鲤春病毒血症病毒G蛋白单抗和多抗的制备及特性鉴定

【摘要】鲤春病毒血症(Springviremiaofcarp,SVC)是一种急性、出血性传染病,主要感染鲤科鱼类,在春季大规模爆发时,患病的幼鱼死亡率达到30%-70%,国际动物卫生组织的《水生生物法典》将其列为必须申报的疫病之一。该病最早在欧洲爆发并引起严重的经济损失。目前,在中东、美国、巴西、加拿大以及中国均有检测到鲤春病毒血症病毒(Springviremiaofcarpvirus,SVCV)的报道。本实验利用PCR方法扩增鲤春病毒血症病毒糖蛋白G的部分基因序列,即全基因组序列上第3094位到4170位的碱基,将扩增产物克隆至表达载体pGEX-KG中,构建重组质粒SVCV-g-KG。将重组质粒转化感受态细胞BL21,经IPTG诱导后,表达了与预期大小相符的约66KDa的融合蛋白,可溶性分析表明该蛋白主要表达在包涵体中。初步纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,4次免疫后,将小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇的作用下融合,并最终筛选出1H11和488两株单克隆抗体。免疫印迹实验和间接免疫荧光实验表明制备的单抗可以特异性结合鲤春病毒血症病毒G蛋白,进一步分析单抗的抗原表位,发现两株单抗均针对鲤春病毒血症病毒G蛋白氨基酸序列上273到287之间的位点。同时将融合蛋白免疫日本大耳白兔,制备了多克隆抗体,通过酶联免疫吸附实验检测其抗体效价,利用间接免疫荧光实验和免疫印迹实验检测其特异性,用病毒孵育实验验证该抗体是否具有中和活性。结果表明,制备的多克隆抗体ELISA效价为1：256000,间接免疫荧光实验和免疫印迹实验证明抗体与病毒结合活性良好,特异性高。病毒孵育实验结果证明多克隆抗体具备中和活性,能够有效阻断鲤春病毒血症病毒对细胞的感染。鲤鱼春病毒血症病毒G蛋白单克隆抗体和多克隆抗体的制备,为进一步建立病毒的快速检测方法以及研究病毒的致病机理奠定了基础。
【作者】罗培骁；
【导师】刘学芹；
【作者基本信息】华中农业大学，水产养殖，2014，硕士
【关键词】鲤春病毒血症病毒；G蛋白；单克隆抗体；多克隆抗体；特性鉴定；

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