虎杖内生放线菌的抗菌活性研究及一株病原菌的分离鉴定

【摘要】近年来，植物内生放线菌尤其是药用植物内生放线菌已成为新型抗生素的主要产生菌，成为众多学者的研究热点。但由于放线菌生长周期长，易被污染等特点，对植物内生放线菌的分离、培养及其代谢产活性物质的研究仍然是今后的重点内容。本研究以秦巴山区特色中药材虎杖(Polygonurncuspidatum)为材料，对其内生放线菌的分离方法、表面消毒剂及消毒时间、培养基、抑菌剂浓度等方面进行筛选和确定，并就分离菌株的抑菌活性做了研究，对具有生物学活性的菌株进行了初步鉴定。通过材料预处理、表面消毒等，采用组织匀浆法筛选虎杖内生放线菌，排除重复，共筛选出47株内生放线菌。确定了优势培养基：以葡萄糖为碳源的培养基分离效果最佳；海藻糖-脯氨酸培养基可用于分离较为稀有的放线菌；对表面消毒结果的研究表明用75%医用酒精处理30s后再用0.1%的HgCl2处理5min，可很好的杀灭虎杖样品表面的腐生菌，且对植物组织内部的放线菌无影响。经过对抑菌剂浓度进行试验，得出当制霉菌素100.0mg/L、重铬酸钾75.0mg/L、萘啶酮酸20.0mg/L时，既能有效的抑制杂菌繁殖，又不影响放线菌的生长。对分离得到的47株虎杖内生放线菌进行抑菌活性研究，初筛有19株放线菌表现出了生物学活性，复筛和干扰排除后有5株内生放线菌仍表现出不同程度的抑菌活性，表明其中部分放线菌的抑菌活性不稳定。经过菌株形态学及分子生物学鉴定，初步将这5株内生放线菌鉴定为链霉菌属(StreptomycesPEA002)、小单孢菌属(MicromonosporaPEA003,PEA041)、链孢囊菌属(StreptosporangiumPEA023)、拟诺卡氏菌属(NocardiopsisPEA017)，可见虎杖内生放线菌具有一定的种类多样性。其中一株链孢囊菌PEA023，初筛和复筛活性都非常稳定，对常见靶标细菌和一株靶标真菌均表现出较好的拮抗作用，具有作为抗生素产生菌的潜力。采用常规组织匀浆方法对导致虎杖根部腐烂的致病菌进行分离，之后分别采用蘸根法和针刺法两种不同的侵染方法做植物人工侵染回归试验，从感染病菌的植株中对致病菌进行重新分离，确定了菌株P051为一株致病菌，经过菌株形态学和分子生物学鉴定及接触酶、氧化酶、葡萄糖、乳糖、甘露醇、明胶液化、硝酸盐还原等一系列生理生化反应，最终确定此菌株为微球菌科，微球菌属，藤黄微球菌(Micrococcusluteus)。
【作者】孔亚男；
【导师】陈文强；
【作者基本信息】陕西理工学院，植物学，2013，硕士
【关键词】虎杖；内生放线菌；抑菌活性；致病菌；

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