杜仲叶提取物中绿原酸的纯化及其体外抑菌效果的研究

【摘要】本研究旨在确定杜仲叶提取物中绿原酸的纯化工艺，并通过指纹图谱的建立对纯化产品的质量进行控制，继而考察其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、白色葡萄球菌、乳房链球菌、停乳链球菌的体外抑菌效果，为下一步临床应用提供试验依据。试验所采用的纯化方法是大孔吸附树脂法，首先通过絮凝沉淀法来对样品进行预处理，然后再用高效液相色谱法建立纯化绿原酸的指纹图谱；抑菌试验主要采用滤纸片法和连续梯度稀释法来观察并确定其抑菌效果和最小抑菌浓度；绿原酸的含量测定采用紫外分光光度和高效液相色谱两种方法。试验结果显示：絮凝沉淀的最佳工艺条件为，10mLpH=5的样品液中添加1%醋酸壳聚糖溶液1mL，在60℃的水浴中搅拌4min后，在4℃的环境中静置4h，过滤得到澄明度较好的样品溶液；NKA-Ⅱ树脂吸附与解析效果最好，其最佳工艺条件为，样品溶液pH=4，样品稀释倍数为6倍，上样体积为3.5BV，上样速度为2BV/h，洗脱剂为70%乙醇，洗脱速度为2BV/h，用量为2BV；纯化绿原酸的抑菌试验效果为，6种细菌的抑菌环直径分别为13.44、18.12、13.56、14.00、13.66、13.00mm，其中金黄色葡萄球菌高度敏感，其它5种细菌中度敏感；乳房链球菌、停乳链球菌的最低抑菌浓度为0.5g/mL，溶液中绿原酸含量为7.20mg/mL，其他4种细菌的最低抑菌浓度为0.25g/mL，溶液中绿原酸含量为3.58mg/mL；对照指纹图谱与每批样品的相似度均大于0.9，表明生成的对照指纹图谱可以代表10批样品的共同特征，可以作为本试验方法及条件下纯化绿原酸的指纹图谱。综上所述，絮凝沉淀法和大孔吸附树脂法的联用可以有效的分离纯化杜仲叶提取物中的绿原酸，纯化绿原酸可以通过指纹图谱控制质量，纯化绿原酸对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、蜡样芽胞杆菌、白色葡萄球菌均具有抑制作用。
【作者】伊文君；
【导师】武瑞；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】杜仲叶；绿原酸；絮凝沉淀；大孔吸附树脂；指纹图谱；抑菌效果；

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