毛桃离体再生体系优化及遗传转化初探

【摘要】为了给桃砧木毛桃(Prunuspersica)转基因研究提供稳定、高效的离体再生体系,本试验在实验室前期研究的基础上,以继代保存的毛桃无菌试管苗的叶片为外植体,通过研究不同浓度硫代硫酸银,腺嘌呤、玉米素等一系列因素对毛桃叶片再生的影响,期望能较大程度的提高毛桃离体叶片的再生率,满足毛桃遗传转化的需求。同时以由毛桃叶片诱导出的愈伤组织为试材,通过农杆菌介导法对毛桃愈伤组织的遗传转化进行了初步探索,期望能在筛选培养基上获得抗性愈伤组织,初步建立毛桃愈伤组织遗传转化体系。主要研究结果如下：1.适宜毛桃试管苗继代保存的培养基为LP基本培养基+CPPU0.05mg/L+IBA0.3mg/L+Ad3.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.8g/L,pH为5.85-6.00,每隔28d左右继代一次。2.毛桃离体叶片及叶柄在LP基本培养基+CPPU0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L的基础上(pH=5.85-6.00),添加生物素、核黄素、泛酸钙不能诱导离体叶片及叶柄不定芽再生；添加60μMSTS,离体叶片及叶柄再生率分别为15.00%和4.00%；以1.5mg/LZT+0.3mg/LNAA代替0.5mg/LCPPU+0.1mg/LNAA时,离体叶片再生率为8.89%；添加3.0mg/LAd,离体叶片再生率最高达到18.33%；3.适宜毛桃茎尖生长的预培养培养基为LP基本培养基+CPPU0.01mg/L+IBA0.3mg/L+Ad3.0mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L,pH为5.85-6.00,暗培养21d后转移至光下培养21d。4.毛桃预培养叶片在LP基本培养基+CPPU0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L培养时(pH=5.85-6.00),再生率为4.44%,再加入2.0mg/LAd,再生率提高至4.92%。5.AP基本培养基对毛桃离体叶片愈伤组织诱导及再生的效果不如LP基本培养基；毛桃愈伤组织继代保存时需加入一定的激素,否则会出现增殖倍数下降,生长状态差的现象；毛桃愈伤组织在LP基本培养基+CPPU0.5mg/L+IBA/NAA0.1mg/L+蔗糖30.0g/L上悬浮培养,无再生现象。6.毛桃试管苗较适宜的生根培养基为1/2LP基本培养基+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+PG40mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.8g/L,pH为5.85-6.00,培养42d后生根率可达79.23%,平均生根数为7.66,平均根长为5.38cm。7.毛桃愈伤组织遗传转化中,选择30mg/LKm作为筛选培养基中抗性愈伤组织的筛选压,选择400mg/LCef作为共培养培养基中头孢霉素的添加量。
【作者】王秀；
【导师】李国怀；
【作者基本信息】华中农业大学，园艺学，2014，硕士
【关键词】桃；离体叶片；植株再生；遗传转化；

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