小鼠卵母细胞和早期胚胎发育过程中Glisl及Tcll的表达与定位

【摘要】全能性是指在有机体中(包括胚外组织)的一种单核细胞有能力分裂并能产生其他功能性细胞的细胞,及说明其有全能性。哺乳动物的发育是由单个的受精卵开始的,而受精卵是公认的具有全能性的细胞,它可以发育成整个生物体及各个细胞类型。而近期有研究表明,小鼠早期胚胎发育的细胞分化,最早可以追溯到四细胞胚胎。当细胞发育到8细胞时期以后,部分细胞将失去全能性,进入分化阶段。之后胚胎发育到囊胚阶段,该阶段的囊胚内细胞团是早期干细胞的来源,也是具有全能性的一类细胞。整个生物体发育开始于高度分化的卵母细胞,经过受精作用启动重编程作用,使得受精卵具有了全能性。整个过程使得由单个细胞发育成整个生物体成为了可能。而所有的细胞类型中,除了早期胚胎外,还有其他具有全能性的细胞,如干细胞、肿瘤细胞及iPS细胞等。Glis1这个转录因子属于锌指结构蛋白,每一个指结构一个保守序列Glis1含有789个氨基酸残基,可以与DNA公共序列5’-GACCACCCAC-3’结合,既是转录活化因子也是抑制因子,参与细胞增生、上皮炎症、牛皮癣、出生缺陷、肿瘤等,其mRNA表达可被PMA或γ干扰素所诱导。Maekawa等(2011)把Glis1与OSK三因子共转人和小鼠的成纤维细胞,显著提高iPSCs克隆数量,并减少非iPSCs克隆数量,使体外高效获得多能性细胞成为可能。这提示我们Glis1在细胞卵母细胞及早期胚胎发育中可能发挥着重要作用。原癌基因Tcl1(T细胞白血病1)家族蛋白质首次发现在易位的人类T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)。原癌基因TCL1家族包含106,114,和128个氨基酸,分别为MTCP1,Tel1,及Tcl1b蛋白质,且预测的分子量为13(MTCP1),14(Tel1),15(Tcl1b)kDa。这些氨基酸有一个较高的序列同源序列。Tcl1与Akt的互动具有功能性,现已证明Tcl1可提高Akt激酶活性,因此TCL1可作为Akt激酶辅激活物。另有报道PKB通过PKB/Akt途径,在小鼠受精卵早期调节胚胎发育。但Tcl1是否参与到小鼠胚胎早期发育过程,甚至在PKB/Akt途径中参与调剂还没有报道。本实验以昆明白小鼠卵母细胞和早期胚胎作为主要实验材料,应用免疫荧光、RT-PCR技术及显微注射等技术,对Glis1及Tcl1在相关发育过程中的表达与分布的进行了较为系统的研究。本实验获得的结果表明：小鼠免疫荧光结果显示,伴随卵母细胞及早期胚胎发育，Glis1蛋白及Tc11蛋白在卵母细胞中均有不同程度的分布。并随受精的进行,卵母细胞时期储备的蛋白有一定程度的消耗。受精卵发育到2-细胞期,免疫荧光染色显示细胞核及细胞质内蛋白的分布没有差异;之后随着细胞分裂的进行,胞核内重新聚集这两种蛋白,并随着胚胎的发育,mRNA的表达及蛋白量逐渐降低,直至囊胚期降为最低。Glis1的显微注射结果表明,干扰Glis1蛋白作用,会降低胚胎的发育率,但结果不显著。
【作者】付行；
【导师】刘红林；李娟；
【作者基本信息】南京农业大学，动物遗传育种与繁殖，2013，硕士
【关键词】小鼠；胚胎发育；Glis1；Tcl1；

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