农杆菌介导的柑橘遗传转化及转基因植株抗性鉴定

【摘要】柑橘细菌性溃疡病(Citrusbacterialcankerdisease,CBCD)是一种国内外检疫性病害,严重制约着柑橘产业的发展。因此,创制抗病品种是解决溃疡病危害的一个重要途径。本研究通过根癌农杆菌转化,将pthA基因和Xa27基因转化溃疡病敏感类型柠檬(Citrus.LemonL.)中,获得转基因植株,并对转基因植株进行鉴定和接种分析。主要结果如下：1、通过农杆菌介导的上胚轴转化方法,pthA基因转化约500个外植体,鉴定57株柠檬,其中阳性植株45株,阳性率为78.9%。Xa27基因转化约1000个外植体,鉴定29株柠檬,其中阳性植株10株,阳性率为34.5%。2、通过基因表达分析,筛选pthA转化的#7、#22、#23三个系进行溃疡病接种试验,发现,接种4d后,野生型和转基因植株均开始发病。但前者发病率达到100%,病点率86%。转基因株系#7和#23发病率虽然达100%,但病点率分别为72%和47%,较野生型低。同时发现,野生型植株病斑显著大于#7和#23。转基因株系#22发病率为75%,病点率为33%,病斑大小为0.028cm2,三个参数均低于野生型柠檬。在病情指数上,转基因柠檬三个系都明显低于野生型。表明,转基因植株抗溃疡病能力增强。3、对转Xa27柠檬#5和#25两个系进行溃疡病接种试验。接种4d后发现,转基因株系#5和#25发病率分别为50%和33.3%,病点率分别为14%和40%,病斑大小分别为0.019cm2和0.012cm2,远远小于野生型柠檬的病斑大小,且两个转基因系的病情指数都比野生型低,表现出转Xa27柠檬具有一定的抗病性。表明,转基因植株抗溃疡病能力增强。
【作者】邹文婷；
【导师】刘继红；
【作者基本信息】华中农业大学，园艺学，2014，硕士
【关键词】柑橘；柠檬；pthA；Xa27；遗传转化；基因表达；溃疡病接种；

【参考文献】
[1]陈新宇.给药条件下表皮生长因子对萎缩性胃炎逆转作用研究[D].浙江大学,2003.
[2]李延民,张永,李龙富.新型液控自动取样机的研制[J].冶金自动化,2008,06:48-50+63.
[3]陶桦.网络运行状况监控研究[D].东南大学,2004.
[4]强萍叶坤.面向远程教育交互性系统的探索与研究[J].中国校外教育.
[5]徐进.中小企业创业者学习模式及其绩效影响研究[D].浙江大学,2008.
[6]牛长华.老龄化背景下我国社区养老服务问题研究[D].山东财经大学,社会保障学,2012,硕士.
[7]曾强.冲突与适应：对当代农村宗教信仰的社会学思考[D].中共中央党校,社会学,2004,硕士.
[8]吕娜.民族新闻网站的现状及发展研究[D].中央民族大学,新闻学,2004,硕士.
[9]刘子寒.长波红外成像光谱仪的设计与研究[D].苏州大学,光学工程,2013,硕士.
[10]徐卉.社会资本理论视角下我国食品安全监管问题研究[D].华中师范大学,行政管理（专业学位）,2012,硕士.
[11]张文文.隐性知识共享对团队效能的影响研究[D].山东财经大学,企业管理,2014,硕士.
[12]靳钰峰.X绿色食品有限责任公司市场营销策略研究[D].中国地质大学（北京）,工商管理,2013,硕士.
[13]温贤江.重庆市民营经济软环境优化策略[D].重庆大学,公共管理,2014,硕士.
[14]阎栋.以用户为中心的远程交互式课件设计方法研究[D].西北大学,计算机软件与理论（专业学位）,2012,硕士.
[15]崔潇潇,姚安邦,王贵锦,林行刚.基于级联Adaboost的目标检测融合算法[J].自动化学报,2009,04:417-424.
[16]郅大鹏.基于复杂网络的形状描述方法研究[D].安徽大学,计算机技术,2014,硕士.
[17]牛忠远.我国物流需求预测的神经网络模型和实证分析研究[D].浙江大学,2006.
[18]陈弈.外加纵向磁场对水下湿法FCAW电弧特性及熔滴过渡的影响[D].哈尔滨工业大学,材料加工工程,2013,硕士.
[19]杨扬.600MW超临界机组低NO_x燃烧协调优化研究[D].浙江大学,热能工程,2013,硕士.
[20]王道鹏.我国地理标志的法律保护问题研究[D].贵州民族大学,民商法学,2012,硕士.
[21]贾翔.贫困大学生资助体系建设研究[D].中北大学,思想政治教育,2013,硕士.
[22]赵小兵.人教版高中物理系列教材对应模块教学内容的比较研究[D].贵州师范大学,学科教学,2013,硕士.
[23]李娉.基于博弈分析的道路运输企业节能减排发展策略研究[D].长安大学,企业管理,2013,硕士.
[24]杨艳青,高永涛,贺少辉,齐法琳.隧道衬砌背后积水地质雷达检测模型试验研究[J].中国铁道科学,2014,06:63-69.
[25]刘辉.知识产权滥用的法律规制研究[D].郑州大学,民商法学,2013,硕士.
[26]陈杭.三种信道下量子失协与几何失协的研究[D].苏州大学,光学,2014,硕士.
[27]何晓兵.浅析企业危机管理中的信息策略[J].现代情报,2004,10:170-171+173.
[28]陈建勇.新超导材料CuNNi_3的第一性原理计算[D].河北师范大学,理论物理,2013,硕士.
[29]周学勤.民国时期宁夏省地方行政制度研究（1929-1949）[D].宁夏大学,中国少数民族史,2014,博士.
[30]葛振朋,胡本锋,李晓毅.石墨烯吸附对蛋白质大分子结构的影响[A].中国化学会高分子学科委员会、中国化学会计算机化学专业委员会.中国化学会2014年大分子体系理论、模拟与计算研讨会论文集[C].中国化学会高分子学科委员会、中国化学会计算机化学专业委员会:,2014:2.
[31]全修忠.在渝泰国留学生跨文化适应调查研究[D].西南大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[32]叶茂.拉德布鲁赫相对主义法哲学思想研究[D].西南大学,民商法学,2013,硕士.
[33]胡丹.科马克·麦卡锡《边境三部曲》中的暴力与权力[D].上海外国语大学,英语语言文学,2012,硕士.
[34]黄晓辰.用于油田回注的城市污水深度处理工艺研究[D].哈尔滨工业大学,环境工程,2013,硕士.
[35]雷娟.中美公益基金会与政府关系比较研究[D].青岛大学,行政管理,2013,硕士.
[36]隋立松.技术侦查法制化研究[D].北方工业大学,法律,2013,硕士.
[37]吴翔.目的论视角下的福州市汉语公示语英译研究[D].福建师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[38]王峰.HZSM-5/SAPO-34复合分子筛催化剂在乙醇制丙烯反应中的积碳行为[D].西北大学,化学工程,2014,硕士.
[39]何梁昌,王德宁,缪仲熙,乐忠法,陈法萍,蒋大卫.计算机拉制砷化镓单晶的数学模型及其最佳控制[J].自动化学报,1979,02:89-96.
[40]孙玉伟.TCP协议在卫星信道中的应用研究[D].西安电子科技大学,电子与通信,2009,硕士.
[41]唐琳.资本主义全球化的生态批判[D].吉林大学,国外马克思主义研究,2013,硕士.
[42]胡春妍.环形单元内脂肪酸融化过程的传热特性及结构优化设计[D].西南交通大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2014,硕士.
[43]曹秉基.肾上腺素α1受体在人食管下括约肌的表达研究[D].河北医科大学,外科学,2014,硕士.
[44]刘慧源.高危型HPV负荷量与宫颈病变、E-cadherin、Numb蛋白的表达关系[D].大连医科大学,妇产科学,2012,硕士.
[45]施军华.全数字医用B超系统的研制[D].南京航空航天大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[46]宋真玉.ISG型HEV动力总成的设计建模与仿真研究[D].长安大学,载运工具运用工程,2014,硕士.
[47]盛鹏飞.硒蛋白W与低硒致鸡脑损伤的相关性研究[D].东北农业大学,临床兽医学,2014,博士.
[48]葛伟亚.盐城市地下水系统三维数值模拟[D].河海大学,地质工程,2004,硕士.
[49]徐弘.社交网络对游客购买意向影响研究[D].浙江大学,2011.
[50]陈小波.植物绝缘油中流注发展特性数值分析研究[D].重庆大学,电气工程,2014,硕士.