腐蹄病奶牛血浆差异蛋白的筛选及炎性标记物BoHp的表达与抗体制备

【摘要】为了揭示奶牛腐蹄病血浆中疾病相关因子，利用鸟枪法蛋白质组学对健康奶牛和患腐蹄病奶牛血浆进行蛋白质组学分析。在健康奶牛血浆样本中，鉴定出648个蛋白，其中非冗余蛋白数为234，高度可信蛋白数为123；在奶牛腐蹄病病牛血浆样本中，鉴定出712个蛋白，其中非冗余蛋白数为272，高度可信蛋白数为138。高度可信蛋白的分子量、等电点和GO注释的分析结果显示，健康奶牛和患腐蹄病奶牛血浆中高度可信蛋白在分子量、等电点和GO分类方面都表现出明显的差异。在两个样本之间，一共存在22个潜在差异蛋白，其中16个蛋白存在于奶牛腐蹄病血浆样本中，包括免疫球蛋白、天然免疫识别分子、急性期蛋白、调控蛋白、细胞粘附因子和细胞骨架蛋白；6个蛋白存在于健康奶牛血浆样本中，包括调控蛋白、细胞骨架蛋白和凝血因子。通过ELISA实验，验证了健康奶牛和腐蹄病奶牛血浆中IgG的差异表达。在这些潜在的差异蛋白中，牛结合珠蛋白（BoHp）、se-rpina10蛋白、α白蛋白前体、载脂蛋白D、预测肽聚糖识别蛋白L(PGRP-L)和角质素硫酸多糖(KS-PG)可能是参与腐蹄病的疾病因子，尤其是BoHp在许多奶牛炎性疾病均呈现高水平表达，具有作为腐蹄病及其他炎性疾病诊断Marker的潜质。进一步，本研究根据大肠杆菌密码子的偏爱性，合成了去除信号肽序列的BoHp预测抗原区的核苷酸序列（pirBoHp），利用pET-32a(+)原核表达载体，对pirBoHp基因进行了表达，对表达的重组蛋白进行了纯化。纯化蛋白免疫BALB/c鼠后，制备了针对pirBoHp重组蛋白的单因子血清。W-esternblot试验结果显示，pirBoHp重组蛋白的单因子血清能够识别本研究中腐蹄病奶牛血浆样本中BoHp蛋白的α链和β链，而不能检测出健康奶牛血浆样本中BoHp的存在。临床奶牛腐蹄病病例检测结果显示，pirBoHp单因子血清能够识别患腐蹄病奶牛血浆中的B-oHp存在。在本研究中，健康奶牛和患腐蹄病奶牛血浆蛋白质组学的数据，增加了奶牛腐蹄病发病机理的理解，补充了奶牛血浆蛋白质组学信息；牛结合珠蛋白的表达及其单因子血清制备与初步应用，为奶牛腐蹄病早期诊断和其他奶牛炎性疾病的诊断提供了前期基础。
【作者】张红；
【导师】孙东波；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】奶牛；腐蹄病；血浆蛋白质组学；结合珠蛋白；单因子血清；

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