亚急性瘤胃酸中毒（SARA）对山羊肝脏免疫机能的影响

【摘要】反刍动物亚急性瘤胃酸中毒(Subacuteruminalacidosis,SARA)是一种多发性代谢性疾病,常见于现代化的奶牛养殖场,该病易引起瘤胃内微生物区系的紊乱、蹄叶炎、肝脏脓肿及乳成分结构改变,严重影响奶牛健康和生产性能。目前关于SARA的报道大多集中于诊断防治及生化指标的检测上,但是关于SARA对肝脏免疫机能影响的研究甚少。肝脏免疫机能的改变可能会导致肝脏物质代谢的紊乱,从而影响乳成分前体物的重分配,引起乳品质的下降。本文旨在研究高精料诱导SARA时瘤胃异常代谢产物脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)含量的变化,以及对肝脏免疫机能的影响。1.SARA对干乳期山羊肝脏免疫和下丘脑食欲调节因子的影响实验选用12只本地干乳期山羊,随机分为对照组和SARA组,分别饲喂精粗比为40：60和60：40的饲料,实验期21天。实验结束时采集瘤胃液、血液、肝脏等样品,pH计迅速测定瘤胃液pH值,并测定瘤胃液中乳酸含量；采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测血液中细胞因子TNF-a(Tumornecrosisfactor-a,TNF-a),IL-6(Interleukin-6,IL-6)、IL-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和急性期蛋白血清淀粉样蛋白A(SerumamyloidA,SAA)、触珠蛋白(haptoglobin,HP)、脂多糖结合蛋白(Lipopolysaccharide-bindinprotein)的浓度；Real-timePCR和Westernblot方法从mRNA和蛋白水平检测了TLR4通路相关基因及下游细胞因子在肝脏、下丘脑、海马中的表达水平,并检测了肝脏中急性期蛋白和下丘脑摄食调节功能相关基因的表达。结果显示：(1)精粗比60：40日粮饲喂2周后成功建立山羊SARA模型(SARA组),采食后瘤胃液pH值低于5.8且持续时间约3h,而精粗比为4：6组(对照组)山羊瘤胃液pH均高于6.0；(2)乳酸在采食后2-4小时之间下降,6-8小时逐渐增加,但两组间无显著差异(P>0.05)。(3)SARA组山羊血浆中IL-1β、HP含量显著高于对照组(P<0.05),血浆TNF-a水平相对于对照组有升高趋势(0.05<P<0.1)。(4)肝脏中TLR4(Toll-likereceptor4,Toll样受体4)及细胞因子表达没有显著差异(P>0.05),但急性期蛋白SAA和HPmRNA显著上调(P<0.05)。(5)SARA组下丘脑TLR4、髓样分化因子(Myeloiddifferentiationprimaryresponsegene88,MyD88)及TNF-a表达上调(P<0.05),刺鼠相关蛋白(Agouti-relatedprotein,AgRP)基因表达显著下调(P<0.05),神经肽Y(NeuropeptideY,NPY)基因表达有下调的趋势(0.05<P<0.1),但SARA组山羊下丘脑中前阿片黑素细胞皮质激素(Pro-opiomelanocortin,POMC)和促黑激素受体4(Melanocortinreceptor4,MCR4)的基因表达均无显著性变化(P>0.05)。2.SARA对泌乳中期山羊泌乳和肝脏免疫机能的影响(1)短期试验：选用7只处于泌乳中期的本地山羊,手术安装永久性瘤胃瘘管,随机分为两组,分别饲喂精粗比为40：60和60：40的饲料,2×2拉丁方设计,实验分两期,每期14d。采集瘤胃液并测定pH和乳酸含量；检测血液中LPS和细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6的水平；检测肝脏TLR4和细胞因子的基因表达。结果：精粗比60：40日粮饲喂泌乳期山羊2周后成功诱导SARA(SARA组),采食后瘤胃液pH值低于5.8且持续时间约6h,SARA组山羊瘤胃液中乳酸和LPS含量都显著高于对照组(P<0.05)。SARA对血浆中TNF-a和IL-1p含量有显著影响(P<0.05),但不影响肝脏TLR4、TNF-a、IL-1βmRNA的表达(P>0.05)。以上结果提示：SARA导致瘤胃中乳酸的积累以及瘤胃异常代谢产物LPS的增加,但泌乳山羊经历短期SARA时肝脏对LPS不产生应答反应,不改变TLR4及下游信号分子的转录水平。(2)长期试验：选择8只泌乳中期的萨能奶山羊,手术安装永久性瘤胃瘘管,随机分为对照组(n=4)和SARA组(n=4),分别饲喂精粗比为40：60和60：40的饲料,实验期为9周。每天记录山羊的产奶量和健康状况；每两周测一次乳成分含量和瘤胃pH值；采样后测定血中细胞因子TNF-a、IL-6及急性期蛋白SAA、LBP、HP的含量；检测肝脏中TLR4、TLR2、MyD88、CD14,细胞因子TNF-a、IL-1β,急性期蛋白SAA、C-反应蛋白(C-reactionprotein,CRP)、LBP、HP的基因表达；采用westernblot方法检测肝脏组织中TLR4和p65的蛋白表达水平。结果显示：(1)高精料(60%)饲喂山羊2周后山羊出现SARA现象,饲喂4周后由于对饲料的适应和瘤胃缓冲能力的增加瘤胃pH增加,但仍显著低于对照组山羊(P<0.05)。与对照组山羊相比,SARA山羊采食前瘤胃液中乳酸浓度有升高趋势(0.05<P<0.1)；LPS浓度无显著变化(P>0.05)。(2)SARA组奶产量一直极显著高于对照组(P<0.01)；第6-9周乳蛋白和乳脂水平都显著低于对照组(P<0.05),第2周乳脂水平极显著低于对照组(P<0.01)；第8周乳糖水平显著高于对照组(P<0.05),乳中体细胞数显著高于对照组。(3)与对照组相比,SARA组山羊血浆TNF-a水平有显著影响(P<0.05),血浆IL-6浓度有升高趋势(0.05<P<0.1)；血浆急性期蛋白SAA显著升高(P<0.05),HP有升高趋势(0.05<P<0.1),LBP水平没有显著差异(P>0.05)。(4)与对照组相比,SARA组山羊肝脏中TLR4mRNA水平显著上调(P<0.05),蛋白表达也有升高迹象,p65表达有。TLR2、CD14、MyD88和TNF-α表达没有显著差异(P>0.05),细胞因子IL-1p显著上调(P<0.05);急性期蛋白SAA、CRP、HP表达显著增加(P<0.05),与血浆中的蛋白含量基本一致；但两组山羊肝脏中LBP基因表达无显著差异(P>0.05)。
【作者】王绍庆；
【导师】倪迎冬；
【作者基本信息】南京农业大学，基础兽医学，2013，硕士
【关键词】SARA；LPS；TLR4；细胞因子；急性期蛋白；肝脏；山羊；

【参考文献】
[1]杨金灿.政治信任视域下处理我国群体性突发事件的对策研究[D].湖南师范大学,政治学理论,2013,硕士.
[2]李赛.纳米α-MnO_2的制备及对邻二甲苯深度催化氧化性能研究[D].河北师范大学,有机化学,2012,硕士.
[3]赵杰.N-异丙基丙烯酰胺基温敏性可注射溶胶—凝胶体系的制备及性能研究[D].上海大学,应用化学,2013,硕士.
[4]张蕾.联合测定CEA、CYFRA21-1、NSE、Fbg和D-D在肺癌患者中的表达[D].郑州大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[5]高晓佳.涉及分担值的整函数的唯一性[D].云南师范大学,基础数学,2013,硕士.
[6]钟国坤,曾碧,余永权.基于异位交叉的遗传算法的研究[J].控制与决策,2003,03:361-363.
[7]刘帅奇,胡绍海,肖扬.基于稀疏表示的Shearlet域SAR图像去噪[J].电子与信息学报,2012,09:2110-2115.
[8]张英.天津乙烯两聚产品营销策略研究[D].天津大学,企业管理,2004,硕士.
[9]张景涛.基于多智能体的过程企业ERP体系结构研究[J].数量经济技术经济研究,2003,04:113-116.
[10]曹斌,涂序彦,赵解杨,刘劲波.基于分解-协调方法的协同设计(DCCD)研究[J].计算机科学,2002,07:130-132.
[11]冯世敬.天然纤维复合PVFM悬浮填料的制备及其在污水处理中的应用[D].郑州大学,环境工程,2013,硕士.
[12]葛维挺,黄彦钦,郑树.生物样本库主动式管理的探讨与尝试[J].中国肿瘤,2015,04:257-261.
[13]冯学静.基于不同厌氧历时条件下倒置A~2/O工艺除磷机理的试验研究[D].青岛理工大学,市政工程,2012,硕士.
[14]鲁亚峰.Android系统上基于权限组合的用户隐私保护[D].南京大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[15]王伟.我国远程教育发展策略研究[D].大连理工大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[16]谢娇艳.等熵Chaplygin磁流体力学方程组的Riemann解研究[D].新疆大学,基础数学,2013,硕士.
[17]欧平.小班幼儿生活常规习得的研究[D].华中师范大学,学前教育,2013,硕士.
[18]谭檑华.黄酒固定化发酵及其高级醇含量的控制研究[D].浙江工商大学,食品科学与工程,2013,硕士.
[19]奈存剑.虚拟化数据管理平台研究[D].华中科技大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[20]田继斌.碳纳米管官能化以及对T1000碳纤维/环氧树脂复合材料性能的影响[D].北京化工大学,2009.
[21]吕一平.诉前离婚协议的性质和效力[D].大连海事大学,法律,2014,硕士.
[22]邱光美.三唑类配体配合物的合成、表征及生物活性研究[D].西南交通大学,微生物与生化药学,2013,硕士.
[23]翟羽.贵阳电信公司网络故障处理系统的研究与设计[D].云南大学,软件工程,2012,硕士.
[24]孔炜,刘国明,孙慧斌,陈满朝.二维地震剖面的时间、振幅及相位最小平方校正[J].石油地球物理勘探,1998,S1:150-154+163-178.
[25]陈铮玲.二战后埃及社会保障制度研究[D].山西师范大学,世界史,2014,硕士.
[26]孙艳.输配电网综合无功补偿方法的研究[D].东北大学,控制理论与控制工程,2009,硕士.
[27]周佳.时间序列无失真压缩算法的研究[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2011,硕士.
[28]尚晓莉.我国高技术产品出口影响因素研究[D].河北经贸大学,国际贸易学,2013,硕士.
[29]李娟.泰国学生汉语学习策略调查以及教师教学法的改进[D].西安外国语大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[30]张小勇.基于角色的访问控制模型在Web信息系统中的设计与实现[D].南京理工大学,计算机技术,2011,硕士.
[31]郭淑红.论《税收征管法》中私法措施的适用兼议构建税务诉讼[D].四川大学,法律,2003,硕士.
[32]甄翊灵.徐乾学学术思想研究[D].湖南师范大学,中国古典文献学,2013,硕士.
[33]吕超群,田汉勤,黄耀.陆地生态系统氮沉降增加的生态效应[J].植物生态学报,2007,02:205-218.
[34]张月香.不同成就目标玩家在教育游戏中的学业情绪分析[D].南京师范大学,教育技术学,2012,硕士.
[35]范舒.论C2C平台提供商对商标侵权的事前注意义务[D].南京大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[36]王彬.C公司海洋工程生活区设计项目管理研究[D].吉林大学,工商管理,2014,硕士.
[37]卢明玉.英语多媒体教学中的“学理性”教学模式[J].教育现代化,2014,02:55-57.
[38]怀立婷.基于高速铁路的密钥服务器的研究[D].西安电子科技大学,计算机应用技术,2011,硕士.
[39]颜拥,文福拴,杨首晖,IainMACGILL.考虑风电出力波动性的发电调度(英文)[J].电力系统自动化,2010,06:79-88.
[40]肖文贵.迷人的HP激光打印机世界[J].今日电子.1993(03)
[41]何鑫.餐厅服务接触中顾客感知兼容性对其满意度的影响研究[D].华侨大学,旅游管理,2014,硕士.
[42]张玥.周期性边界条件下的类Casimir效应[D].东北师范大学,理论物理,2012,硕士.
[43]张红梅.传统文化生态视野下的小学汉字教学探索[D].山东师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[44]刘龙,韩崇昭,刘丁,梁盈富.一种新的基于吉布斯随机场的视频运动对象分割算法[J].自动化学报,2007,06:608-614.
[45]罗辑,杨忠,杨清伟.贡嘎山森林生物量和生产力的研究[J].植物生态学报,2000,02:191-196.
[46]郝娜,宋瑞,刘星材.基于成本最小的公交人员排班优化模型[J].山东科学,2014,02:76-82.
[47]李俊英.建设项目D-B模式的运行机制研究[D].武汉理工大学,土木工程建造与管理,2012,硕士.
[48]詹永顺.护士职业保障机制研究[D].山东大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[49]宋瑶瑶.洪宗礼语文教学智慧探析[D].山东师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[50]张汉嘉.关于渔政管理学基本工作原则的探讨[J].现代渔业信息.1994(12)