胸腺五肽的聚乙二醇修饰及其表征

【摘要】聚乙二醇(PEG)修饰技术可以效地降低蛋白和多肽类药物的免疫原性和抗原性、延长蛋白和多肽类药物在体内的循环半衰期、提高蛋白和多肽类药物在体内的综合药效,已成功用于改善多种蛋白和多肽类药物的性质。胸腺五肽(TP5)是一种具有重要应用价值的多肽,对机体免疫功能具有双向调节作用,能使过强或受到抑制的免疫反应趋于正常。本论文探索将mPEG修饰技术应用于TP5,以便解决胸腺五肽临床应用时存在的理化稳定性差、易被蛋白酶水解、在血液中循环半衰期太短等问题。针对胸腺五肽的性质,采用单甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)和单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)两种不同活性末端的聚乙二醇分别修饰N-末端氨基和第二位的赖氨酸,以反相高效液相(RP-HPLC)检测粗产物多肽浓度的方法分析PEG修饰产物的组成,同时监测不同修饰条件下反应动力学数据指导优化修饰工艺条件,以期获得更高的单修饰产物比例。确定mPEG-ButyrALD5000修饰TP5的优选反应条件为：反应缓冲液pH值为5.0,修饰剂肭腺五肽摩尔比为2：1,反应时间55min;mPEG-SPA5000修饰TP5的优选反应条件为：反应缓冲液pH值为8.5,修饰剂／胸腺五肽摩尔比为2.5：1,反应时间为6min。修饰粗产物用SP-SepharoseFastFlow阳离子交换层析柱分离纯化,并超滤除盐、真空冻干干燥后得到最终产物。对单修饰产物分子量、体外酶解稳定性进行了测定,通过x-射线建立了免疫抑制小鼠模型,并对TP5、mPEG-ButyrALD-TP5和InPEG-SPA-TP5等溶液对免疫抑制型小鼠碳廓清能力的影响进行了对比分析。结果表明,分离纯化后mPEG-ButyrALD-TP5和mPEG-SPA-TP5经MALDI-TOF-MS法检测两种产物均为单修饰,分子量5600左右；与未修饰TP5相比,其体外酶解稳定性得到很好的改善；对免疫抑制型小鼠,mPEG-ButyrALD-TP5无显著疗效,mPEG-SPA-TP5和TP5均能提高吞噬细胞的吞噬系数,改善免疫功能,而mPEG-SPA-TP5溶液促免疫药效及作用时间明显高于未修饰的TP5溶液。
【作者】范扩；
【导师】王长海；顾铭；
【作者基本信息】南京农业大学，海洋生物学，2013，硕士
【关键词】胸腺五肽；聚乙二醇修饰；半衰期；免疫增强作用；

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