鸡催乳素和新城疫病毒F基因疫苗联合免疫研究

【摘要】PRL是禽类就巢发生和维持的关键激素,F蛋白是新城疫病毒的主要宿主免疫保护性抗原。主动免疫鸡催乳素(Prolactin,PRL)和新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)F基因既可改变雌禽的繁殖性能,提高产蛋量,又可改善免疫性能。本研究应用基因克隆、细胞培养、基因免疫、蛋白印迹等技术,构建鸡催乳素和新城疫病毒(NDV)FDNA重组表达质粒,为研制鸡催乳素和新城疫基因疫苗奠定了基础。1、鸡PRL和NDVF基因的原核表达与免疫特性鉴定将鸡催乳素和NDVF基因克隆于pGEX-6P-1载体中,转化大肠杆菌BL21用0.5mMIPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果分析PRL、F基因获得高量表达,大小分别约为54kDa和86kDa,与预期结果相符,表达产物以融合蛋白包涵体的形式出现在沉淀中。Westernblot结果表明,融合表达的GST-PRL和GST-F蛋白能与小鼠血清发生特异性反应,证明其抗原性良好。经包涵体洗液裂解后得到纯化蛋白GST-PRL和GST-F分别免疫ICR小鼠,获得多克隆抗体,从而为PRL和F蛋白功能研究奠定了基础。2、共表达PRL和NDVF基因的真核质粒构建与鉴定本研究成功构建了重组真核质粒pVAX-PRL、pVAX-NDVF和pVAX-PRL-F,酶切及测序鉴定正确。然后将这些重组真核质粒用脂质体法转染HEK-293A细胞,通过Westernblot,可以检测到目的蛋白,为上述3个重组真核质粒的进一步应用奠定了基础。3、PRL和NDVF蛋白真核表达质粒对鸡生产性能和免疫特性研究150日龄150只地方土鸡随机分为5组,每组30只。第1组为阴性对照组,注射PBS,第2、3、4、5组分别腿部肌肉注射免疫pVAX、pVAX-PRL、pVAX-F和pVAX-PRL-F,剂量为每只鸡免疫100μg,21、42天后分别以相同的剂量加强免疫。结果显示,三次免疫后3周免疫重组真核质粒pVAX-PRL-F组,血清ELISA抗体等水平是最高的。免疫后pVAX-PRL和pVAX-PRL-F组就巢天数比对照组和pVAX组降低了0.8和13.8天(P<0.05),300日龄平均产蛋总数pVAX-PRL和pVAX-PRL-F组增加了8.6和16.4个(P<0.05),在免疫后38和42周,pVAX-PRL和pVAX-PRL-F组血清中PRL水平较对照组和pVAX组显著降低,三次免疫后3周免疫pVAX-PRL-F组有较高的淋巴细胞特异性的增殖,且IL-4及IFN-γ含量较其他组均有差异显著(P<0.05)。这些结果表明,PRL和NDVF蛋白真核表达质粒免疫鸡可以提高产蛋性能和免疫特性,为研制鸡催乳素和新城疫基因疫苗奠定了基础。
【作者】周梅仙；
【导师】茆达干；
【作者基本信息】南京农业大学，动物遗传育种与繁殖，2013，硕士
【关键词】地方草鸡；催乳素；新城疫；融合蛋白；免疫应答；

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