广东部分地区犬流感血清流行病学调查及病毒的分离鉴定

【摘要】犬流感是由犬流感病毒(Canineinfluenzavirus,CIV)引起的一种高度接触性、传染性呼吸道疾病。已经证实有马源H3N8和禽源H3N2亚型流感病毒可以造成犬的感染,并引起犬的种内传播。犬与人类接触密切,目前尚不清楚流感病毒是否可以通过犬传染给人。因此,对犬流感的流行病学调查和病毒的监测具有重要公共卫生意义。研究利用血凝抑制试验对来源于广东省的309份犬血清样本进行H3亚型流感病毒抗体检测,总体阳性率为26.21%。对不同类型、不同区域的犬抗体阳性率进行比较,结果显示宠物犬、农家犬及流浪犬的抗体阳性率分别为34.02%、9.09%和25.93%,个别地区的阳性率超过50%。说明H3亚型犬流感已在犬群中流行,并且与近年的调查结果相比呈上升趋势。采集广东地区29份有呼吸道症状犬的鼻拭子,接种鸡胚分离病毒,并进行亚型鉴定和序列分析。分离获得2株H3N2亚型犬流感病毒,分别命名为A/canine/Guangdong/12/2012(H3N2)及A/canine/Guangdong/23/2012(H3N2).根据参考毒株的基因序列设计特异性引物,用RT-PCR的方法分别扩增两株病毒的8个基因片段,克隆入pMD-19T载体进行基因测序,并构建基因进化树。结果显示分离病毒的8个片段与韩国禽源犬、猫流感毒株、泰国分离株以及广东、江苏、北京、浙江、辽宁分离株的基因同源性均较高,达到98%-99%,与泰国2012年分离株在演化关系上最为接近。氨基酸比对显示HA的裂解位点、抗原位点、受体结合位点及潜在糖基化位点与禽源株相比均有突变。NA抗原位点也有突变,并在颈部有氨基酸插入。其中分离株A/canine/Guangdong/12/2012(H3N2)较独特,颈部只有一个氨基酸插入,与以往犬流感病毒中国分离株不同。为了建立针对多种亚型犬流感病毒的检测方法,选取犬流感病毒中保守的核蛋白(NP)基因,克隆至pET-32a载体,在大肠杆菌中诱导表达,然后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,NP蛋白获得成功表达,重组NP蛋白分子量为66ku,且与CIV全病毒抗血清可发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。重组NP蛋白的表达,为建立犬流感抗体ELISA检测方法提供了物质基础。上述研究为进一步探讨犬流感病毒的生物学特征和传播机制奠定基础,并为有效检测、科学防控犬流感提供参考依据。
【作者】郭昊；
【导师】刘永杰；罗卫强；
【作者基本信息】南京农业大学，预防兽医学，2013，硕士
【关键词】犬流感病毒；分离鉴定；流行病学；NP蛋白；H3N2；

【参考文献】
[1]张静.民族管弦乐作品在双排键电子琴领域的改编与演奏[D].西安音乐学院,双排键电子琴演奏,2013,硕士.
[2]郭川.超高层结构施工模拟及自爬模系统监测分析[D].北京交通大学,2013.
[3]胡凤琴,李硕,牟溥.如何写好数据分析和几个相关的统计问题[J].植物生态学报,2013,06:583-588.
[4]樊太.钢骨混凝土异形截面柱抗震性能试验及理论分析[D].北京工业大学,防灾减灾工程及防护工程,2004,硕士.
[5]姚刚.基于AIS的黑龙江船舶交通信息管理系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[6]刘恒志.死亡赔偿金制度研究[D].烟台大学,民商法学,2014,硕士.
[7]刘颖,苏俊峰,朱明强.基于迭代容积粒子滤波的蒙特卡洛定位算法[J].信息与控制,2013,05:632-638.
[8]鲁慧.魏晋南北朝涉医文学研究[D].湖南师范大学,中国古代文学,2014,硕士.
[9]张忠理.基于BB84协议相位编码的量子密钥分发系统研究与实现[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[10]张华玲.生物级乳酸脱水制丙烯酸的催化剂及工艺研究[D].大连理工大学,化学工艺,2013,硕士.
[11]杨洪镇.AP1000汽轮发电机组基础抗震性能研究[D].北方工业大学,结构工程,2014,硕士.
[12]满晓丽.烤烟漂浮育苗壮苗培育新技术应用研究[D].河南农业大学,烟草学,2012,硕士.
[13]郎松.膝关节骨性关节炎患者针刀术后进行功能锻炼的临床疗效观察[D].北京中医药大学,中医骨伤科学,2014,硕士.
[14]韩俊昭.玻璃成型加工控制系统关键技术研究[D].浙江理工大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[15]付学宝.高应力状态下钢管混凝土短柱轴压长期性能研究[D].哈尔滨工业大学,结构工程,2013,硕士.
[16]张媛.中小型房地产企业财务风险问题研究[D].广东财经大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[17]丁敏.基于电磁超材料的反演算法分析[D].安徽大学,电磁场与微波技术,2013,硕士.
[18]李艳.基于非抽样Contourlet变换和模糊C均值聚类的水凝胶形变检测研究[D].扬州大学,信号与信息处理,2012,硕士.
[19]贾鑫.用电致发光（EL）法分析检测晶硅太阳电池的工艺[D].内蒙古大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[20]赵冠飞.会计信息透明度对创业板高管减持信息优势的影响研究[D].安徽大学,会计学,2014,硕士.
[21]王辉.自动电压控制技术（AVC）在秦皇岛热电厂的应用研究[D].华北电力大学,电气工程（专业学位）,2012,硕士.
[22]何茹.论累积投票选举制[D].安徽大学,法律,2013,硕士.
[23]孙建国.化学镀法制备镍包覆铜复合粉末的工艺研究[D].兰州理工大学,有色金属冶金,2013,硕士.
[24]陈钱.海水侵蚀混凝土的微观及动态性能试验研究[D].宁波大学,固体力学,2012,硕士.
[25]蔡鹏飞.基于FPGA的混沌加密系统研究[D].天津理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[26]赵莉.医生及患者对慢性鼻—鼻窦炎主、客观评价的相关性分析[D].山东大学,耳鼻咽喉科学,2013,硕士.
[27]欧运德.相对劳动生产率与工资增长率对人民币实际汇率的联动关系研究[D].中国政法大学,世界经济,2013,硕士.
[28]吉兴全,文福拴,薛禹胜.排污权交易实施后的发电投资项目价值评价方法[J].电力系统自动化,2010,04:23-28.
[29]郝跃龙.小额贷款公司监管法律问题研究[D].中国政法大学,经济法学,2013,硕士.
[30]史辉.基于脚型三维形貌的自动化鞋楦定制关键技术研究[D].清华大学,2009.
[31]王晓静.DB公司中层管理者领导力发展问题研究及方案再设计[D].首都经济贸易大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[32]徐明.朱熹《论语集注》研究[D].扬州大学,古代文学,2011,硕士.
[33]王安幸.数据挖掘在中学图书管理系统中的应用研究[D].浙江工业大学,2012.
[34]王宏伟.适应信息时代的需要——论城市规划、建设与管理信息化的发展趋势[J].工程设计CAD与智能建筑,2001,05:10-15.
[35]葛慧.课程标准下的中考数学试卷结构的评价研究[D].东北师范大学,课程与教学论,2012,硕士.
[36]敖娟.产业集聚效应与湖北汽车产业再造[D].广西大学,政治经济学,2004,硕士.
[37]章鑑万.重视解决电力瓶颈制约问题[J].浙江经济.2004(03)
[38]陈浩林,倪成洲,邢筱君,陈刚,牛宏轩,刘原英.广义空间分辨率讨论及应用[J].石油地球物理勘探,2009,01:14-18+130+7+6.
[39]童俊华.蔬菜钵苗穴盘间移栽执行器设计、移栽信息检测与路径规划[D].浙江大学,农业机械化工程,2014,博士.
[40]薛定宇.一类非线性系统Fokker—Planck方程的解法[J].自动化学报,1996,03:323-331.
[41]赵山山.植物乳杆菌ST-Ⅲ盐应激反应及其协同保护作用的研究[D].江南大学,食品科学,2014,博士.
[42]杨彬.基于患者病症门诊综合导医系统的设计与实现[D].西南交通大学,电机与电器,2014,硕士.
[43]刘仕伟.写生因素在中国当代山水画创作中的体现[D].河北师范大学,美术学,2013,硕士.
[44]苏倩.框架预应力锚杆柔性支护结构的可靠度分析[D].兰州理工大学,结构工程,2013,硕士.
[45]张睿.大庆油田建设集团客户关系项目化管理研究[D].东北石油大学,项目管理（专业学位）,2013,硕士.
[46]董向芳.基于感性工学的女装设计研究与应用[D].浙江理工大学,设计艺术学,2013,硕士.
[47]邓丽丽.县级人大监督职能履行现状研究[D].华中师范大学,中外政治制度,2012,硕士.
[48]吴韵.洞庭湖地区生态文明建设问题研究[D].湖南师范大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2014,硕士.
[49]韩超南.大辽河河口区水体及悬浮颗粒物氮、磷的形态分布与变化特征研究[D].中国环境科学研究院,环境科学,2014,硕士.
[50]张鹏.罗非鱼产业进出口贸易预警系统的研究[D].南京农业大学,水产养殖,2013,硕士.