孕酮、雌二醇与IFN-τ调控奶牛子宫内膜上皮细胞表达MIC1和BoLA-A的研究

【摘要】胚胎在妊娠过程中作为“同种半异体”而不被母体所排斥,主要是通过调控母体与胎儿界面的主要组织相容性复合体(MHC)的时相性表达来实现的。牛的MHC称为牛白细胞抗原(BoLA)。BoLA-I类分子分为典型性和非典型性两类分子。其中BoLA-A属于典型的BoLA-I类分子,能够呈递抗原给相应的T淋巴细胞和巨噬细胞；MIC1属于非典型的BoLA-I类分子,能激活NK细胞的活性。已有研究证明由胚胎滋养层细胞分泌的IFN-τ是反刍动物的妊娠识别信号,能调控BoLA-A和MIC1时相性表达,从而有助于胚胎的识别和妊娠的建立；雌二醇和/或孕酮能刺激胚胎滋养层细胞差异表达IFN-τ。孕酮和雌二醇对BoLA-A和MIC1的调控作用有待研究。因此,研究孕酮和/或雌二醇及其联合IFN-τ对BoLA-A和MIC1的干预作用,有助于从分子通路和功能研究等方面更进一步揭示BoLA-I类分子调节妊娠免疫的分子机制。首先将雌二醇设定3个浓度梯度分别为12.5pg/mL、25pg/mL和50pg/mL,孕酮设定3个浓度梯度分别为2.5ng/mL、5ng/mL和10ng/mL,作用时间设定为3h、6h、12h和24h。不同浓度孕酮和雌二醇单独或联合干预奶牛子宫上皮细胞。其次将MIC1基因表达明显上调组25pg/mL雌二醇和2.5ng/mL孕酮与100ng/mLIFN-τ浓度分别或联合干预奶牛子宫内膜上皮细胞6h、12h和24h。最后选取以上两次实验的结果中MIC1和BoLA-A平均值差异性最大的2组及空白对照,在蛋白水平,westernbolt分别检测MIC1和BoLA-A蛋白表达情况.本研究取得的主要结果如下:(1)孕酮和雌二醇联合作用时在6h能明显上调MIC1基因表达,两者单独作用不明显,6h后呈下调趋势。表明雌二醇和孕酮单独作用于子宫内膜上皮细胞时对其表达MIC1均无显著的作用；但是,二者同时作用于子宫内膜上皮细胞6h能显著地上调MIC1的表达,但其他时间作用不明显。孕酮和雌二醇在12h能明显上调BoLA-A基因的表达,其中12.5pg/mL雌二醇、12.5pg/mL雌二醇和5ng/mL孕酮、50pg/mL雌二醇和5ng/mL孕酮组上调作用显著(P<0.01),到24hBoLA-A基因表达下调,其中25pg/mL雌二醇和10ng/mL孕酮组下调作用显著(P<0.01)。结果表明,雌二醇和孕酮单独或联合作用于子宫内膜上皮细胞时对其表达BoLA-A在12h均上调,24hBoLA-A呈下调趋势,两者联合作用比单独作用时调节作用更显著。(2)孕酮、雌二醇和IFN-τ联合作用在6h时能更显著地协同上调MIC1基因表达(P<0.01)。结果表明,IFN-τ能协同孕酮、雌二醇对子宫内膜上皮细胞表达MIC1,但其他时间作用不明显。再将BoLA-A基因表达明显上调组12.5pg/mL雌二醇和5ng/mL孕酮与100ng/mLIFN-τ分别和联合干预奶牛子宫上皮细胞为6h、12h和24h,结果显示,在24h雌二醇和IFN-τ联合作用比两者单独作用上调作用显著(P<0.01),孕酮和IFN-τ联合作用比孕酮单独作用上调作用亦显著(P<0.01)。结果表明,在6-12h孕酮、雌二醇和IFN-τ协同表达BoLA-A基因的作用不显著,但到24h协同作用显著。(3)MIC1和BoLA-A蛋白水平的表达差异性和基因水平是一致的。结论：孕酮和雌二醇联合作用时在6h能明显上调MIC1基因表达,两者单独作用不明显。雌激素和孕酮单独或联合作用于子宫内膜上皮细胞时对其表达BoLA-A在12h时均上调,24h时BoLA-A呈下调趋势；两者联合作用更显著。在6h孕酮、雌二醇和IFN-τ协同表达MIC1基因的作用显著,24h协同表达BoLA-A作用显著。MIC1和BoLA-A在基因水平和蛋白水平的表达结果是一致的。
【作者】陈齐鸿；
【导师】邓干臻；
【作者基本信息】华中农业大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】奶牛；BoLA-A；MIC1；孕酮；雌二醇；IFN-τ；子宫内膜上皮细胞；表达调控；

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