三萜、多糖高产灵芝菌株育种及生物特性测定

【摘要】本研究通过对实验室灵芝菌株进行袋栽和液体发酵实验,筛选优良菌株,结合亲缘分析结果确定杂交实验的亲本菌株。通过原生质体单核体技术获得亲本的单核菌株,随后进行单单杂交获得杂交菌株。再对得到的杂交菌株进行SRAP和ISSR分子标记鉴定,之后通过分析其生物学特性,包括测定灵芝多糖、三萜的含量来筛选出优秀的灵芝杂交菌株。通过灵芝袋栽和液体发酵实验,分别对灵芝子实体和液体发酵菌丝进行生物特性及多糖、三萜的含量进行测定获得了各项指标突出的亲本菌株,结合亲缘关系分析,选择了亲缘关系较远且优秀性状互补的亲本菌株进行配对杂交。通过原生质体单核化技术分别获取了各亲本菌株的单核菌株,共挑取再生单菌落1206个,最终筛选到各个亲本菌株单核体共107个,单核化率为8.87%。按照分析确定的杂交组合进行单核菌株单单杂交,共培养了967个单单杂交组合,经过杂交菌株纯化,最终得到的杂交菌株数量共计27个,杂交成功率为2.79%。首先,通过观察锁状联合和拮抗反应对获得的杂交菌株进行初步鉴定,之后又通过SRAP和ISSR等分子标记的方法对杂交菌株进行进一步验证,实验结果显示杂交菌株明显不同于两株双核亲本菌株,其遗传特性分别源自于各自的两株不同单核亲本菌株。将两种背景下获得的杂交菌株分别进行袋栽和液体发酵实验,并测定子实体、液体发酵菌丝的于重以及子实体和液体发酵菌丝的三萜及多糖含量,对杂交菌株进行评价,实验结果显示,杂交菌株0520-3可作为液体发酵菌丝高产新菌株,而杂交菌株0520-5不但胞内多糖含量较亲本显著增加,发酵生物量也较亲本略有提高,可作为灵芝多糖生产的优秀新菌株。
【作者】袁术斌；
【导师】赵明文；
【作者基本信息】南京农业大学，生物工程，2013，硕士
【关键词】灵芝；原生质体单核化；杂交；分子标记；三萜；多糖；

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