苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌主要杀蚊毒蛋白的克隆及表达

【摘要】Cry4Aa、Cry4Ba是苏云金芽孢杆菌以色列亚种在芽孢时期产生的毒蛋白，Cry4Aa蛋白的分子量为130Kda，Cry4Ba蛋白的分子量为128Kda；Mtx1、Mtx2、Mtx3是球形芽孢杆菌SSII-1在营养期产生的毒蛋白，Mtx1蛋白的分子量为100Kda，Mtx2蛋白的分子量为31.8Kda，Mtx3蛋白的分子量为35.8Kda。为了进一步了解Cry4Aa、Cry4Ba、Mtx1、Mtx2、Mtx3蛋白的特性，本文参照已发布NCBI的GenBank目的基因序列，采用软件Primer5设计Cry4Aa、Cry4Ba、Mtx1、Mtx2、Mtx3基因扩增引物，并加入酶切位点序列。以苏云金芽孢杆菌以色列亚种的质粒和球形芽孢杆菌SSII-1的染色体为模板，进行PCR扩增，将PCR产物与PMD18-T载体连接构建克隆质粒，然后进行酶切鉴定并测定序列，结果表明成功获得目的基因。将目的基因分别与pHT315载体连接，然后将表达质粒分别转入到大肠杆菌BL21和苏云金芽孢杆菌无晶体突变株内，使用IPTG诱导目的蛋白表达。生物测定结果表明Cry4Aa、Cry4Ba蛋白对淡色库蚊幼虫的致死率基本相同。但Cry4Aa、Cry4Ba蛋白的致死率要明显低于苏云金芽孢杆菌以色列亚种，这可能是由于苏云金芽孢杆菌以色列亚种菌液中含有多种毒蛋白并且具有协同作用所造成的；Mtx1与球形芽孢杆菌的毒力相当，而Mtx2、Mtx3无毒。
【作者】杨丽丽；
【导师】孙强；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，农药，2014，硕士
【关键词】苏云金芽孢杆菌；球形芽孢杆菌；杀蚊蛋白；克隆；原核表达；

【参考文献】
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