杜仲叶绿原酸提取工艺研究及其指纹图谱建立

【摘要】本研究通过单因素与正交试验相结合的方法，旨在筛选出杜仲叶绿原酸的最适浸出溶剂和最适提取工艺并采用高效液相色谱法建立杜仲叶药材指纹图谱。试验得到如下结果（1）标准曲线绘制结果：紫外分光光度法：y=22.6442x-0.2039，r=0.9999（n=6）。其中y为绿原酸浓度（μg/mL），x为吸光度值，说明绿原酸浓度在5~40μg/mL区间内线性关系良好；高效液相色谱法：y=0.001x+0.0022，r=0.999（n=6）其中y为绿原酸质量（μg），x为绿原酸峰面积，试验证明绿原酸质量在0.075~0.6μg区间内呈良好线性关系。（2）浸出溶剂筛选结果：试验结果表明甲醇、乙醇、丙酮最佳体积分数分别为20%、30%、40%，对应绿原酸得率为0.8471%，0.9056%，0.9430%，水做浸出溶剂，绿原酸得率为0.7032%。通过指纹图谱分析可知20%甲醇、30%乙醇、40%丙酮溶剂的浸提物色谱图峰形一致，且绿原酸峰面积占总峰面积百分比依次为81.583%，81.168%，80.424%，百分比差异很小。（3）30%乙醇溶液做提取溶剂时，各工艺绿原酸最佳提取条件分别为：①超声提取法：溶剂pH值为4，液料比为14，超声频率40KHz，超声时间80min此时绿原酸得率最高为0.9032%。正交试验结果表明，各因素对绿原酸得率影响，递减顺序为：超声功率＞超声时间＞料液比，即超声功率对绿原酸得率影响最大。②微波提取法：溶剂pH值为4，液料比为18，微波火力中火，微波辐射时间60s，此时绿原酸得率最高为0.9313%。各因素对绿原酸得率影响从大到小顺序为：微波火力＞辐射时间＞液料比，即微波火力对绿原酸得率影响最大。③酶解提取法：液料比为14，酶解反应时间为1.5h，溶剂pH值为4.5，酶用量0.35%，酶解温度40℃，此时绿原酸得率最高为0.9508%。试验各因素对绿原酸得率影响排序为：酶解pH＞酶解温度＞酶用量，即酶解pH值对绿原酸得率影响最大。④热浸提取法：提取液pH值为4，热浸温度70℃，热浸时间0.5h，液料体积质量比18，此时绿原酸得率最高为0.9654%。各因素对绿原酸得率影响递减顺序为：液料比＞热浸温度＞热浸时间，即液料比对绿原酸得率影响最大。（4）绿原酸提取数据及色谱图分析可知，绿原酸最佳提取方法为热浸提取法。（5）用筛选出的绿原酸最适提取工艺所制备的10批杜仲叶提取液，指纹图谱相似度均达0.9以上。本研究最终得出，杜仲叶绿原酸最佳提取溶剂为体积分数30%的乙醇溶液。热浸提取为杜仲叶绿原酸提取的最适工艺。建立了最佳提取工艺条件下，重庆杜仲叶药材指纹图谱。
【作者】李坤；
【导师】武瑞；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】杜仲叶；绿原酸；提取；指纹图谱；

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