牛呼吸系统疾病综合征PCR方法建立及初步应用

【摘要】牛呼吸道合胞体病毒(Bovinerespiratorysyncytialvirus,BRSV),牛传染性鼻气管炎病毒(Infectionsbovinerhinotracheitisvirus,IBRV)牛副流感病毒3型(Bovineparainfluenzavirus3,BPIV-3)均是主要的原发性呼吸系统疾病病原体,均会引起牛呼吸系统疾病综合征(Bovinerespiratorydiseasecomplex,BRDC),且常呈混合感染。BRDC是十分常见的,并具有很高的感染率和死亡率,是困扰养牛业的世界性难题。BRDC被美国全国牛场主协会等组织认为是养牛业的头等大病,被欧洲称为三大牛病之一。在我国该病的感染率和发病率也在不断上升,对养牛业造成了严重的经济损失。本研究根据GenBank上发表的牛呼吸道合胞体病毒BRSV核衣壳蛋白N基因序列,牛传染性鼻气管炎病毒IBRV保守基因gB序列和牛副流感病毒3型BPIV-3核衣壳蛋白N基因序列,设计并合成3对特异性引物。优化三重PCR反应条件,建立了3种病毒的三重PCR方法,可同时扩增出BRSVHJ株596bp,IBRVDQ株398bp和BPIV-3DQ株704bp大小的特异性片段,而对牛腺病毒7型、牛无浆体和Vero正常细胞扩增结果均为阴性。该三重PCR技术能检出BRSV的敏感性可达10TCID50·100μL-1,IBRV的敏感性可达10-1TCIDso·100μL-1和BPIV-3的敏感性可达102TCID50·100μL-1.用建立的BRSV,IBRV和BPIV-3三重PCR检测方法,BRSV和BPIV-3双重PCR检测方法,BRSV单重PCR检测方法,IBRV单重PCR检测方法,BPIV-3单重PCR检测方法和病毒分离鉴定方法对临床上的7份病料进行。结果显示,三重PCR方法,双重PCR方法和单重PCR方法检测结果符合率为100%；病毒分离鉴定方法阳性检出率较低。表明建立的关于牛呼吸系统疾病综合征的PCR检测方法有一定临床应用价值,可用于对3种病毒的同时检测和鉴别诊断。
【作者】王嵩；
【导师】侯喜林；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】牛呼吸道合胞体病毒；传染性牛鼻气管炎病毒；牛副流感病毒3型；多重聚合酶链式反应；

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