我国部分地区猪圆环病毒2型的亚型鉴定和分离株增殖特性研究
【摘要】猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV)是圆环病毒科圆环病毒属成员,其病毒粒子无囊膜,基因组是由一条单股、负链、环状的DNA组成。PCV有PCV1和PCV2两个基因型,PCVl对猪是非致病性的,PCV2是引起猪圆环病毒相关疾病的主要病原,给世界养猪业带来了巨大的经济损失。PCV2主要分为五个亚型,即PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d和PCV2e。本论文主要是对PCV2的亚型鉴定、PCV2的定量检测方法、PCV2a和PCV2b在PK15细胞上的增殖特性、PCV2a和PCV2b在Balb/c小鼠体内的增殖特性进行了研究。本文为PCV2的遗传变异、临床诊断和增殖特性的研究提供了一定的技术支持和理论基础。本论文主要内容如下:试验1.我国部分地区猪圆环病毒2型的亚型鉴定PCV2在我国各省市均有流行,为了了解2011至2012年间江苏、浙江和安徽三省部分猪场PCV2流行毒株的遗传变异情况,本研究利用PCV2检测引物从临床送检样品中筛选出28份阳性病料,利用两对PCV2全长扩增引物对阳性病料进行PCV2全长扩增和测序,然后对它们进行遗传进化分析。结果表明,全长序列为1767bp的有25个,为1768bp的有2个,为1766bp的有1个;28个毒株之间的核苷酸同源性为94.2%-100%,与13个参考毒株的核苷酸同源性为93.9%-100%;有3株为PCV2a,1株为PCV2b,24株为PCV2d,没有PCV2c和PCV2e.这表明当前主要的流行毒株是PCV2d。试验2.两种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用依据PCV2ORF1和ORF2基因的相对保守序列,分别设计合成两组特异性引物和TaqMan探针,构建分别包含PCV2ORF1和ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立了两种检测PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR方法。所建立的两条标准曲线的Ct值与起始模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数R2均在0.99以上,扩增效率均在90%-110%之间;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101copies/μL,ORF2方法可达1.0×102copies/μL。分别用两种方法对临床样品进行检测并比较检测结果。结果表明,由于一些临床样品中P1的存在,基于ORF1建立的定量检测方法更为准确、特异性更强,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。试验3.猪圆环病毒2型两亚型分离株在PK15细胞上的增殖特性研究为了研究猪圆环病毒2型的两个主要亚型,即PCV2和PCV2b在体外的增殖特性,我们分别将本实验室分离的PCV2和PCV2b毒株接种PK15细胞进行连续传代,对两亚型毒株的体外增殖特性进行了研究。利用荧光定量PCR方法对各代次病毒含量进行定量检测,利用细胞免疫荧光方法对第10代、20代、30代、40代、50代、60代细胞毒进行TCIDso测定,比较两亚型毒株在体外的增殖特性。研究结果表明,随着传代次数的增加,两亚型病毒的感染滴度均有明显的提高,但是PCV2b的增殖速度要明显高于PCV2a的。试验4.猪圆环病毒2型两亚型分离株在Balb/c小鼠体内的增殖特性研究为了研究PCV2a和PCV2b两亚型毒株在Balb/c小鼠体内的增殖特性,本文将两亚型毒株分别接种Balb/c小鼠,利用荧光定量PCR,ELISA等方法对小鼠各脏器中的病毒含量、血清中病毒和抗体水平等指标进行了研究。结果表明,PCV2a和PCV2b两亚型毒株均能在小鼠体内增殖,不同的是,后者的增殖能力要更强一些。本文为深入研究PCV2两亚型的致病机理奠定了一定基础。
【作者】周忠涛;
【导师】何孔旺;姜平;
【作者基本信息】南京农业大学,预防兽医学,2013,硕士
【关键词】猪圆环病毒2型;亚型鉴定;PK15细胞;Balb/c小鼠;增殖特性;
【参考文献】
[1]蒋子杰.中国传统风水理论在现代建筑设计中的应用研究[D].浙江大学,风景园林(专业学位),2012,硕士.
[2]余玉娇.基于粒子群算法的水库调度函数的研究[D].华中科技大学,水利工程,2013,硕士.
[3]赵海青.模糊数的Ranking与模糊规划[D].辽宁师范大学,基础数学,2003,硕士.
[4]杨晓蔚.四列圆锥滚子轴承的计算机辅助优化设计[J].轴承.1993(10)
[5]王小泉.C反应蛋白与牙周炎和冠心病相关性的初探[D].南方医科大学,口腔临床医学,2012,硕士.
[6]黄正福.面向尺寸检测的机器视觉系统研究[D].浙江工业大学,2005.
[7]程玉仁.基于数字图像处理的摄像机跟踪系统[D].西北工业大学,电工理论与新技术,2004,硕士.
[8]马喆.我国地方财政预算权的适度独立研究[D].辽宁大学,经济法学,2014,博士.
[9]王佳欣.基于感知学习风格的职高小组合作学习[D].河北师范大学,学科教学,2013,硕士.
[10]朱福勇.江苏省盐城市建湖县城市绿地植物景观研究与评价[D].南京农业大学,风景园林,2013,硕士.
[11]王永初,任秀珍.典型工业过程控制系统的设计方法(七)[J].冶金自动化,1991,03:48-52.
[12]刘夏.基于ASP.NET的无纸化办公系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[13]王鹏.基于CEN/XFS3.0标准下ATMC的研究与实现[D].华南理工大学,计算机技术,2012,硕士.
[14]田畅.铸造Al-Si-X系合金时效初期组织演变的计算与模拟[D].沈阳工业大学,材料加工工程,2014,博士.
[15]姜旭萍.超临界条件下铈锆固溶体催化二氧化碳和甲醇合成碳酸二甲酯的研究[D].河北科技大学,环境工程,2013,硕士.
[16]薛安成,张兆阳,张建民,常乃超,毕天姝.基于最大测点正常率的线路参数增广状态估计方法[J].电力系统自动化,2014,10:61-65.
[17]张国灿.税源专业化管理模式下税收执法风险管理研究[D].云南财经大学,公共管理,2014,硕士.
[18]孙晔.中国青少年英语发音自我概念的发展性研究[D].广东外语外贸大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[19]周玲.耕地保护中的农民参与问题研究[D].湖南大学,公共管理,2013,硕士.
[20]陈宇.论我国法定夫妻财产制[D].华南理工大学,法律(专业学位),2012,硕士.
[21]吕伟彩.我国粮食安全预警评价研究[D].河北经贸大学,统计学,2012,硕士.
[22]郑福宝.类石墨烯纳米材料的电子结构及磁性[D].济南大学,2013.
[23]吴楠.石墨烯及其复合材料的制备与性能研究[D].青岛大学,材料学,2013,硕士.
[24]杜恒.镰形棘豆对大鼠心肌缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax表达的影响[D].青海大学,中西医结合临床,2012,硕士.
[25]宁月峰.中职会计专业课程体系重构初探[D].广东技术师范学院,职业教育,2014,硕士.
[26]景莹.英语委婉语语用失误原因及其策略研究[D].东北农业大学,英语语言文学,2013,硕士.
[27]赵琅.梁端加腋型节点域箱形加强式工字形柱弱轴连接单调荷载试验研究[D].长安大学,结构工程,2014,硕士.
[28]曹兴.临清坳陷上古生界碎屑岩储层特征及成岩作用研究[D].成都理工大学,地质学,2013,硕士.
[29]孔玲爽,阳春华,朱红求,桂卫华.基于专家知识的字典序优化决策方法及工业应用[J].控制与决策,2009,12:1909-1911+1916.
[30]李新潮,沈九江.重庆单轨交通多开道岔在联锁设计中的逻辑处理[J].电气化铁道.2004(04)
[31]杜逸伦.公路隧道供电系统可靠性的研究[D].长安大学,交通信息工程及控制,2013,硕士.
[32]叶剑元.民用航空器起落装架常见故障和可靠性分析[D].浙江工业大学,2012.
[33]李群河.TelseisStar遥测地震仪热敏绘图仪逻辑电源剖析与维修[J].石油地球物理勘探,1999,S1:135-138+141-150.
[34]范建平.我国农村义务教育供给困境研究[D].江西财经大学,财政学,2013,硕士.
[35]齐佳妮.牙周炎患者种植二期术后牙龈愈合状况的研究[D].山东大学,口腔临床医学(专业学位),2013,硕士.
[36]陈永禄.经高效熔体处理的易拉罐用铝材微观组织与力学性能研究[D].福州大学,2002.
[37]王合武.安徽省省直单位公务用车管理问题研究[D].安徽大学,公共管理,2012,硕士.
[38]黄越.复制缺陷型腺病毒Ad-pShuttle-CMV-p14ARF联合半夏凝集素对结肠癌细胞生长抑制的研究[D].浙江理工大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[39]王哲,杨林.商业银行的客户智能实践[J].软件工程师,2004,08:55-56.
[40]徐斌,何阳.大力推进动物检疫报检电子化全面提升报检服务水平[J].四川畜牧兽医,2003,11:19.
[41]周建文.红壤穿透阻力对玉米根系及水分关系的影响[D].华中农业大学,土壤学,2014,硕士.
[42]柳青.湖北省土地利用的碳排放测算研究[D].湖北大学,人文地理学,2012,硕士.
[43]张乾坤.高速宽带数字接收与恢复系统设计[D].西安电子科技大学,电路与系统,2012,硕士.
[44]饶舟.植物油改性阳离子水性聚氨酯的合成及性能研究[D].安徽大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[45]张士玺.荸荠采收船挖掘机理及结构设计研究[D].陕西科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[46]朱燕宾.京津唐地区1334例老年股骨颈骨折流行病学特征分析[D].河北医科大学,外科学,2014,硕士.
[47]曹阳,郭雪峰.基于石墨烯电极的高响应LB单分子膜晶体管研究[A].中国材料研究学会.2011中国材料研讨会论文摘要集[C].中国材料研究学会:,2011:1.
[48]廖巍.“以房养老”可行模式研究[D].华中师范大学,工商管理(专业学位),2014,硕士.
[49]杨焱.基于项目聚类的协同过滤推荐算法的研究[D].东北师范大学,2005.
[50]张莹.营改增试点对交通运输业的影响分析[D].华中师范大学,企业管理,2013,硕士.
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