NDRG2基因在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞生长的影响

【摘要】第一章NDRG2在胆囊癌组织中的表达、临床病理和预后意义目的：检测NDRG2蛋白在胆囊良、恶性疾病中的表达强度,并结合相关临床病理资料,分析影响NDRG2蛋白表达的有关因素,初步探讨NDRG2蛋白在胆囊良.恶性疾病发生发展过程中的作用和临床意义。方法：收集内蒙古包钢医院普外科2009年9月至2011年8月手术切除的胆囊癌标本130例及其相应癌旁组织。所以病例术前皆未经过放、化疗及其他辅助性治疗,且必须有完整的住院病历资料。全部标本皆采用常规石蜡包埋切片,免疫组化技术及WesternBlot检测标本中NDRG2蛋白的表达强度。并统计分析病例的相关临床病理资料,对相关因素进行x2检验。结果：①NDRG2蛋白在胆囊癌中的表达明显低于相应癌旁组织(P<0.005)；②NDRG2蛋白在TNMⅡ期中的表达低于在TNMⅠ期中的表达(P=0.003)③有淋巴结转移和浸润的胆囊癌,其NDRG2蛋白阳性率明显低于无淋巴结转移或浸润者(P=0.008)。结论：NDRG2蛋白在胆囊癌中显著低表达,其表达强度与胆囊癌的分期、分级和临床预后有密切关系；从癌前病变发展成胆囊癌的过程中,NDRG2蛋白可能发挥了重要作用,检测其表达强度有助于在癌前病变阶段早期发现胆囊癌。第二章NDRG2真核表达载体构建及稳定转染GBC-SD细胞系的建立目的构建人NDRG2真核表达载体,转染GBC-SD细胞,建立稳定转染的GBC-SD细胞系。方法采用PCR方法,以人胆囊癌组织cDNA文库为模板扩增人NDRG2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1,经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染GBC-SD细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的GBC-SD细胞系,用RTPCR、Westernblot检测NDRG2的表达。结果构建了pcDNA3.1/NDRG2真核表达载体,建立了稳定转染的GBC-SD细胞系,并成功地表达了目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染GBC-SD细胞系的建立为进一步研究NDRG2的功能奠定了良好的实验基础。第三章NDRG2基因对人胆囊癌细胞株GBC-SD生物学特性的影响目的：观察NDRG2重组载体在体内、外对GBC-SD生长的影响,以探讨NDRG2基因与胆囊癌之间的相关性,为探索NDRG2真核表达载体作为胆囊癌基因治疗靶点提供思路。方法：采用MTT及流式细胞术检测GBC-SD、GBC-SD-Ve及GBC-SD-NDRG2三组中细胞周期、凋亡率及细胞增殖等生物学行为的变化；将三组细胞接种裸鼠皮下成瘤,建立裸鼠异体移植胆囊癌模型,观察瘤体生长速度及瘤体大小,免疫组化法检测瘤体组织中NDRG2基因的蛋白表达,评价重组载体pcDNA3.1-NDRG2对胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内致瘤活性及生长活性的影响。结果：重组载体pcDNA3.1-NDRG2转染GBC-SD细胞形成抗性克隆后,与未转染组相比,G2/S期细胞比例明显增多,G1期细胞比例明显减少,凋亡率明显增高,细胞生长速度明显减慢,细胞抑制率明显增高,表明重组载体在体外能抑制GBC-SD细胞增殖；建立裸鼠异体移植胆囊癌模型后,三组的成瘤潜伏期均为5天,4周后处死裸鼠发现,GBC-SD组细胞在裸鼠体内生长较GBC-SD-NDRG2组细胞生长快,两组平均瘤体体积分别为384.17±72.84和178.13±29.75mm3,抑瘤率为50.0%,瘤体组织内NDRG2基因的蛋白表达阳性,而SGBC-SD和GBC-SD-Ve组的蛋白表达阴性,表明重组载体在体内能抑制GBC-SD细胞增殖。结论：NDRG2真核表达载体能抑制人胆囊癌细胞GBC-SD的生长,调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞的恶性增殖,降低致瘤活性,有望成为胆囊癌基因治疗的合理策略之一。
【作者】宋士鹏；
【导师】廖前德；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】胆囊癌；免疫组织化学；NDRG2；真核表达载体；转染；GBC-SD细胞系；基因表达；基因；基因治疗；

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