾上腺素和牛血清蛋白,造成大鼠血栓前状态模型,对模型大鼠进行病理性血栓诱发实验(电刺激颈动脉),评估药物对血栓生成的影响。结果表明,山茱萸总苷和莫诺苷可以不同程度的抑制病理性血栓的形成,延长血管完全阻塞时间,降低生成的血栓重量。二者均可以降低血栓前状态模型大鼠体内血栓素A2和血清素的水平,升高前列环素12的含量,从而抑制血小板聚集并使血管舒张。同时山茱萸总苷通过提高组织因子途径抑制物水平,抑制外源性凝血途径。而莫诺苷可以升高血液中纤溶酶水平,增强机体纤溶功能。此外,山茱萸总苷和莫诺苷对血栓前状态模型大鼠出、凝血时间的延长程度不超出正常范围,对血小板计数无影响,不会造成出血倾向,用药安全。
【作者】梁晋如；
【导师】孙文基；
【作者基本信息】西北大学，中药学，2014，博士
【关键词】山茱萸；逆流色谱；高效毛细管电泳；超高效液相-串联质谱联用；指纹图谱；萜类；神经胶质瘤；山茱萸总苷；莫诺苷；抗血栓；

【参考文献】
[1]李红.SRB利用玉米酒精废水产生生物硫铁及其应用研究[D].西南交通大学,环境工程,2013,硕士.
[2]尚晓鹏.湖北地区主要传疟媒介按蚊密度、生态习性及抗药性调查研究[D].武汉科技大学,流行病与卫生统计学,2012,硕士.
[3]汪冠群.高新技术企业风险投资项目评估研究[D].武汉科技大学,企业管理,2003,硕士.
[4]顾媛媛.LSGM基混合电势型NOx传感器的研究[D].宁波大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[5]张俊.基于心理契约的新生代农民工就业问题研究[D].山东大学,企业管理,2013,硕士.
[6]刘敦楠,陈雪青,何光宇,郭家春,李瑞庆,周双喜.电力市场供应者竞标行为的分析与对策[J].电力系统自动化,2005,06:24-28.
[7]李晴辉.新型涂抹型大豆干酪的研究与开发[D].华东理工大学,食品科学,2013,硕士.
[8]上官琳琳.YH科技公司销售人员绩效考核体系优化研究[D].兰州理工大学,工商管理,2014,硕士.
[9]傅洪贤,赵勇,谢晋水,侯永兵.隧道爆破近区爆破振动测试研究[J].岩石力学与工程学报,2011,02:335-340.
[10]祁宇.目的论视阈下产品说明书翻译的研究[D].内蒙古大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[11]陈海平.高速铁路乘务组织理论与优化研究[D].北京交通大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[12]朱正福.优化未成年人刑事司法制度 预防减少未成年人违法犯罪[D].华东政法学院,法律,2003,硕士.
[13]张雷,李人厚.基于免疫原理的一种动态数据聚类方法[J].控制与决策,2007,04:469-472.
[14]崔明建,孙元章,柯德平,罗超.考虑电网侧频率偏差的风电功率爬坡事件预测方法[J].电力系统自动化,2014,05:8-13.
[15]姚钰鹏,王京,张飞.基于FCMD的轧制数据预处理方法及其应用[J].冶金自动化,2015,03:22-29.
[16]杨寅.高原鼢鼠创新性防控技术的研究[D].兰州大学,农村与区域发展（专业学位）,2014,硕士.
[17]林莉兰.网络自主学习环境下学习策略与学习效果研究——英语听力教学改革实验[J].外语研究,2006,02:39-45+80.
[18]阿泽姆.甲状腺次全切除术中树干式结扎与外周结扎发生手足抽搐频率的比较[D].山东大学,GeneralSurgery,2013,硕士.
[19]张亮.基于OLAP技术的业务流程多维数据模型分析[D].北京交通大学,2012.
[20]冯科.山岭隧道高陡边坡防落石棚洞结构形式研究[D].西南交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[21]沈海泓.远方电能计量运行监测系统研究[D].华北电力大学（河北）,电气工程,2004,硕士.
[22]缪春池.一条城市经营管理之道[D].西南财经大学,工商管理,2003,硕士.
[23]陈冲.南方煤矿销售预测与调配系统的设计与实现[D].厦门大学,系统工程,2014,硕士.
[24]张大猛.基于二维码的订餐广告发布系统研究与设计[D].黑龙江大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[25]曹雁超.现代化进程中政府公共行政价值的实现研究[D].山东师范大学,公共管理（专业学位）,2013,硕士.
[26]白玉良.救护车手术平台纵向主动缓冲系统及其控制器的设计分析与开发[D].重庆大学,车辆工程,2014,硕士.
[27]王恒花.Effects of Task Repetition with Corrective Feedback on College English Learners’Oral Performance[D].南京师范大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[28]陈寅.图的｛3，4，5｝-因子和｛3，4，5｝-分解[D].新疆大学,应用数学,2013,硕士.
[29]何志坚.融合GSM与WIFI通信的多媒体宜居控制系统的研发[D].吉林大学,电路与系统,2013,硕士.
[30]李育青.长庆油田网管告警系统应用研究[D].西安科技大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[31]付兴国.在西部大开发中发挥科协的大团体优势[J].科协论坛.2001(Z1)
[32]黄磊.发展铁道财务会计管理信息系统的构想[J].中国软科学,2001,06:61-64.
[33]傅明.一种基于聚类的空间数据知识获取算法[J].计算技术与自动化,2001,01:46-49.
[34]侍文庚,蒋天颖.社会资本、知识管理能力和核心能力关系研究[J].科研管理,2012,04:62-72.
[35]周雪梅.试论墨子思想的人民性[D].首都师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.
[36]胡宴才.船舶航向自动舵自适应模糊设计[D].大连海事大学,交通运输工程,2013,硕士.
[37]陶冶.Minkowski平面上特殊曲线的研究[D].哈尔滨理工大学,基础数学,2012,硕士.
[38]雷丽.高速转杯内部流场和磨损规律研究[D].浙江理工大学,机械电子工程,2013,硕士.
[39]张志渊,张伟强,虞培德.一种高准确度超低频电压测试标准——8801超低频电压及失真测试仪[J].宇航计测技术.1993(01)
[40]叶斌.关于我国社区矫正的实证研究[D].华东政法大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[41]梁锋.硅纳米线和多孔硅的制备及表面修饰研究[D].浙江大学,材料工程,2014,硕士.
[42]李玲.手性催化剂催化迈克尔加成反应的理论研究[D].曲阜师范大学,物理化学,2013,硕士.
[43]胡优优.庾信对《左传》的接受研究[D].华中师范大学,中国古代文学,2013,硕士.
[44]刘高源.基于图像识别的智能视频监控模块研究[D].中北大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[45]张克坚.大学英语听力教学中的元认知策略培训[D].河北师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[46]杨少雄.县级地方服务型政府建设研究[D].郑州大学,行政管理,2013,硕士.
[47]李雨亭.海蟒式海浪换能器建模及组合缸式液压系统控制策略研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[48]胡翔.我国商品期货市场与股票市场的波动特征及溢出效应研究[D].山西财经大学,数量经济学,2013,硕士.
[49]兰姗姗.沈阳市城镇居民养老保险财政补贴水平研究[D].辽宁大学,社会保障,2012,硕士.
[50]汪一.T型钙通道阻滞剂强化加巴喷丁治疗糖尿病神经病理性疼痛的效果及可能的机制[D].北京协和医学院,临床医学,2014,博士.