鸡白痢沙门氏菌菌影（Ghost）疫苗的制备及其免疫效力评价

【摘要】鸡白痢（PullorumDisease）主要对幼鸡产生急性全身性疾病，成年鸡感染与慢性携带者很少出现显著的临床症状。目前，我国禽类养殖业发展水平相对较差，不能有效控制沙门氏菌在畜禽之间的传播，临床上常使用灭活苗来预防该疾病的发生，但由于存在免疫效力较低等问题，因此研究一种有效的疫苗刻不容缓。本试验将PhiX174噬菌体裂解基因E和8种不同的抗菌肽序列分别插入前期构建的温控双表达载体pDUET的MCS1和MCS2中，构建8种不同的溶菌质粒。采用电击穿孔法分别转化至鸡白痢沙门氏菌感受态细胞中，在30C条件下培养至对数生长期，然后升温至42C诱导裂解基因的表达，扫描电镜下可见菌体发生了不同程度的裂解，利用平板计数方法计算细菌的裂解率，确定最佳重组质粒。经试验分析抗菌肽SMAP-29和E基因的组合在pDUET载体中表达具有最佳溶菌效果，其裂解效率可达到99.89%，将其命名为pDUET-E-SMAP29。应用制备菌影疫苗开展SPF鸡免疫效率的评价研究。将50只7日龄雏鸡随机分成三组：菌影疫苗组、灭活苗组和对照组；疫苗组、灭活苗组各20只，对照组10只鸡。一共免疫2次，每次间隔2周。在一免后每隔一周进行翅静脉采血，分离血清，以鸡白痢沙门氏菌超声上清液作为包被抗原，利用间接ELISA方法检测免疫鸡血清IgG抗体水平。一免和二免免疫后2周后取脾并分离淋巴细胞，使用流式细胞仪检测脾脏中CD4+和CD8+细胞亚群的动态变化。第2次免疫两周后，用野生型鸡白痢沙门氏菌进行攻毒。在攻毒7天后，观察并记录鸡死亡数量。通过鸡的存活率、内脏病理变化，体液及细胞免疫水平综合评价鸡白痢沙门氏菌菌影疫苗的免疫保护效果。试验结果表明，菌影疫苗可诱导鸡机体产生较高水平的细胞免疫及体液免疫，对鸡白痢沙门氏菌的侵袭具有良好的保护作用。本试验为制备鸡白痢沙门氏菌新型疫苗提供了基础。
【作者】田秋丰；
【导师】刘思国；倪宏波；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】鸡白痢沙门氏菌；裂解质粒；菌影菌苗；保护效力；

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