常用抗菌药联合作用及亚-MIC抗菌药对细菌成膜能力的影响

【摘要】近年来兽医临床上,抗菌药滥用现象频发,譬如：应用抗菌药作为日常预防性用药和动物促生长剂；不按兽医师指导用药；对于病因不明的,比如真菌或病毒感染滥用抗菌药,而导致抗菌药无效；对混合或严重感染无依据的采用2种或更多抗菌药联合使用。这些无疑加重了细菌耐药性产生,直接导致临床上抗菌药使用处于亚抑菌浓度(Subinhibitoryconcentration,sub-MIC)状态,而亚-MIC的应用多与成膜菌有关联,主要用于预防用药,通过抑制细菌形成生物被膜,来避免慢性感染的发生。目的：本试验在原有抗菌药分类的基础上,增添了喹诺酮类,利福霉素类,林可胺类及中药提取单体-黄连素,研究药物之间的相互作用,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及巴氏杆菌为临床分离的受试菌株,分别作为革兰氏阳性菌及阴性菌的代表；另外,筛选成膜菌,考察亚-MIC抗菌药对其生物被膜形成的影响。以期通过本试验的研究可以为兽医临床用药提供一定的理论依据,改善不当的药物联合用药情况,同时,也警示人们亚抑菌浓度抗菌药的使用必须以试验室研究结果作为基础依据。方法：试验选用微量稀释法测定单药的最小抑菌浓度(Minimalinhibitoryconcentration,MIC),而后根据测出的MIC确定联合用药浓度,通过微量棋盘稀释法测定各药联合的部分抑菌浓度(Fractionalinhibitoryconcentration,FIC)。测定亚-MIC抗菌药对成膜菌被膜形成的影响是采用结晶紫染色法,通过测定光密度(Opticaldensity,OD)值来评估其对成膜能力的影响。结果：(1)革兰氏阳性菌的代表金黄色葡萄球菌联合用药结果如下：原有抗菌药分类下四类抗菌药联用情况与以往相符；恩诺沙星与头孢噻呋联用表现为相加作用,与多西环素,氟苯尼考和磺胺二甲嘧啶配伍表现为拮抗作用；利福平与头孢噻呋和多西环素联用表现为相加作用,与卡那霉素和氟苯尼考联用表现为拮抗作用；黄连素与氟苯尼考和磺胺二甲嘧啶配伍表现为相加作用,无拮抗作用,但与头孢噻呋和泰万菌素联用时,其FIC=1.5表示当两者与黄连素联用时,可以减量应用；林可霉素与其它抗菌药联用没有出现协同/相加作用,与泰万菌素和硫酸黏菌素表现为拮抗作用；其它未提及的联用结果均为无关作用。(2)以大肠杆菌、巴氏杆菌为代表的革兰氏阴性菌联合用药结果如下：原有抗菌药分类下四类抗菌药联用情况与以往基本相符,唯繁殖期杀菌药与快速抑菌药联用并未出现严格的拮抗作用,表现为FIC=1.5无关作用时,考虑到毒性大小及经济成本,可将一种药物剂量减少应用；恩诺沙星与头孢噻呋、硫酸黏菌素、磺胺二甲嘧啶和黄连素联用表现为协同/相加作用,偶有无关作用出现,与氟苯尼考和利福平配伍表现为拮抗或无关作用；利福平与硫酸黏菌素、多西环素、氟苯尼考和黄连素联用表现为相加或无关作用,与卡那霉素、林可霉素和恩诺沙星合用表现为拮抗或无关作用；黄连素与阿莫西林和氟苯尼考配伍表现为无关作用,与林可霉素表现为无关作用FIC=1.5,提示可以减量应用一种药物,与其它类别均表现为相加/协同作用；林可霉素与硫酸黏菌素和磺胺二甲嘧啶联用表现为协同/相加作用,与阿莫西林、卡那霉素、泰万菌素、氟苯尼考和利福平则表现为拮抗作用；其余组合为无关作用。(3)金黄色葡萄球菌与空白组相比具有较强的生物被膜形成能力,为强成膜能力株,经过试验条件筛选,确定于37℃,TSB肉汤培养2d作为最适条件,考察卡那霉素、硫酸黏菌素、泰万菌素、克拉霉素、恩诺沙星、黄连素及林可霉素等7种抗菌药亚-MIC对金黄色葡萄球菌成膜量的影响。结果表明,黄连素和林可霉素在较高亚-MIC浓度时表现为明显的抑制作用,低浓度组对细菌成膜能力影响不明显；卡那霉素与硫酸黏菌素各浓度点均表现出一定的抑制效应；恩诺沙星表现为明显的抑制生物被膜形成能力,且存在量效关系,浓度为1/2MIC时对生物被膜形成抑制作用最强；泰万菌素在较高浓度时反而表现出诱导效应,而同类药物克拉霉素则表现为抑制生物被膜形成。
【作者】赵宜双；
【导师】操继跃；
【作者基本信息】华中农业大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】抗菌药；微量棋盘稀释法；FIC；亚-MIC；生物被膜；

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