文昌鱼（Branchiostoma japonicum）转化生长因子beta基因的表达和免疫功能研究

【摘要】头索动物文昌鱼是现存的与无脊椎动物原始祖先最接近的头索动物，是研究脊椎动物起源与进化十分珍贵的模式生物。转化生长因子β（TGFβ）是一种多功能的细胞因子，调节许多细胞进程，包括细胞的增殖、分化、迁移、炎症反应以及凋亡等。TGFβ在脊椎动物和无脊椎动物的多种物种中被鉴定。哺乳动物中存在TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3三种亚型。高等动物体内几乎所有的细胞类型，包括上皮细胞、内皮细胞、造血细胞、神经细胞和结缔组织细胞，均能产生TGFβ及其受体。头索动物文昌鱼中只存在一种tgfβ成员，可能是脊椎动物tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3基因的祖先形式。但是，目前对于文昌鱼TGFβ在调节免疫和炎症反应方面的功能了解甚少。此外，对于无脊椎动物TGFβ构-效关系的研究非常缺乏。本研究对青岛文昌鱼（Branchiostomajaponicum）TGFβ基因的免疫功能以及构-效关系进行了研究。首先，为了研究文昌鱼TGFβ蛋白的免疫功能，我们构建文昌鱼TGFβ成熟肽（mTGFβ）体外重组表达载体，转移到大肠杆菌并进行诱导表达。mTGFβ在包涵体中大量表达。重组mTGFβ纯化后，进行透析法复性。通过化学交联的方法检测到复性后的mTGFβ形成同二聚体。通过使用Boydenchamber研究mTGFβ对未激活的RAW264.7细胞迁移作用的影响，发现mTGFβ显著促进小鼠巨噬细胞迁移，说明文昌鱼TGFβ具有与脊椎动物TGFβ类似的功能——能够促进小鼠巨噬细胞迁移。研究mTGFβ对已激活的RAW264.7细胞迁移作用的影响，发现其能显著抑制已激活的RAW264.7细胞的迁移，此作用与在真鲷（Pagrusmajor）中发现的TGFβ对已激活的头肾细胞、外周血白细胞的抑制作用相似。文昌鱼TGFβ对RAW264.7细胞迁移的促进和抑制作用意味着其具有与哺乳动物和鱼类一样的双向作用。通过qRT-PCR和ELISA方法检测mTGFβ对LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-1β表达的作用，发现mTGFβ能够抑制LPS活化的RAW264.7细胞中TNF-α和IL-1βmRNA的表达以及IL-1β释放，表明文昌鱼TGFβ也起着免疫抑制性因子的作用。其次，为了研究文昌鱼TGFβ构-效关系，我们使用重叠延伸PCR方法得到文昌鱼TGFβ突变体片段（缺失WSTD位点的文昌鱼TGFβ成熟肽）。体外表达文昌鱼TGFβ突变体蛋白（MD），并研究WSTD位点对文昌鱼TGFβ蛋白免疫功能的影响。结果表明WSTD位点在文昌鱼TGFβ诱导或抑制巨噬细胞迁移，如RAW264.7细胞的迁移方面发挥关键作用。总之，这些结果表明文昌鱼TGFβ具有与脊椎动物TGFβ相似的双向作用，暗示了TGFβ蛋白双向作用的起源。同时，TGFβ起着免疫抑制性因子的作用。此外，本研究重点突出了WSTD位点对于诱导和抑制巨噬细胞迁移作用的重要作用。
【作者】王胜男；
【导师】张士璀；
【作者基本信息】中国海洋大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】原索动物；文昌鱼；转化生长因子beta；双向作用；免疫调节；

【参考文献】
[1]谢伟.大鼠miR-185-3p调控的TrkB.FL信号通路抑制神经元痫样放电的研究[D].天津医科大学,生物医学工程,2014,博士.
[2]梁越敢.常温下短程硝化反硝化的研究[D].合肥工业大学,环境工程,2004,硕士.
[3]金从力.上市公司财务数据多维联机分析设计[D].上海海事大学,2003.
[4]李朝阳.纳米铜对猪肾细胞线粒体凋亡途径的影响[D].华中农业大学,临床兽医学,2014,硕士.
[5]甄熙.声触诊组织量化（VTQ）技术在颈部淋巴结良恶性鉴别诊断中的临床价值[D].吉林大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[6]王冠三.1HJ_c系列机械滑台(三导轨、高精度级)[J].组合机床与自动化加工技术.1987(07)
[7]廖培宇.中国稀土出口限制制度与WTO规则相符性研究[D].北京外国语大学,国际法学,2014,硕士.
[8]蔡小霞.晚清“溢美”型狭邪小说研究[D].陕西理工学院,中国古代文学,2013,硕士.
[9]张春华.河北省高校高水平运动队的现状与发展[D].河北师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[10]巩文冰.大学生面子作为问卷的编制及特点研究[D].西南大学,基础心理学,2013,硕士.
[11]郑超.唐山市中学体育传统项目学校体育教师职业倦怠的研究[D].河北师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[12]李思成.环境相邻关系法律制度研究[D].西北民族大学,环境与资源保护法学,2012,硕士.
[13]王利君.基于LibQUAL+~(TM)的高校移动图书馆服务质量评价研究[D].南京大学,图书馆学,2013,硕士.
[14]蓝炜儿.珠江三角洲高职院校毕业生就业问题研究[D].华中师范大学,教育管理,2012,硕士.
[15]郝惠男.γ-TiAl/TiO_2界面的电子结构及合金元素对其影响的第一性原理研究[D].首都师范大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[16]陈海鹏.GIS应用向多领域发展向纵深推进[N].中国计算机报,2003-12-22B02.
[17]秦亮曦,史忠植.基于冰山查询的网络流量关联规则挖掘[J].计算机工程,2005,07:9-11+81.
[18]邹积勇.大型项目设计管理信息系统的研发[D].天津大学,水工结构工程,2004,硕士.
[19]高涛.表面处理金刚石在光固化树脂结合剂磨具中的应用研究[D].浙江工业大学,机械制造及其自动化,2004,硕士.
[20]黄慧东.基于产业集聚的上海创意产业发展研究[D].上海社会科学院,文艺学,2012,硕士.
[21]陈泓宇.石墨烯金钯核壳&金银合金双金属复合物的制备及催化应用[D].天津大学,2012.
[22]冷菁.吉林省梅河矿区废弃地生态恢复评价研究[D].吉林大学,环境工程,2013,硕士.
[23]薛航.基于光纤光栅的钻杆冲击动力学特性研究[D].合肥工业大学,测试计量技术及仪器,2014,硕士.
[24]张志伟.从语义地图角度看几种语言部分亲属称谓语[J].现代语文(语言研究版),2014,07:133-138.
[25]潘敬东,谢开.节点边际电价的优化原理[J].电力系统自动化,2006,22:38-42+95.
[26]叶力平.双金属管连轧变形过程数值模拟与试验研究[D].太原科技大学,材料加工工程,2014,硕士.
[27]王洪飞.论行政应急权与公民权利保护[D].兰州大学,宪法学与行政法学,2013,硕士.
[28]唐清科.基于供应链管理的杭州绿叶超市的运营优化[D].大连理工大学,工商管理,2004,硕士.
[29]吴振华.基于区位码和多重加密的农产品追溯编码的设计[D].河南农业大学,农业信息化技术,2012,硕士.
[30]党丽敏.清代开复制度研究[D].深圳大学,法律,2013,硕士.
[31]丁洁.基于胜任力的心理学研究生培养思考[D].华中师范大学,心理学,2014,硕士.
[32]韩廷瑜.基于PN结的TiO_2氧气传感器制备研究[D].黑龙江大学,微电子学与固体电子学,2013,硕士.
[33]王潆晗.改革开放以来中国农村基层民主政治建设研究[D].吉林大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2013,硕士.
[34]袁鼎荣,严小卫.最大频繁项集挖掘算法的分析研究[J].计算机应用与软件,2005,12:21-23+40.
[35]晏院飞.通用设备服务在工业流水线控制系统中的应用[D].华南理工大学,软件工程,2012,硕士.
[36]梁会君.哈贝马斯的意识形态理论研究[D].首都师范大学,马克思主义发展史,2014,硕士.
[37]韦婧.风格社会下传统工艺品牌的再生与创新[D].苏州大学,传播学,2013,硕士.
[38]王日新.引进德国牵引供电设备的维护检修模式[J].中国铁路.2002(02)
[39]孔令洋.城市轨道交通系统型式选择研究[D].北京交通大学,2009.
[40]韩琪.基于虚拟仪器的数据采集与分析系统研究与设计[D].北京交通大学,2012.
[41]崔晋.成都平原城镇艺术创意产业园建筑边界空间设计研究[D].西南交通大学,建筑设计及其理论,2014,硕士.
[42]杨兰.苗族史诗《亚鲁王》英雄母题研究[D].贵州民族大学,中国少数民族语言文学,2014,硕士.
[43]王飞.基于DSP技术的电力谐波监测仪的研制[D].广东工业大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[44]冯久桓.原发性肝癌中医证型与凝血功能相关性研究[D].北京中医药大学,中医内科临床,2013,硕士.
[45]岳磊.马克思生态伦理思想及其现代启示[D].浙江财经学院,马克思主义中国化研究,2012,硕士.
[46]白玉栋.低功耗片上网络拓扑结构的研究[D].广东工业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[47]周雪梅.固体碱负载PdCu纳米催化剂的制备及其催化甘油氢解[D].合肥工业大学,2014.
[48]邓尖凤.基于SOA架构的RIA WebGIS系统设计与实现[D].中国地质大学（北京）,地图制图学与地理信息工程,2014,硕士.
[49]娜布其.力格登儿童小说研究[D].内蒙古师范大学,中国少数民族语言文学,2012,硕士.
[50]陈靖.科技促进经济发展的实证分析[D].首都经济贸易大学,2005.