梨病毒超低温脱除技术的改进及带病毒与脱毒梨离体植株生长特性比较

【摘要】栽培梨(Pyrusspp.)普遍潜带苹果茎沟病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Applestempittingvirus,ASPV)和苹果褪绿叶斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV),感染病毒的梨树长势变弱,导致果实品质和产量的降低。培育和栽培无病毒苗木是防治梨病毒病的重要方法。本研究中,通过变温热处理结合超低温处理进行病毒脱除试验,并探讨利用梨离体植株嫩枝嫁接技术进行无病毒苗木的繁殖,同时系统比较带病毒与脱毒梨离体植株的生长特性。研究结果对于建立和完善我国梨的脱毒技术体系具有指导和应用意义。1.对采自辽宁兴城的4个梨品种(京白梨、苹果梨、色尔克甫和库尔勒香梨)休眠芽进行分化培养,以MS培养基为基本培养基,设计正交实验,对IBA、6-BA和NAA三种植物生长调节剂的浓度进行优化,分别筛选对4个梨品种的最适分化培养基。结果表明,不同梨品种最适分化培养基组成有所不同。6-BA为分化培养所必须,浓度在1mg/L-4mg/L之间,IBA对其中3个品种(京白梨、色尔克甫和库尔勒香梨)的分化培养具有促进作用,但所需浓度较低,在0.2mg/L-0.4mg/L之间；而NAA只对1个梨品种(京白梨)的分化培养具有促进作用。2.以分化培养所获得的带有ASPV的“库尔勒香梨”离体植株为材料进行变温热处理结合超低温处理脱毒试验,变温热处理时间分为20d、30d和40d三个时间段。同时,对试验中不同处理的茎尖进行石蜡切片,分析茎尖细胞显微结构。以带有ASGV的“金水2号”离体植株为材料进行化学(病毒醚25μg/mL)处理结合超低温处理脱毒试验,病毒醚处理时间为20d、30d和40d三个时间段。试验结果显示,变温热处理有利于“库尔勒香梨”的生长与增殖,并能在一定程度上脱除库尔勒香梨所带ASPV(14%-87%),而凡是经过超低温处理的茎尖在恢复培养过程中出现玻璃化现象,未能获得成活的脱毒植株。经过切片观察发现,经过变温热处理梨茎尖细胞在一定程度上增大,且经过变温热处理过的茎尖再进行超低温处理相比单一超低温处理的茎尖,其茎尖细胞组织的破坏更加严重。化学处理结合超低温处理脱毒试验中,变温热处理40d能完全脱除“金水2号”所带ASGV,脱毒效率高于30d(50%)和20d(50%)。而超低温处理对该病毒没有显示出脱除效果(0%)。同时发现,切取1mm茎尖的成活率与原始植株的健壮程度有关。3.以“圆黄”和“雪花梨”两个梨品种幼龄带毒和脱毒离体植株为材料,分别测定其SOD活性、丙二醛含量、可溶性蛋白含量和叶绿素含量等4项生理生化指标。试验结果表明,幼龄带毒和脱毒离体植株SOD活性、丙二醛含量和叶绿素含量三项指标无明显差别,可溶性蛋白含量不同品种呈现相反的结果。从以上结果推测可能病毒在梨离体植株幼龄阶段的影响较弱。4.以沙梨品种“丰水”、“金水2号”和西洋梨品种“红贝蕾莎”、“康弗仑斯”为试验材料,尝试采用离体植株嫩枝嫁接技术进行苗木繁殖。试验结果表明“丰水”嫁接成活率最高,达到80%,“金水2号”和“红贝蕾莎”两个品种成活率在40%-60%之间,“康弗仑斯”成活率较低,在20%左右。研究结果表明离体植株嫩枝嫁接技术可实用于梨无病毒苗木的繁殖。
【作者】刘文斌；
【导师】王国平；洪霓；
【作者基本信息】华中农业大学，植物病理学，2014，硕士
【关键词】梨；病毒；变温热处理；超低温处理；化学处理；离体植株生长特性；嫩枝嫁接；

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