高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原区域的鉴定

【摘要】高致病性猪繁殖与呼吸综合征（Highlypathogenicporcinereproductiveandrespiratorysyndrome，HP-PRRS）是一种烈性的病毒性传染病，病死率很高；HP-PRRSV可以导致机体免疫抑制而继发其他疾病。该病在全国范围内传播较广泛，极大的危害了我国养猪业的发展，经济损失十分严重。为制备HP-PRRSVHuN4株单克隆抗体(MAbs)，本研究以HP-PRRSVHuN4株免疫BALB/c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，通过间接免疫荧光（IFA）方法进行筛选，最终获得3株稳定分泌抗HP-PRRSV核（N）蛋白的MAbs的细胞株，分别命名为2E9、3G2和4E3，腹水针对HP-PRRSVHuN4的IFA效价为1:5120-1:10240。抗体亚类鉴定重链类型均为IgG1，轻链均为κ链。采用不同PRRSV毒株感染Marc-145细胞，IFA结果显示，3株MAbs与HP-PRRSVHuN4株，疫苗株HP-PRRSVHuN4-F112、JXA1-R、TJM-F92，经典疫苗株CH-1R、RespPRRSV-MLV均反应；而与欧洲株DV、HBL不反应，鉴定3株MAbs是美洲型与欧洲型的差异单抗。3株MAbs均能够特异性识别真核表达的HP-PRRSVHuN4株N蛋白。Westernblot鉴定结果显示，3株MAbs均能够特异性识别HP-PRRSVHuN4株及原核表达的重组N蛋白，将ORF7基因截短成相互重叠的片段，在E.coliBL21（DE3）中和GST标签融合表达，利用Westernblot分析重组蛋白与MAbs的反应情况，其中2E9识别的抗原区域初步鉴定为38-105aa、56-117aa区域。该结果为进一步研究HP-PRRSVN蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。
【作者】李琳；
【导师】陈志宝；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】HP-PRRSV；N蛋白；单克隆抗体；抗原区域；

【参考文献】
[1]徐正兴.新时期女大学生生活方式及其引导策略[D].苏州大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[2]吴瑞环.高速公路沥青路面大修方案优选方法研究[D].长安大学,道路与铁道工程,2014,硕士.
[3]张庆涛.预应力碳纤布加固梁试验和数值模拟分析[D].山东大学,水工结构工程,2013,硕士.
[4]朱来东,田勇,李辉,张溪溪,罗绍华.三价铁源制备LiFePO_4的研究进展[J].电子元件与材料,2014,01:1-4+8.
[5]刘泓洋.物流产业对湖南区域经济增长的促进作用分析[D].湖南师范大学,产业经济学,2014,硕士.
[6]阮红新.新疆大学生社会责任感培育研究[D].新疆师范大学,思想政治教育,2013,硕士.
[7]梁爱玲.针对CXCR4融合多肽抗肿瘤研究[D].重庆医科大学,临床检验诊断学,2014,博士.
[8]徐国文.港口与城市协调发展研究[D].山东财经大学,区域经济学,2014,硕士.
[9]邵建利.市场经济中的企业统计信息系统研究[J].财经研究,2001,02:35-40.
[10]孙书利,刘丽芳.具有随机多丢包的ARMA信号最优线性估计[J].控制与决策,2013,02:223-228.
[11]刘溢敏.赫芬顿邮报用户制作内容的特色分析[D].河北大学,传播学,2014,硕士.
[12]侍爱彬.房地产行业税收风险识别模型研究[D].苏州大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[13]索靖.基于位移的地震易损性概率评估方法研究[D].浙江大学,建筑与土木工程（专业学位）,2013,硕士.
[14]张铃钰.高中英语交互听力教学的调查研究[D].东北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[15]梁赫.企业考勤系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[16]洪善泉.浅谈北欧松木家具的风格[J].家具.1994(03)
[17]姜曼.新型聚酰胺酰亚胺的合成及性能研究[D].宁波大学,物理化学,2013,硕士.
[18]蒋志勇.日志管理系统研究及其在OSCAR中的实现[D].浙江大学,2004.
[19]葛军.基于斜投影—不展开薄层定量分析方法的研究[D].广西科技大学,生物化工,2013,硕士.
[20]赵晓霞.BGA焊点缺陷的自动检测与识别技术的研究[D].中北大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[21]刘翠芳.济南市历城区小型农田水利设施治理模式与管理体系研究[D].山东大学,水利工程（专业学位）,2013,硕士.
[22]刘静.股份评估补偿权法律制度研究[D].对外经济贸易大学,国际法,2004,硕士.
[23]章坚民,叶义,徐冠华.变电站单线图模数图一致性设计与自动成图[J].电力系统自动化,2013,09:84-91.
[24]吴明明.双管喉罩用于老年患者全身麻醉的临床研究[D].吉林大学,公共卫生,2012,硕士.
[25]杨唐文,高立宁,阮秋琦,韩建达.移动双臂机械手系统协调操作的视觉伺服技术[J].控制理论与应用,2015,01:69-74.
[26]乔大军,孟祥顺,张玉斌,王晓燕.检波器的联接方式对地震资料品质的影响[J].石油地球物理勘探,2001,06:61-60+59-58+57-56+0.
[27]罗彦.企业智能过程中的数字化仓储物流[D].浙江理工大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[28]崔国清.日常生活视阈下的天气美学[D].兰州大学,比较文学与世界文学,2013,硕士.
[29]高进良.转录因子SOX11基因甲基化在鼻咽癌发生发展及转移中的作用[D].广州医科大学,耳鼻咽喉科学（专业学位）,2014,硕士.
[30]龚发金.区域竞争力评价模型研究[D].北京交通大学,2007.
[31]秦来芬,夏永高,陈立鹏,胡华胜,肖锋,刘兆平.新一代动力锂离子电池磷酸锰锂正极材料的研究现状与展望[J].电化学,2015,03:253-267.
[32]朱奎.肾盂逆行灌注联合肾周冰水降温在后腹腔镜肾部分切除术中对肾低温保护的应用研究[D].蚌埠医学院,外科学,2013,硕士.
[33]倪巍伟,周晓云,顾宇,孙志挥.一种改进的关联规则更新算法及其实现[J].计算机工程与应用,2004,18:171-173.
[34]张日朗.海珍品质量追溯系统设计与实现[D].哈尔滨工业大学,计算机技术,2013,硕士.
[35]刘宬光.700铝箔轧机的结构设计及使用效果[J].轻合金加工技术.1990(12)
[36]刘强.全钢子午线轮胎振动仿真分析及其影响因素研究[D].哈尔滨工业大学,工程力学,2014,硕士.
[37]王永利.关联规则挖掘算法及其在Web挖掘上应用的研究[D].哈尔滨工程大学,2003.
[38]许姝.基于视觉特性的高速铁路沿线动态景观控制研究[D].华南理工大学,风景园林（专业学位）,2012,硕士.
[39]王艾萌.目的论视角下的自传《向前一步》的翻译研究[D].首都师范大学,英语语言文学,2014,硕士.
[40]程乐.Mg-Gd(Y)-Zn系多元合金相图计算和实验验证[D].西安工业大学,材料加工工程,2014,硕士.
[41]钱金山.微型计算机通信技术[J].电讯技术.1992(03)
[42]袁玉英.胶州市前韩地下水源地硝酸盐污染的PRB修复试验研究[D].济南大学,水文学及水资源,2012,硕士.
[43]江南.部门治理中“裸官”监督研究[D].华中师范大学,行政管理,2014,硕士.
[44]王丽娜.中外文化差异对国际商务谈判的影响及策略分析[D].吉林大学,国际商务,2014,硕士.
[45]汪玲.基于边权的交通网络异质性及拥塞分析[D].华中科技大学,系统工程,2013,硕士.
[46]王露露.跨国公司非股权安排博弈模型研究[D].长春工业大学,国际贸易学,2013,硕士.
[47]肖皓.I-CASH中数据页压缩的SOPC实现[D].华中科技大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[48]顾丽红.基于迁移理论的高中生物有效教学探究[D].苏州大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[49]王舒.八字地老虎气味感受相关蛋白基因的序列分析及表达[D].东北农业大学,农业昆虫与害虫防治,2013,硕士.
[50]盘娟梅.我国高等教育助学贷款研究[D].湖南师范大学,教育经济与管理,2004,硕士.