猪痢疾短螺旋体的检测、感染情况调查及免疫原性的初步研究

【摘要】猪痢疾(Swinedysentery,SD)是由猪痢疾短螺旋体(Brachyspirahyosenteriae,B.hyo)引起的一种危害比较严重的肠道传染病。主要致病部位在结肠,引起猪的粘液性、出血性下痢,严重时还可引起猪的死亡。猪痢疾短螺旋体两端尖呈蛇形,长约6μm～8.5μm,直径为320～380nm,多为4-6个疏螺弯曲,为革兰氏阴性菌,厌氧,对生长条件较为苛刻,分离较为困难。该病是猪肠道综合征的重要病原之一,造成猪的生长缓慢、饲料利用率低和成本增加,世界范围广泛流行,特别是发达国家,造成了严重的经济损失。相比国外,国内的相关研究还比较少,因此,有必要进行其流行病学的调查和相关特性的研究。下面就从以下三个方面对本文的研究做个简要概括：1TaqMan-MGB实时荧光定量PCR快速检测猪痢疾短螺旋体的研究为了提高猪痢疾短螺旋体的阳性检测率,针对保守保守的NADHoxidase(nox)基因设计合成了一对引物和相应的探针,经过优化方法和条件,建立了TaqMan-MGB实时荧光定量PCR方法,并且通过试验验证了此方法具有高度特异性、高灵敏度及较好的重复性。用构建的重组质粒建立了标准曲线,线性相关系数为0.99,具有良好的线性关系,可以检测最低为2.17个拷贝数的菌量,且没有交叉反应。对107份样本DNA进行检测后,同普通PCR相比较,结果显示该方法敏感、准确。此外,相比普通方法,该方法还具有耗时短,可以准确定量等特点,可以广泛用于猪场屠宰场的猪痢疾的检测和流行病学的调查。2上海及周边地区猪场猪痢疾短螺旋体病感染调查为了更好地了解此病在各地猪场的感染情况和流行情况,自2010年10月份至2012年12月份从上海市动物疫病预防控制中心门诊室,上海地区的五个屠宰场以及上海、浙江、河南等地的规模化猪场采集了猪结肠和粪便临床样本624份。利用所建立的方法对其进行检测,结果显示不同症状、不同周龄的样本,阳性率也不同,其中腹泻症状为15%,无腹泻症状为1.93%,2-5周龄、6-9周龄、10~13周龄、14~17周龄和18~19周龄的猪痢疾短螺旋体的阳性检出率分别为14%、22%、32%、13%、8.2%,屠宰场的阳性率很低,所检样本平均感染率为8.49%。猪群中仔猪和育成猪的感染率较高。通过厌氧培养成功分离得到一株猪痢疾短螺旋体SH-BH-1。上海及其周边地区猪痢疾感染情况的调查为今后防控此病有了可靠的依据。3猪痢疾短螺旋体外膜蛋白BlpA原核表达、纯化与免疫原性分析根据猪痢疾短螺旋体外膜蛋白BlpA的基因序列,在NCBI上进行比对分析后,设计引物,利用基因工程技术将目的片段导入表达载体pET-28a(+)中,重组质粒经PCR鉴定、酶切和测序正确后,将重组质粒转化至表达菌株BL21(DE3)plysS,再经IPTG诱导和SDS-PAGE鉴定得到大小为29.6kDa的目的蛋白。将纯化的蛋白对小鼠进行免疫刺激,通过ELISA的方法检测到免疫重组蛋白能够在小鼠体内诱导较高水平的特异性IgG抗体。
【作者】袁万军；
【导师】刘佩红；姚火春；
【作者基本信息】南京农业大学，预防兽医学，2013，硕士
【关键词】猪痢疾短螺旋体；荧光定量PCR；感染调查；BlpA；原核表达；免疫刺激；

【参考文献】
[1]司徒功云.转轨时期中国国有企业高管激励和约束问题研究[D].南京大学,政治经济学,2014,博士.
[2]俞志刚.无线传感器网络中基于被动监测的协议性能评估技术研究[D].杭州电子科技大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[3]黎文凯.韩国语动词‘（？）’的意义体系研究[D].黑龙江大学,亚非语言文学,2013,硕士.
[4]刘宸旭,颜鲁婷,李静.改性废旧岩棉处理污水的应用研究[J].环境污染与防治,2014,02:15-18.
[5]刘增力.蒙古绵羊胚胎肾脏的组织学发生[D].内蒙古农业大学,基础兽医学,2004,硕士.
[6]俞凌艳.异域文化融合下的历史建筑文化传承与发展城市设计研究[D].安徽建筑大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[7]刘颂.电子商务职业分类体系构建研究[D].华中师范大学,情报学,2014,硕士.
[8]张俊英.天津市种业现状与对策研究[D].中国农业大学,种植业,2004,硕士.
[9]刘国兴.饥饿、盐度和密度胁迫对克氏原螯虾行为和生理功能的影响[D].扬州大学,水生生物学,2011,硕士.
[10]黄学敏.Au-Ag合金纳米颗粒的制备与催化应用[D].上海大学,材料加工工程,2013,硕士.
[11]杨帆.新生期不同剂量双酚A暴露对雌性大鼠青春发育的影响[D].苏州大学,儿科学,2014,硕士.
[12]唐钊.发动机冷却风扇叶片参数的研究和优化[D].华南理工大学,车辆工程,2012,硕士.
[13]汪涛.数据挖掘在隧道交通中的应用[D].长安大学,2003.
[14]文家武.基于数字地价模型的基准地价更新及应用研究[D].华中师范大学,土地资源管理,2013,硕士.
[15]闫秋君.论绝海中津的《蕉坚稿》对中国古典文学的受容[D].吉林大学,日语语言文学,2014,硕士.
[16]潘芳芳.基于偏误分析的对外汉语程度副词教学研究[D].天津大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[17]孙和平.晚第四纪平阴地区黄土剖面粒度特征及其环境意义[D].山东师范大学,自然地理学,2013,硕士.
[18]郑梦月.空间构筑：书籍设计的新维度[D].厦门大学,设计艺术学,2014,硕士.
[19]郭晓霞.菏泽市民办幼儿园安全问题探析[D].山东师范大学,公共管理,2012,硕士.
[20]崔伟伟.东莨菪内酯诱导烟草对青枯病的抗性及其作用机理研究[D].西南大学,农药学,2014,硕士.
[21]张之伟.零售企业配送中心的易逝品库存控制与门店配送研究[D].北京交通大学,2013.
[22]GavrielSalvendy,郑力,赵晓波.新千年的工业工程[J].工业工程与管理,2002,03:1-3.
[23]闫自庚,蒋建国,郭丹.基于SURF特征和Delaunay三角网格的图像匹配[J].自动化学报,2014,06:1216-1222.
[24]李含.蒙古族那达慕发展现状及学校传承路径研究[D].吉林大学,体育（专业学位）,2014,硕士.
[25]黄冠.我国政府公共危机管理中的媒体运用问题研究[D].长安大学,行政管理,2013,硕士.
[26]刘凡.植物甾醇添加剂对日本鹌鹑IGF-1和肾上腺功能的影响[D].南京农业大学,动物营养与饲料科学,2011,硕士.
[27]张硕.间伐对油松人工林生长和水分利用效率的影响[D].北京林业大学,森林培育,2013,硕士.
[28]夏颖.合肥地区先秦时期的考古发现[D].安徽大学,考古与博物馆学,2013,硕士.
[29]王大明.聚苯胺合成及气体传感性能研究[D].东北大学,物理化学,2010,硕士.
[30]苏菀.从《水之嬉戏》到《镜子》[D].西安音乐学院,和声,2014,硕士.
[31]张秀媛,杨新苗,闫琰.城市交通能耗和碳排放统计测算方法研究[J].中国软科学,2014,06:142-150.
[32]韩哲哲.电力系统混沌振荡控制策略研究[D].天津理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[33]黄奎.大面积高质量石墨烯的制备与表征[D].苏州大学,光学工程,2013,硕士.
[34]王冰.企业内部知识转移绩效综合评价研究[D].华侨大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[35]刘春辉.20-30岁人群不同强度走、跑、骑自行车能量消耗研究[D].南京体育学院,运动人体科学,2012,硕士.
[36]姜薇.丙酮丁醇梭菌对单糖和混合糖的利用[D].浙江大学,生物化工,2011,硕士.
[37]石学诚.新型存储器老化测试系统的实现[D].杭州电子科技大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[38]赵满桌.蒙古族英雄史诗理想主义审美性研究[D].内蒙古师范大学,文艺学,2013,硕士.
[39]杨向华.2013年江阴市2型糖尿病流行病学现状调查分析[D].苏州大学,临床医学,2014,硕士.
[40]王续.基于战略视角的建筑企业项目群管理模式研究[D].首都经济贸易大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[41]张丽颖.猪乙型脑炎病毒的分离鉴定、致弱及间接ELISA检测方法的建立[D].南京农业大学,预防兽医学,2011,硕士.
[42]平定乾.航母建设对军工股票投资机会的影响研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[43]张肃,程启月,申卯兴.基于区间数型多因素指派模型的多传感器优化分配方法[J].自动化学报,2008,03:240-245.
[44]范凤翠.河北省农业信息网络发展及应用的探析[D].中国农业大学,2005.
[45]封江东.BOT特许经营期测算理论与方法研究[D].武汉理工大学,土木工程建造与管理,2013,硕士.
[46]刘丹.《永别了，武器》中的动物原型分析[D].燕山大学,英语语言文学,2013,硕士.
[47]南亚会.基于S2SH框架印染生产过程信息系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机系统结构,2010,硕士.
[48]耿文文.跨境资金流动对山东省经济影响的实证研究[D].山东财经大学,统计学,2014,硕士.
[49]周泽岩.烟草物流配送调度综合优化方法的研究[D].北京交通大学,2013.
[50]李茂强.社会工作在家庭暴力干预中的运用[D].苏州大学,社会工作（专业学位）,2013,硕士.