猪链球菌2型无毒株05JY特性研究

【摘要】猪链球菌(Streptococcussuis,SS)是世界范围内一种重要的猪病原体,可导致心内膜炎、脑膜炎、关节炎、肺炎及败血症,给猪场造成巨大的经济损失。偶尔可见人感染此病并表现出与患病猪类似的症状。根据目前的报道,猪链球菌33个荚膜型在型与型之间及各型内部其毒力都存在差异。抗生素常被用来治疗和预防临床症状。疫苗的使用能减少抗生素的滥用。目前疫苗研究主要集中在血清2型,方法主要包括反向疫苗学方法、免疫蛋白质组学方法、基因表达文库构建和其它传统方法。本试验,对猪链球菌2型无毒株05JY进行研究以期进一步了解SS2强毒株的致病机理,同时探讨其作为安全、有效SS2活疫苗候选菌株的可行性。1.猪链球菌2型05JY生物学特性分析及主要毒力因子分布特点：通过对猪链球菌2型05JY多种生物学特性及毒力基因分布特点的研究来了解本菌株与强毒株ZY05719之间的异同点。试验发现05JY的生长趋势及光镜下的细胞形态与强毒株无明显差别,而两菌株在菌落形态、电镜下细胞形态、溶血性及主要毒力因子分布特点上存在较大差异,具体表现为：在同样的条件下培养05JY的菌落直径较大、透射电镜下无荚膜、血平板上不形成溶血环,主要毒力因子基因型为：cps2j+gdh+Impdh+fbps+orf2+epf-sly-,缺少两种重要的毒力因子epf和slf。试验说明猪链球菌2型05JY与强毒株ZY05719在致病性相关特征上存在明显差异。为证明猪链球菌2型05JY是无毒菌株提供了理论依据。2.猪链球菌2型菌株05JY安全性试验及药物敏感试验：本试验为了判断猪链球菌2型05JY的安全性,将05JY复壮株与强毒株ZY05719同时以相同剂量(109CFU)对Balb/c小鼠、新西兰兔、外三元猪进行攻毒。观察各试验动物的临床症状和死亡率及小鼠的病理变化。另外,通过药物敏感性试验来判断05JY对主要抗生素的敏感性。结果,05JY试验组各试验动物均无死亡发生且无发病现象,而强毒株ZY05719组试验动物均相继死亡,同时药敏试验证明05JY对多种抗生素高度敏感。表明猪链球菌2型05JY是天然存在的无毒菌株,且生物安全性好。3.猪链球菌2型无毒菌株05JY在小鼠体内定植能力检测为了评估猪链球菌2型菌株05JY在小鼠体内的定植能力。本试验在Balb/c小鼠体内注射了一定量的05JY菌株,攻毒后1-10天内隔天对小鼠体内的细菌进行分离计数,并在第7天时采取试验组中3只小鼠的肝、心、脾、肺、肾、脑进行免疫组织化学实验。实验结果显示猪链球菌2型无毒菌株05JY能在小鼠体内定植。其定植时间与强毒株基本相同,但其定植能力明显没有ZY05719强。表明猪链球菌2型无毒菌株05JY具备研制成无毒活疫苗的潜力。4.猪链球菌2型无毒菌株05JY免疫保护性研究为了研究猪链球菌2型菌株05JY的免疫保护性,本试验用05JY对CD1小鼠、新西兰兔、外三元猪进行免疫,对免疫后的实验动物攻强毒。观察攻毒后各试验动物的临床症状及死亡情况。我们发现在CD1小鼠试验中：05JY一免组的保护率为44.4%,二免组的保护率为88.9%。新西兰兔和外三元猪只进行了一次免疫。在新西兰兔试验中05JY的免疫保护效率仅25%,但免疫组明显有延迟小鼠死亡的作用,且免疫组的全血抑菌能力显著强于对照组。在外三元猪试验中05JY免疫组和对照组攻毒后在死亡率上没有表现出差异,但是免疫组的全血抑菌能力显著强于对照组。结果显示05JY对猪链球菌2型易感动物具有一定的免疫保护作用,但是从试验中可以看出一次免疫保护效率很低,需要进行二次免疫或其他处理才有可能对动物提供确实的保护效力。5.猪链球菌2型无毒菌株05JY与强毒株ZY05719分泌蛋白的蛋白组学比较为了比较猪链球菌2型无毒株05JY与强毒株ZY05719分泌蛋白的异同,采用比较蛋白组学的方法,比较了SS2强毒株ZY05719与无毒株05JY分泌蛋白的二维表达图谱,在弱毒株与强毒株之间,共有9个差异蛋白点被发现,其中被生物质谱成功鉴定出来的有包括EF等在内的6个蛋白点,其中2个差异点同属一种蛋白。根据差异蛋白的基因合成了5对引物。以2株猪链球菌2型菌株的DNA为模板进行扩增。其中一对引物仅在无毒菌株中扩增出,另一对仅在强毒株中扩增出,其它3对引物在两株细菌中均扩增出相应基因。
【作者】虞凤；
【导师】何孔旺；范红结；
【作者基本信息】南京农业大学，预防兽医学，2013，硕士
【关键词】猪链球菌2型；05JY；候选疫苗；蛋白质组学；

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