中药黄酮成分复方及其肠溶微囊的药理作用研究

【摘要】黄酮类化合物是一种广泛存在于自然界的化合物,能够防治呼吸系统和心脑血管疾病,具有抗癌、抗肿瘤、降低辐射损伤、消炎抑菌等作用,因而受到普遍重视。本研究用通过体内试验,研究了不同中药黄酮成分复方对鸡新城疫疫苗免疫、肠道酶和肠道内环境稳态平衡的影响,筛选出效果最佳的中药黄酮成分复方。再将最佳复方制备成为微囊,通过正交试验设计,筛选出制备中药黄酮成分复方微囊的最佳工艺条件。试验分为以下4个部分：试验Ⅰ中药黄酮成分复方对雏鸡新城疫疫苗免疫效果的影响为了研究中药黄酮成分复方对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响,将300羽雏鸡随机分为6组,每组2个重复,每个重复25羽：Ⅰ组为空白对照组；Ⅱ组为免疫对照组；Ⅲ组为黄芪多糖对照组;Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ3个组分别为3个中药黄酮成分复方组。在14、28日龄时除Ⅰ组外其余各组鸡均用鸡新城疫低毒力活疫苗(LaSota株)进行点眼、滴鼻免疫,2羽份/只。在两次免疫的前两天开始3个中药黄酮成分复方组饮喂各黄酮成分复方,15mg/只·d,连续5d；黄芪多糖组按说明饮服黄芪多糖可溶性粉,连续5d。分别于首免后第7d(D7)、14d(D14)、21d(D21)和28d(D28)每组随机抽取6只心脏采血测定血液淋巴细胞增殖和血清新城疫血凝抑制抗体效价。于首免后49d,除空白对照组外其余5组鸡均肌肉注射NDV强毒10-5(LD50)/0.1mL攻毒,于攻毒前1d和攻毒后第8d检测血清抗体效价,每天观察记录各组鸡群的临床症状和死亡情况。结果发现3个中药黄酮成分复方组HI抗体滴度从D21开始即显著高于免疫对照组,淋巴细胞转化率也高于或显著高于免疫对照组,攻毒后发病率和死亡率都低于或显著低于免疫对照组,尤其是淫羊藿-三七-野菊花-黄芩黄酮复方组(ESWB)更为显著,其抗体效价和攻毒后死亡率基本与黄芪多糖对照组接近,而保护率却略高。表明中药黄酮成分复方可以提高鸡新城疫疫苗免疫效果和免疫保护力,以ESWB复方效果最佳。试验Ⅱ中药黄酮成分复方对鸡肠道酶活性和微生物菌群的影响试验动物分组处理见试验Ⅰ,第二次免疫用药结束后2d,从各组随机选取体重相近的6只鸡,剖杀后无菌采集十二指肠、空肠、回肠、盲肠和盲直肠结合处的内容物,测定十二指肠、空肠、回肠内容物中蛋白酶和淀粉酶的活性,盲肠和盲直肠结合处内容物中肠杆菌和乳酸菌的数量。结果发现Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组各肠段蛋白酶活性显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个对照组(空肠段Ⅲ组与Ⅵ组接近,除外),以Ⅴ组(ESWB)最好；空肠段淀粉酶活性Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,十二指肠段Ⅴ组显著高于Ⅳ和Ⅵ组。组Ⅴ和Ⅵ盲肠乳酸菌数显著高于其他各组；Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组盲直肠结合处乳酸菌数高于其他3组,组V显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组盲直肠结合处肠杆菌显著高于I和VI组。表明中药黄酮成分复方对于鸡肠管消化酶和微生物菌群稳态选择性作用,可以增强消化酶活性,提升有益菌群数,改善肠道微生态平衡。综合分析,以ESWB复方(组V)效果最好,而疫苗免疫对于提升肠道酶活性和改善微生物菌群没有作用。试验III中药黄酮成分复方肠溶微囊的制备及工艺优化为了筛选中药黄酮成分复方微囊制备的最佳工艺条件,选用羟丙基甲基纤维素酞酸酯(HPMCP)作为囊材、有机溶媒选用丙酮、连续相选用液体石蜡、乳化剂选用Span80、分散剂选用硬脂酸镁制备微囊,以包封率、载药量和微囊形态为指标,考察HPMCP:丙酮(M/V)、分散剂的用量、搅拌时间等单因素对微囊指标的影响,然后在单因素的基础上以黄酮：HPMCP(M/M)(A)、Span80:液体石蜡(B)和搅拌速度(C)为因素水平进行正交试验,以微囊包封率、载药量和形态为指标对试验条件进行优选。结果发现制备中药黄酮成分复方微囊的最佳条件为：黄酮：HPMCP(M/M)为1：2.5、HPMCP:丙酮(M/V)为1.0：15、分散相：液体石蜡(V/V)为1：7、硬脂酸镁用量为液体石蜡的4%、Span80的用量为液体石蜡的9%,搅拌速度为300r/min。采用最佳条件制备的微囊外观规整,粒径大小在11-50μm之间,平均粒径为35.77μm,平均包封率为91.72%,平均载药量为26.84%。试验IV中药黄酮成分复方肠溶微囊对鸡体液免疫、抗病毒能力和肠道消化酶活性的影响为了研究中药黄酮成分复方微囊对鸡体液免疫效果和抗传染性支气管炎病毒的影响,将350羽雏鸡随机分为7组,每组2个重复,每个重复25羽：Ⅰ组为空白对照组；Ⅱ组为免疫对照组；Ⅲ组为黄芪多糖对照组；Ⅳ组为中药黄酮成分复方对照组；Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ三个组分别为中药黄酮成分复方微囊低、中、高剂量组。在14、28日龄时除Ⅰ组外其余各组鸡均用鸡新城疫低毒力活疫苗(LaSota株)进行点眼、滴鼻免疫,2羽份/只。在两次免疫的前两天开始拌料给药,连续5d；黄芪多糖组按说明服用黄芪多糖可溶性粉,连续5d。第二次给药后两天每组鸡随机抽取6只,无菌采集十二指肠、空肠、回肠内容物测定肠道内胰蛋白酶和淀粉酶活性。分别于首免后第7、14、21和28d每组随机抽取6只翅静脉采血测定血清血凝抑制抗体效价。于二免后除II组(免疫对照组)外其余各组滴鼻、点眼鸡传染性支气管炎病毒(EID50)/0.1mL、气管注射0.5mL攻毒,于攻毒后每天观察记录各组鸡群的临床情况和死亡情况。结果表明：中药黄酮复方微囊中、高剂量能够显著提高血清ND-HI抗体效价；鸡传染性支气管炎病毒攻毒鸡发病率和死亡率降低,提升了保护率；能够显著地提高肠道消化酶活性；中药黄酮成分复方微囊优于中药黄酮成分复方,微囊化能够提高药物的生物利用度。综合评价以高剂量组为最佳,中药黄酮成分复方作用优于黄芪多糖可溶性粉。
【作者】孙占鳌；
【导师】刘家国；
【作者基本信息】南京农业大学，临床兽医学，2013，硕士
【关键词】中药黄酮成分复方；免疫；肠道内环境；微囊；

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